韦玲 高淑红
(山东信谊制药有限公司 山东德州 253100)
复方利血平氨苯蝶啶片采用RH-HPLC法同时测定其4种有效成分的含量
韦玲 高淑红
(山东信谊制药有限公司 山东德州 253100)
目的:通过RH-HPLC法准确并同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中4种有效成分(包括氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平)的含量。方法:通过RH-HPLC法测定其4种有效成分含量,色谱柱 Eclipse XDB-C18;流动相:0.01 mol/L 庚烷磺酸钠溶液(用冰醋酸将其PH值调整为3.0);甲醇(40:60);检测波长:265nm;流速: 0.8 ml/min。结果:氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶线性范围为0.04 ~0.25 mg/ml, 利血平线性范围为0.5~2μg/ ml;4种有效成分回收率96%~105%,平均回收率102%。结论:采用RH-HPLC法能够准确、简单、迅速的同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平的含量,因此该种方法能够用于测定复方利血平氨苯蝶啶片的含量。
复方利血平氨苯蝶啶片 RH-HPLC 氢氯噻嗪 硫酸双肼屈嗪 氨苯蝶啶 利血平
复方利血平氨苯蝶啶片是一种复方制剂,它的主要成分包括氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平等,该制剂主要用于治疗轻中度高血压。按照国家药典委员会颁布的国家药品标准,采用不同波长和溶剂测定氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平的方法难度大且费用昂贵。本文旨在研究通过采用RH-HPLC法同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中4种有效成分的含量,具体情况报道如下:
1.1 仪器
Empower色谱工作站;MettlerXP-205电子天平;Agilent 1200高效液相色谱仪;MODEL HN1006 超声波清洁器。
1.2 试药
氢氯噻嗪(批号:100309-200702)、硫酸双肼屈嗪(批号:100514-200301)、氨苯蝶啶(批号: 100429-200401)和利血平(批号:100041-200311)对照品均由中国药品生物制品检定所提供,除氢氯噻嗪纯度为99.5%外,其余三种成分纯度均为100%。水为二次蒸馏水,庚烷磺酸钠为分析纯,甲醇为色谱纯。
2.1 确定检测波长
溶解氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶及利血平,观察外波长200 ~400 nm的扫描图谱发现159nm,310nm,272nm,265nm附近均有强吸收。由于利血平含量很少,但在265nm波长附近仍有强吸收,因此确定检测波长为265nm。
2.2 色谱柱
色谱柱 Eclipse XDB-C18;流动相:0.01 mol/L 庚烷磺酸钠溶液(用冰醋酸将其PH值调整为3.0);甲醇( 40:60);流速: 0.81 ml/min;进样量: 10μl、50μl;柱温:30℃。
3.1 对照品溶液制备
对照品溶液1:精密称取氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶各12.5mg,置于100ml的量瓶中,向量瓶中加入40ml甲醇,进行15min超声处理,加入40ml 5%的醋酸溶液后进行15min超声处理,冷却至室温。混合对照品储备液:精密称取10mg利血平置于100ml量瓶中,加入适量乙醇后进行15min超声处理,冷却至室温后用甲醇稀释,精密量取2ml该溶液倒入对照品溶液1中后用5%的醋酸溶液稀释至刻度。
3.2 供试品溶液制备
精密称取复方利血平氨苯蝶啶片1片量,置于100ml量瓶中,加入40ml甲醇后进行15min的超声处理,将其冷却至室温,用5%醋酸溶液进行稀释后摇匀并过滤。
3.3 专属性试验
根据上述色谱条件,对比对照品溶液和供试品溶液的分离度,结果供试品溶液中各组分间的分离度更好。
3.4 线性试验
精密量取适量的对照品混合储备液,用5%的醋酸溶液稀释成氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶0. 05、0.0625、0.10、0.125、0.15、0.25 mg / ml 及利血平0.4、0.5、0.8、1.0、1.2、2μg / ml 的混合对照品溶液,分别吸取10μg / ml、50μg / ml注入高效液相色谱仪,详细测定并绘制峰面积。线性回归方程的纵坐标为峰面积,横坐标为对照品进样量。氢氯噻嗪 y =39 115 + 250.92,r = 0. 999 5; 硫酸双肼屈嗪 y= 9 545 6x - 41.353,r = 0.9996; 氨苯蝶啶 y = 37 831x+ 117.73,r = 0. 9999; 利血平 y = 100. 66x - 2.5421,r = 1。
3.5 精密度及稳定性、重复性、回收率试验
通过测量溶液RSD(氢氯噻嗪为0. 08% ,硫酸双肼屈嗪0.22% ,氨苯蝶啶0.05% ,利血平 0.38%),表明RP-HPLC方法精密度良好;通过测定峰值RSD(氢氯噻嗪为0.23%,硫酸双肼屈嗪0. 44% ,氨苯蝶啶0.29% ,利血平 0.71%),表明该样品溶液具有良好的稳定性;通过测定计算,样品中氢氯噻嗪含量为99. 17% ; 硫酸双肼屈嗪含量为109.29% ; 氨苯蝶啶含量为98.23% ; 利血平含量为92.63%,表明该方法重复性较好;4种有效成分96%~105%,平均回收率102%(利血平均回收率105.22%,氢氯噻嗪平均回收率99.6%,硫酸双肼屈嗪平均回收率101.04%,氨苯蝶啶平均回收率99.46%)
3.8 测定样品含量
随机选取批号为 101101A、110105A、101006C 的3批样品进行测定。
氢氯噻嗪:(12.87±0.21)mg/g;硫酸双肼屈嗪(12.39±0.11)mg/g;氨苯蝶啶(11.47±0.03)mg/g;利血平(0.093±0.002)mg/ g。
采用复方利血平氨苯蝶啶片现行标准对相同批号为 101101A、110105A、101006C 的3批样品进行测定,鉴定结果平均偏差较小,测定结果基本一致。
综上所述,RH-HPLC方法能够用于有效、快速的测定复方利血平氨苯蝶啶片的含量。
[1]金鹏飞,邝咏梅,邹定,等.HPLC 同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中 3 种活性成分的含量[J].中国药学杂志,2011,46( 02) : 152 -155.
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1674-2060(2016)03-0228-01