血管内皮生长因子表达与肺癌预后的关系

张胜辉，王轶灵，王明松，曹 佳，费 苛，校宏兵

（同济大学附属上海市第十人民医院：1.胸心外科；2.普外科 200072）

目前肺癌被认为是世界上最常见的恶性肿瘤之一，通常的治疗方式有手术、化疗、放疗、中医中药辅助治疗等，然而肺癌患者的预后往往较差。随着分子生物学的发展和人类基因组学的重大突破，人们已注意到肿瘤组织细胞某些基因结构的改变、表达的改变以及蛋白功能的改变是影响其生物学活性的最根本因素。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）作为一种高度特异和高效的血管调控因子，目前已在多种肿瘤组织中被证实呈高表达，并被证实与肿瘤的生长密切相关［1］。为此作者应用免疫组化技术对78例肺癌组织中VEGF表达进行检测，探讨其表达水平与增殖细胞核抗原（PCNA）、p53表达、淋巴结转移和患者预后的关系。

1 临床资料

1.1一般资料 选取2001年1月至2004年12月在本院确诊为原发性肺癌进行手术切除并得到随访的78例患者。其中男56例，女22例；年龄45～71岁，平均58岁。鳞癌24例，腺癌38例，大细胞癌11例，腺鳞癌5例。按1997年UICC的肺癌TNM分期，78例患者术后病理分期为Ⅰ期18例，Ⅱa期及Ⅱb期27例，Ⅲa期33例。患者术后均行GP化疗方案化疗4个疗程，并随访5年。

1.2试剂 鼠抗人VEGF、p53、PCNA单抗和相应的二抗、三抗均为丹麦DAKO公司产品，一抗按1∶100稀释。免疫组化染色采用链霉卵白素－辣根过氧化酶法。

1.3实验方法 肿瘤组织常规用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片厚5μm。以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性肺癌组织为阳性对照。观察5个视野（×400），计算细胞阳性率。阳性细胞数小于10%为阴性，阳性细胞数大于或等于10%为阳性。其中阳性细胞数小于50%为低表达，≥50%为高表达。全部病例随访5年，统计生存期。

1.4统计学方法 两样本率比较用χ2检验。VEGF和PCNA、p53表达作等级相关分析。用Cox模型作多因素分析。生存期用时序检验。

2 结 果

2.1VEGF、PCNA和p53表达 VEGF阳性信号为棕黄色，定位于细胞质（插页Ⅱ图1、2）。78例肺癌中VEGF总表达阳性率为94.87%（74/78），VEGF高表达者为48.72%（38/78）、低表达者为51.28%（40/78）。不同组织学类型肺癌组织中VEGF表达阳性率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。PCNA和p53阳性反应于细胞核内，为红棕色颗粒。78例肺癌组织中p53表达阳性率为44.87%（35/78），PCNA表达阳性率为96.15%（75/78）。

图1 PVL组与SO组肠系膜组织学改变（HE染色，×100）

图2 PVL组与SO组VEGF免疫组化染色（×400）

2.2VEGF表达与PCNA和p53的关系 VEGF表达阳性肺癌组织中98.65%PCNA阳性（73/74），VEGF表达阴性肺癌组织中50.00%PCNA阳性（2/4），两组比较，差异有统计学意义（χ2＝24.955，P＜0.005）。VEGF高表达肺癌组织中p53表达阳性率为47.37%（18/38），VEGF低表达肺癌组织中p53表达阳性率为42.50%（17/40），两组比较，差异无统计学意义。等级相关分析显示，VEGF表达水平与PCNA呈明显正相关（rs＝0.568，P＜0.001），与p53表达零相关（rs＝0.217，P＞0.05）。

2.3VEGF表达与肿瘤TNM分期及淋巴结转移的关系 在78例患者中淋巴结转移53例，其中VEGF高表达32例，占60.38%（32/53）；无淋巴结转移25例，其中高表达6例，占24.00%（6/25），差异有统计学意义（χ2＝8.997，P＜0.005）。T1＋T2共32例，其中 VEGF高表达10例，占31.25%（10/32）；T346例，高表达28例，占60.87%（28/46），差异有统计学意义（χ2＝6.627，P＜0.05）。表明 VEGF与淋巴结转移和肿瘤体积密切相关。随肺癌组织VEGF表达增加，肺癌瘤体的体积明显增大，淋巴结转移明显增多。

2.4VEGF表达与肺癌患者生存率的关系 本组78例患者5年生存率为20.5%，VEGF高表达38例中5年生存率为5.3%；VEGF低表达40例中5年生存率为35.0%。VEGF高表达患者生存率比低表达者明显降低，差异有统计学意义（χ2＝10.569，P＜0.005）。

2.5Cox回归分析 对患者性别、年龄、瘤体大小（≤3cm、＞3cm）、淋巴结转移（N0、N1、N2）、TNM 分期（1997年 UICC分期法）、PCNA和VEGF表达的Cox比例风险模型分析（后退法），VEGF和PCNA可作为独立判断患者预后的指标。

3 讨 论

本研究结果显示，肺癌组织中VEGF表达总阳性率为94.87%，其中高表达者占48.72%；VEGF表达水平与PCNA表达呈明显正相关，提示VEGF可能作为肺癌的一种“自分泌”生长因子直接促进肿瘤细胞的增殖。

生存期随访结果表明，VEGF低表达的肺癌患者总生存期明显优于VEGF高表达患者；VEGF表达水平越高，患者预后越差。VEGF的过度表达提示肺癌患者的预后较差［2－3］。因此VEGF表达水平可作为评判肺癌预后的指标之一。目前有研究表明，肺癌患者外周血清中VEGF表达水平明显高于正常患者，因此外周血清VEGF表达水平有助于判断肺癌患者预后［4］。有研究表明，不仅VEGF过度表达与肺癌预后密切相关，VEGF受体也对肺癌预后起重要作用［5－6］，说明 VEGF在促进肿瘤血管生成和PCNA时可能还存在“外分泌”等其他调控机制，提示VEGF可能成为肺癌治疗的新的生物靶点［7］。

本研究结果亦证实，VEGF高表达患者发生淋巴结转移明显增加。有研究表明，在淋巴结转移的癌组织中VEGF表达水平明显高于原发灶；在对肺癌组织切片进行免疫组化染色时也见VEGF的表达在整个病灶并不均一［8］。提示在肺癌组织中可能存在VEGF表达水平不同的细胞亚群，VEGF表达水平高的细胞亚群具有更大的侵袭力和转移倾向，可以发生选择性转移，使得淋巴结转移灶更多是由VEGF表达水平高的癌细胞构成，因此转移灶中VEGF表达水平比原发灶高。此外VEGF促进肿瘤淋巴结转移还可能存在着不依赖于肿瘤血管形成的其他机制［9］。

总之，本研究结果显示，VEGF能促进肺癌生长和转移，VEGF表达水平可以作为判断肺癌预后指标之一。

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