美洲红点鲑不同授精方法的对比试验

◎ 文/苏子郡 焦文龙 卡伟 宋福俊 杨顺文

本试验通过对比美洲红点鲑不同人工授精方法，筛选出符合生产的最佳方式，从而提高美洲红点鲑鱼的受精率和发眼率，扩大发眼卵生产规模。试验表明，采用同步干导授精法受精率最高，为84.21%。试验可供相关从业者参考。

美洲红点鲑（Salvelinus fontinalis）属于鲑科红点鲑属，一个优良的鲑鳟鱼养殖品种，其生长速度比虹鳟快20%～30%，抗病力强，成活率高，其味道鲜美，刺少肉细，口感滑嫩。美洲红点鲑原产于加拿大东部的拉布拉多地区。我国从加拿大引进美洲红点鲑进行养殖已有二十余年，但是国内养殖的美洲红点鲑苗种来源主要依赖于进口，要大规模推广养殖美洲红点鲑，必须解决美洲红点鲑人工繁殖的技术问题，实现美洲红点鲑苗种生产国产化。

一、材料与方法

（一）试验材料

试验在甘肃省水产研究所的科研基地，国家级虹鳟良种场进行，位于甘肃省临夏县。选用美洲红点鲑成熟亲鱼，雌鱼2龄、体重大于900g/尾，雄鱼2龄、体重大于800g/尾。亲鱼身体健壮，无伤病、无畸形。

（二）亲鱼培育

亲鱼培育鱼池为长方形混凝土浇筑池塘。长宽深为40m×4m×0.9m，注排水方便。亲鱼在4℃～18℃水中培育，产卵前2个月水温应不高于12℃。放养量10kg/m3，雌雄比3:1。雌鱼产卵前1个月应将雄鱼分池饲养，以免雄鱼追逐咬伤雌鱼，以及便于雌鱼成熟度的定期检查。

（三）人工授精的方法

成熟亲鱼移入繁育车间，雌雄比为2:1。每次试验用2尾雌鱼，1尾雄鱼，受精完成和吸水膨胀后，随机称取部分卵子放入孵化槽进行孵化。不同组别孵化卵子的数量不超过150g，数量在2000粒以内，试验卵子单层排列在槽内，将干扰因素尽可能降到最低。

1.同步干导授精法

将雌雄鱼腹部用毛巾擦干，两人一起将卵子和精子挤到盆中并不停搅拌，使精卵充分混合，然后加入100mL ～200mL等渗液搅拌均匀，再加入清水激活精子进行受精，受精完成后洗去多余精液，放入塑料盆内静置1h，移入孵化槽内进行孵化。此方法授精时间短，鱼卵受精率高，但要求雌鱼成熟度一致，鱼卵质量高。

2.模拟自然授精法

将雌雄鱼腹部用毛巾擦干，在塑料盆内加入少许清水，直接将精子卵子同时挤到水里，边挤边搅拌，然后洗去多余精液，放入塑料盆内静置1h吸水膨胀后，移入孵化槽内孵化。此方法精子遇水即激活，授精时间较长，若搅拌不均匀，则影响受精率。

3.等渗液洗卵授精法

将雌鱼和雄鱼腹部用毛巾擦干，首先将卵子挤到带孔的塑料筐中，用等渗液淋洗后放入塑料盆中，再挤入精液，搅拌10s ～20s，加少许清水再搅拌1min，洗去多余精液，拣出发白的死卵，称取一定数量的受精卵，移入孵化槽内孵化。此方法用等渗液洗去破卵卵黄，能提高受精率，适用于雌鱼成熟度不一致有过熟卵的情况。

4.食盐水洗卵授精法

将雌鱼和雄鱼腹部用毛巾擦干，首先将卵子挤到带孔的塑料筐中，用1%食盐水淋洗后放入塑料盆中，再挤入精液，搅拌15s ～20s，加少许清水再搅拌1min，洗去多余精液，静置1h吸水膨胀后，拣出死卵，称取一定数量的受精卵，移入孵化槽内孵化。此方法食盐水洗液配比简单易操作，但食盐水成分与等渗液成分不一致，对鱼卵有一定应激作用。

5.等渗液中授精法

将雌鱼和雄鱼腹部用毛巾擦干，在塑料盆内加入少许等渗液，直接将精子卵子同时挤到等渗液里，边挤边搅拌1min，然后洗去多余精液，放入塑料盆内静置1h吸水膨胀后，拣出白色的死卵，称取一定数量的受精卵，移入孵化槽内孵化。此方法可以洗去破卵卵黄，但卵黄物质溶解在等渗液中，影响精子活力。

6.精液稀释液激活精子授精法

将雌鱼和雄鱼腹部用毛巾擦干，直接将精子卵子挤到塑料盆中，加少许精液稀释液（ASP）搅拌，再加入清水搅拌1min，洗去多余精液，放入塑料盆内静置1h吸水膨胀后，拣出发白的死卵，称取一定数量的受精卵，移入孵化槽内孵化。此方法能提高精液利用率，多用于雄鱼数量较少的情况。

（四）受精率及发眼率计算方法

1.受精率计算

在受精后的积温达到100℃·d时，选取适量受精卵，置于有鉴别液（鉴别液配方：蒸馏水1000mL、冰醋酸50mL、氯化钠7g。）的培养皿中，经过5min后进行辨识，这时用肉眼可以看到有白色细线状胚体的就是已受精卵，用自动选卵机分选计数，再按照受精卵所占的比值算出受精率。

2.发眼率计算

在各试验组受精卵积温达220℃·d时（发眼卵），取适量已到发眼期的受精卵用自动选卵机分选计数，观察到有明显眼点的卵就是已经受精并能正常发育的卵，反之为没有受精的卵（晶体卵）。将已发眼的卵与取样的受精卵数相比得出发眼率。

3.数据统计与分析

本试验进行多次重复试验，将计数统计的所有指标数据，通过Excel软件汇总计算，结果以各重复试验的平均数值表示。

二、试验结果

（一）不同授精方法的平均受精率

在水温为6℃时，美洲红点鲑鱼卵在1min之内受精完毕，6种不同授精方法的平均受精率见表1。

表1 几种不同授精方法的平均受精率

由表1可以看出同步干导授精法的受精率最高，为84.21%，食盐水洗卵授精法的受精率最低，为67.66%，与同步干导授精法相差16.55%，其余4种方法平均受精率依次为：等渗液洗卵授精法>模拟自然授精法>等渗液中授精法>精液稀释液激活精子授精法。

（二）不同授精方法的平均发眼率

在水温为3℃～6℃的微流水孵化条件下，表2为几种不同授精方法的平均发眼率。

表2 几种不同授精方法的平均发眼率

由表2可见，同步干导授精法的发眼率最高，为77.67%，精液稀释液激活精子授精法的发眼率最低，为68.31%。其他四种排序为等渗液中授精法＞等渗液洗卵授精法＞食盐水洗卵授精法＞模拟自然授精法。

三、分析与讨论

（一）影响美洲红点鲑卵子受精率及发眼率的因素

4℃～13℃的水温最适宜美洲红点鲑亲鱼性腺发育。如果水温高于15℃，采出的卵受精率、发眼率都很低。如果采卵前30d将亲鱼在低于13℃的水中饲养管理，采卵前20d水温下降至12℃以下，直到采卵旺盛期水温下降至10℃以下，才能保障采出鱼卵质量优良，有利于提高受精率和发眼率。

采用养分全面的亲鱼配方饲料也是提高受精率与发眼率的一种手段，有研究表明在饲料中添加维生素A、维生素E能够明显提高凡纳滨对虾的受精率，在鲑鱼育苗期也能增加受精率、卵的存活率和生长率，保护卵抵御恶劣条件的影响，且促成卵的成熟和提高生殖力，减少胚胎死亡。

人工采卵时由于挤压力度过大会造成鱼卵溃烂，溃烂鱼卵流出卵黄蛋白凝结精子从而影响精子活力。溃卵与发眼率成反比，当卵溃烂率大于3%时，发眼率几乎为零。为了降低破溃卵对人工孵化的负面影响，人们采用了多种方法，起初采用三种盐类调配的等渗洗卵授精法，采用这种方法能够使发眼率提高10%左右。因为目前使用鲑鳟鱼专用饲料，鱼卵质量大大提高，加之此法略复杂，养殖场已多不使用。

（二）不同人工授精方法对美洲红点鲑精子、卵子及受精效果的影响

由表1和表2可知，同步干导授精法的受精率与发眼率最高，这可能与试验用的美洲红点鲑亲鱼性腺成熟比较好，人工采卵过程中溃卵极少或没有溃卵有关。直接采用养殖用水激活精子进行授精，是人工养殖条件下的模拟鱼类自然受精。

在等渗液中授精与等渗液洗卵授精二者差异不显著，等渗液洗卵授精法是用等渗液冲洗掉溃卵溶出物，然后授精。而等渗液中授精是在等渗液中同时挤入精子和卵子受精后用清水洗去多余精子，等渗液能够延长精子激烈运动时间来提高受精率。

中国水产科学研究院黑龙江水产研究所王昭明等发现采用1%氯化钠代替等渗液对采出卵进行洗涤后授精，白点鲑的发眼率能够提高8.2%。对于食盐水洗卵授精法来说，尽管1%氯化钠能够延长精子激烈运动时间，但是其受精率低于等渗液洗卵授精法，这可能与物种的差异性有关。

在精液稀释液（ASP）中受精率与发眼率是最低的，由于精子在ASP中几乎不运动，处于静止状态，只是通过人工搅动来增加精子与卵相遇的机会，然后加水才能激活，所以受精率很低。

通过这几种方法的比较，去除亲鱼自身的原因，可以基本选定同步干导授精法来作为美洲红点鲑人工孵化的最佳授精方法。