应用微波技术将肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的研究

罗曼宇,吴 曼,刘树军*,罗 萍

(1.吉林大学白求恩医学部临床医学二系,吉林长春 130041;2.吉林大学白求恩医学部二院肾病内科,吉林长春 130041)

应用微波技术将肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的研究

罗曼宇1,吴 曼2,刘树军2*,罗 萍2

(1.吉林大学白求恩医学部临床医学二系,吉林长春 130041;2.吉林大学白求恩医学部二院肾病内科,吉林长春 130041)

目的探讨微波在肾穿刺冰余组织重制石蜡切片染色中的作用。方法应用微波技术对58例临床上怀疑急进性肾炎的肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的标本进行染色,并与常规切片染色结果比较。结果应用微波技术的58例怀疑急进性肾炎肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的染色结果与常规切片染色结果基本无差异。结论应用微波技术将肾穿刺冰余组织重制石蜡切片可弥补穿出的肾组织肾小球过少或缺失;制片染色省时且质量好。对临床快速准确做出病理诊断、指导治疗及判断预后有重要意义。

微波/诊断应用;穿刺术/方法;肾炎/诊断

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0885)

近年来微波技术广泛应用于标本的前期处理、光镜特殊染色以及免疫组织化学染色等领域,所用时间大大缩短,且背景也得到明显改善[1,2]。国内外对此报道较多,但是对应用微波技术将肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的研究目前报道较少。

1 材料与方法

1.1 仪器 EM-350S型SANYO牌家用微波炉:合肥三洋荣事达电器有限公司;BM-V型自动组织包埋机:湖北省医用电子仪器厂;ZH-3型石蜡切片用冷台:沈阳纵横高技术公司;半自动石蜡切片机:英国Thermo Shandon公司。

1.2 材料 58例标本为1998年8月-2008年10月我科临床上怀疑急进性肾炎患者的肾穿刺标本。每例肾穿刺标本分三部分,以备做免疫荧光、光镜和电镜(部分病例)检查。

1.3 病理检查 ①免疫荧光 冰冻切片免疫荧光检测,用异硫氰荧光素标记的羊抗人IgG、IgA、IgM、C3、C4、C1q及纤维蛋白原,用直接免疫荧光法;②光镜 常规石蜡切片进行HE、PAS、PASM、MASSON染色;③电镜检查根据临床需要个别病例送吉林大学基础医学院电镜室检查。

1.4 方法

1.4.1 肾穿刺冰余组织重制石蜡切片的制片染色方法:①肾穿刺活检取材应先尽量满足免疫荧光的冰冻组织,待冰冻切片切完后,在冰冻切片机内迅速取出冰余肾组织放入盛有生理盐水的安瓶内,4℃环境下浸泡 15min,然后取出冰余肾组织立即放入10%中性甲醛固定液中进行微波(600 W)固定20 s;②组织脱水:80%、85%、90%、95%、100%及100%乙醇中进行微波(600 W)脱水各15 s,总计90 s;③透明:二甲苯Ⅰ、Ⅱ在微波(600 W)中各15 s,总计30 s;④浸蜡:常规浸蜡,蜡缸 Ⅰ、Ⅱ各10 min;⑤包埋、切片及烤片:用自动组织包埋机包埋,冷台冷却蜡快,切片厚0.5 μ m,60℃烤箱中烤片1h;⑥常规脱蜡至水,以备染色;⑦染色:HE、PAS按常规染色。PASM六胺银显色采用微波600 W,90s,其余与常规PASM套MASSON染色相同。

1.4.2 常规石蜡切片制片染色方法:按常规制片染色方法进行。

2 结果

冰余组织重制石蜡切片的制片染色:固定、脱水、透明和PASM六胺银显色共用3.8 min(230 s);从固定开始到染色结束整个过程只需3.5 h(12 600 s),而且切片连续,厚薄均匀一致,无切口,无刀痕,无断裂,无破碎,无皱褶,无色素沉着。常规石蜡切片的制片染色:固定、脱水、透明和PASM六胺银显色共用44.17 h;从固定开始到整个染色结束需要2 d,二者所用时间差异有显著性。冰余组织重制石蜡切片的染色结果与常规石蜡切片的染色结果相同,见下图。

3 讨论

用微波技术促进组织切片染色是近年来开展的新技术[3]。微波是一种高频电磁波,通常由频率为2.5GHz的家用微波炉产生。极性分子(水,极性蛋白质)在电磁场中将以每秒25亿次的频率高速振动,随之产生热能,增强了细胞和组织的通透性和与染液的渗透和交换作用,组织很快着色。本研究在固定、脱水、透明以及PASM六胺银显色的过程中都采用了微波技术。用10%中性甲醛进行微波固定起到了双层固定作用,使组织从内部到表面固定既迅速又均匀透彻。微波除了用于组织固定外,还可加速乙醇的固定兼脱水作用,对二甲苯透明及PASM六胺银显色也有同样的作用。

有资料显示[4],微波辐射的效果与被加热的物质的性质有关。水及各种水溶液能很好地吸收微波能。所以本研究从固定到透明都采用了微波技术,操作十分方便。而石蜡不溶于水,它虽能透过微波,但吸收的微波能量甚微,因此本室不采用微波浸蜡,而采用常规浸蜡。有报道,整个制片染色过程都可采用微波技术,但本文作者认为并不可取,因有些步骤使用染料比较贵重,配制较麻烦,需要较多的人力物力,造成浪费,而本室改进后的技术与整个过程都采用微波相比,切片染色质量无明显差异。

临床上凡急性肾炎综合征伴肾功能急剧恶化,无论是否已达到少尿性急性肾衰竭,应怀疑急进肾小球肾炎并及早进行肾活检。患者若能得到及时明确诊断和早期强化治疗,可显著改善预后。但是,在肾穿刺活检病理检查中,常因多种原因使部分患者被穿出的肾组织肾小球过少或缺失,本室经大量研究,应用微波技术将肾穿刺冰余组织重制石蜡切片,并且应用微波技术染色获得了理想的制片效果。因为生理盐水为“等渗盐水”,含0.9%氯化钠,与正常情况下的细胞外液的渗透压基本相等,能够避免细胞破裂,不会让细胞脱水或者过度吸水,所以我们在冰冻切片切完后,在冰冻切片机内用刀片迅速取出冰余肾组织放入事先盛有生理盐水的安瓶内,在4℃环境下浸泡15-20分钟左右,然后取出冰余肾组织立即放入盛有10%中性甲醛固定液中进行固定。

本研究结果表明,应用微波技术将冰余组织重制石蜡切片的制片染色,既弥补了穿出的肾组织肾小球过少或缺失,又大大缩短了制备切片的时间。对临床医生快速正确做出病理诊断、指导治疗及判断预后有重要意义。

[1]刘树军,张金兰,王连友,等.肾脏穿刺病理标本染色前的处理[J].中国实验诊断学,2006,10(12):1531.

[2]刘长宏,田俊芝.微波技术在Weigert来复红弹力纤维染色中的应用[J].天津医科大学学报,2003,9(3):416.

[3]朱振龙.微波在免疫组化中的应用[J].河北医药,2003,25(1):44.

[4]刘树军,于洗河,王 吉,等.微波技术在肾穿刺病理检查中的应用[J].吉林大学学报(医学版),2004,30(4):640.

Research of making renal biopsy frozen tissue into paraffin through microwave technology

LUO Man-yu1,WU Man2,LIU Shu-jun2*,et al.(1.Second faculty of clinical medicine,Bethune Department of Jilin University,Changchun130041,China;2.Department of Nephrology,Second Hospital,Jilin University,Changchun,Jilin Province130041,China)

ObjectiveInvestigated the effect ofmicrowave technology inmaking renal biopsy frozen tissue into paraffin.MethodsSelected 58 patients who are clinical suspicion of accelerated nephritis,applicated the microwave technology and dyed the paraffins which were made of frozen tissue.And then comparedwith the conventional ones.ResultsThere is no difference between the paraffins being made of frozen tissue and the conventional ones.ConclusionMaking renal biopsy frozen tissue into paraffin through microwave technology can make up the less or missing of renal glomerulus,which was time-saving and good quality.Itwasimportant significance to make pathological diagnosis,guide therapy and judge prognosis quickly and accurately.

microwave/diagnostic application,punctio/method,nephritis/diagnosis

R692.3

A

1007-4287(2010)06-0885-02

*通讯作者

罗曼宇(1987-),男,吉林长春,在读本科生,临床医学专业。

2009-05-20)