珍珠菜黄酮类化学成分研究

丁林芬， 郭亚东， 吴兴德， 马银海

（1.昆明医学院药学院，云南昆明 650031;2.昆明学院化学科学与技术系，云南昆明 650031）

珍珠菜（Lysimachia clethroideDuby）为报春花科珍珠菜属多年生草本植物。广泛分布于我国东北、华北、华东、中南、西南及河北、陕西等地。其味苦、辛、性平。全草入药，具有清热解毒、活血调经、利水消肿等功效［1］。文献报道已从该植物分离得到黄酮、三萜等化学成分［2-4］。为更好的开发和利用珍珠菜资源，本研究对珍珠菜进行系统的化学成分研究，从中分离得到11个黄酮类化合物，其中化合物3、6为首次从该种植物中分离得到，化合物8～11为首次从该属植物中分离得到。

1 仪器与材料

质谱用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定;核磁共振谱用Bruker AM-400和DRX-500超导核磁共振仪测定，TMS为内标;Sephadex LH-20为瑞典Pharmacia公司生产;1100型高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器，色谱工作站，半制备用色谱柱ZORBAX SB-C18（9.4 mm ×250 mm，5 μm）均为美国Agilent公司生产;柱色谱硅胶、硅胶GF254为青岛海洋化工厂生产;溶剂为工业纯（重蒸）。

珍珠菜采自云南省大理州，由中国科学院昆明植物研究所李锡文教授鉴定为珍珠菜L.clethroide，标本现存于该所标本室（标本号2006-19）。

2 提取分离

珍珠菜干燥全草5 kg粉碎后，用70%丙酮冷浸提取3次，减压浓缩得浸膏（800 g），经100～200目硅胶柱色谱，用氯仿-丙酮（100∶0～0∶100）梯度洗脱，分成8个部分（Fr.1～8）。Fr.2（6.5 g）经硅胶柱色谱，石油醚-丙酮（100∶1～10∶1）梯度洗脱，分成3个部分（Fr.2.1～2.3），Fr.2.1经过反复Sephadex LH-20柱色谱，分离得到化合物1（55 mg）;Fr.2.2经过硅胶柱色谱，Sephadex LH-20柱色谱，半制备液相色谱，甲醇-水（25∶75，3 mL/min）为流动相，分离得到化合物6（8 mg）;Fr.2.3经过半制备液相色谱，甲醇-水（45∶55，3 mL/min）为流动相，分离得到化合物4（15 mg）。Fr.4（2.3 g）经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇（30∶1～5∶1）梯度洗脱，分成3个部分（Fr.4.1～4.3），Fr.4.2经过反复Sephadex LH-20柱色谱，分离得到化合物5（75 mg）。Fr.6（9.3 g）经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇（20∶1～5∶1）梯度洗脱，分成3个部分（Fr.6.1～6.3），Fr.6.1经过反复硅胶柱色谱和Sephadex LH-20柱色谱，分离得到化合物7（13 mg）、9（11 mg），Fr.6.2经过硅胶柱色谱，Sephadex LH-20柱色谱，半制备液相色谱，甲醇-水（37∶63，3 mL/min）为流动相，分离得到化合物3（10 mg）。Fr.7（8.5 g）经反相柱色谱，甲醇-水（10∶90～80∶20）梯度洗脱，分成4个部分（Fr.7.1～7.4），Fr.7.2经过硅胶柱色谱，Sephadex LH-20柱色谱，半制备液相色谱，甲醇-水（35∶65，3 mL/min）为流动相，分离得到化合物2（34 mg）、8（9 mg）、10（14 mg）、11（6 mg）。

3 结构鉴定

化合物1黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阴性。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ:6.18（1H，d，J=1.9 Hz，H-6），6.43（1H，d，J=1.9 Hz，H-8），8.03（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，H-6′），6.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，H-5′）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ:146.9（C-2），135.7（C-3），175.9（C-4），160.8（C-5），98.3（C-6），164.0（C-7），93.6（C-8），156.3（C-9），103.1（C-10），121.8（C-1′），129.6（C-2′，C-6′），115.5（C-3′，C-5′），159.3（C-4′）。以上数据与文献［5，6］报道的山柰酚数据一致。

化合物2黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性，ESI-MSm/z447［M-H］－。1H-NMR（CD3COCD3，500 MHz）δ:12.49（5-OH），6.27（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.51（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），8.14（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，H-6′），6.97（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，H-5′），5.44（1H，d，J=7.7 Hz，H-1″），3.45（1H，dd，J=8.9，7.8 Hz，H-2″），3.42（1H，t，J=8.9 Hz，H-3″），3.34（1H，t，J=8.9 Hz，H-4″），3.26（1H，m，H-5″），3.64（1H，dd，J=12.0，2.4 Hz，H-6″a），3.50（1H，dd，J=12.0，5.2 Hz，H-6″b）。13C-NMR（CD3COCD3，125 MHz）δ:156.5（C-2），133.3（C-3），177.5（C-4），161.5（C-5），98.6（C-6），164.8（C-7），93.5（C-8），156.2（C-9），103.8（C-10），120.9（C-1′），130.6（C-2′，C-6′），115.8（C-3′，C-5′），159.8（C-4′），101.4（C-1″），74.3（C-2″），76.5（C-3″），69.5（C-4″），77.7（C-5″），62.5（C-6″）。以上数据与文献［7］报道的山柰酚 3-O-β-D-葡萄糖苷（紫云英苷）数据一致。

化合物3黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性，ESI-MSm/z449［M+H］+。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ:6.19（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.39（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），8.06（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，H-6′），6.85（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，H-5′），5.28（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ:157.2（C-2），134.3（C-3），178.4（C-4），161.8（C-5），98.6（C-6），164.8（C-7），93.5（C-8），157.8（C-9），103.7（C-10），121.4（C-1′），131.1（C-2′，C-6′），114.8（C-3′，C-5′），160.4（C-4′），103.7（C-1″），71.7（C-2″），73.7（C-3″），68.7（C-4″），75.8（C-5″），60.7（C-6″）。以上数据与文献［5］报道的山柰酚3-O-β-D-半乳糖苷数据一致。

化合物4黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性，ESI-MSm/z593［M-H］－。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ:12.42（5-OH），6.25（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.48（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），8.08（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，H-6′），6.91（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，H-5′），5.35（1H，d，J=7.4 Hz，H-1″），3.47 ～3.20（m，H-2″～H-5″），4.33（1H，dd，J=10.9，1.9 Hz，H-6″a），4.17（1H，dd，J=10.9，6.1 Hz，H-6″b），7.44（2H，d，J=8.6 Hz，H-2‴，H-6‴），6.87（2H，d，J=8.6 Hz，H-3‴，H-5‴），7.42（1H，d，J=15.9 Hz，H-7‴），6.15（1H，d，J=15.9 Hz，H-8‴）。13CNMR（C5D5N，125 MHz）δ:157.7（C-2），133.5（C-3），178.7（C-4），162.8（C-5），99.9（C-6），165.3（C-7），94.6（C-8），157.6（C-9），105.2（C-10），121.8（C-1′），131.8（C-2′，C-6′），116.8（C-3′，C-5′），161.8（C-4′），104.1（C-1″），76.0（C-2″），78.4（C-3″），71.3（C-4″），76.0（C-5″），64.2（C-6″），126.1（C-1‴），130.7（C-2‴，C-6‴），116.1（C-3‴，C-5‴），161.4（C-4‴），145.2（C-7‴），114.9（C-8‴），167.2（C-9‴）。以上数据与文献［8］报道的山柰酚 3-O-（6″-p-香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（银煅苷）数据一致。

化合物5黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish 反应阴性。1H-NMR（CD3COCD3，500 MHz）δ:6.24（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.50（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），7.80（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.98（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），7.67（1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′）。13C-NMR（CD3COCD3，100 MHz）δ:146.9（C-2），136.7（C-3），176.5（C-4），162.2（C-5），99.1（C-6），164.9（C-7），94.4（C-8），157.6（C-9），104.0（C-10），123.6（C-1′），116.1（C-2′），145.8（C-3′），148.3（C-4′），115.6（C-5′），121.4（C-6′）。以上数据与文献［5，6］报道的槲皮素数据一致。

化合物6黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阴性，ESI-MSm/z315［M-H］－。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ:6.76（1H，d，J=1.9 Hz，H-6），6.87（1H，d，J=1.9 Hz，H-8），8.31（1H，d，J=1.9 Hz，H-2′），7.38（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），8.21（1H，d，J=8.4，1.9 Hz，H-6′），3.87（OMe）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ:148.5（C-2），137.9（C-3），177.4（C-4），157.5（C-5），99.3（C-6），165.6（C-7），94.4（C-8），162.5（C-9），104.5（C-10），123.1（C-1′），116.6（C-2′），147.5（C-3′），149.4（C-4′），112.6（C-5′），122.8（C-6′），56.0（OMe）。以上数据与文献［9］报道的异鼠李素数据一致。

化合物7黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性，ESI-MSm/z465［M+H］+。1H-NMR（CD3COCD3，400 MHz）δ:12.36（5-OH），6.27（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.50（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），8.01（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.93（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），7.57（1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′），5.42（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），3.46 ～3.20（m，H-2″～ H-5″），3.74（1H，dd，J=11.8，2.3 Hz，H-6″a），3.57（1H，dd，J=11.8，5.2 Hz，H-6″b）。13C-NMR（CD3COCD3，100 MHz）δ:157.9（C-2），135.6（C-3），179.1（C-4），162.9（C-5），99.7（C-6），165.3（C-7），94.6（C-8），158.8（C-9），105.4（C-10），122.6（C-1′），115.8（C-2′），145.2（C-3′），149.2（C-4′），117.9（C-5′），122.6（C-6′），105.0（C-1″），75.5（C-2″），77.8（C-3″），70.9（C-4″），78.1（C-5″），62.7（C-6″）。以上数据与文献［10］报道的槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷（异槲皮苷）数据一致。

化合物8黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性，FAB-MSm/z477［M-H］－。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ:12.46（5-OH），6.28（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.53（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），8.05（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.97（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），7.64（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6′），5.42（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），3.94（OMe）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ:156.7（C-2），133.8（C-3），179.1（C-4），161.3（C-5），99.4（C-6），164.1（C-7），94.1（C-8），156.2（C-9），103.4（C-10），122.0（C-1′），113.4（C-2′），146.2（C-3′），149.5（C-4′），115.4（C-5′），122.4（C-6′），101.1（C-1″），71.4（C-2″），73.0（C-3″），67.8（C-4″），75.6（C-5″），60.4（C-6″），56.3（OMe）。以上数据与文献［5］报道的槲皮素 3′-甲氧基-3-O-β-D-半乳糖苷数据一致。

化合物9黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性，FAB-MSm/z611［M+H］+。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ:12.61（5-OH），6.14（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.34（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），7.51（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.81（1H，d，J=8.7 Hz，H-5′），7.53（1H，dd，J=8.7，2.0 Hz，H-6′），5.40（1H，d，J=7.4 Hz，H-1″），7.34（2H，d，J=8.5 Hz，H-2‴，H-6‴），6.77（2H，d，J=8.5 Hz，H-3‴，H-5‴），7.30（1H，d，J=15.1 Hz，H-7‴），6.12（1H，d，J=15.1 Hz，H-8‴）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ:156.3（C-2），133.1（C-3），177.4（C-4），161.2（C-5），98.7（C-6），164.1（C-7），93.5（C-8），156.3（C-9），103.8（C-10），121.1（C-1′），116.2（C-2′），144.8（C-3′），148.5（C-4′），115.2（C-5′），121.5（C-6′），100.7（C-1″），73.9（C-2″），76.3（C-3″），69.9（C-4″），74.3（C-5″），63.5（C-6″），124.9（C-1‴），130.1（C-2‴，C-6‴），115.7（C-3‴，C-5‴），159.7（C-4‴），144.5（C-7‴），113.6（C-8‴），166.2（C-9‴）。以上数据与文献［11］报道 的 quercetin 3-O-β-D-（6″-p-coumaroyl）-galactoside数据一致。

化合物10白色粉末，盐酸-镁粉反应阴性，醋酸镁反应阳性，Molish反应阳性，ESI-MSm/z463［M+H］+。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ:8.12（1H，s，H-2），7.15（1H，s，H-8），7.68（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′），7.27（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′），5.25（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），3.98（OMe）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz） δ:154.5（C-2），122.1（C-3），181.7（C-4），153.9（C-5），131.0（C-6），157.7（C-7），94.8（C-8），153.3（C-9），107.7（C-10），123.8（C-1′），131.0（C-2′，C-6′），116.4（C-3′，C-5′），159.4（C-4′），102.0（C-1″），74.7（C-2″），78.7（C-3″），71.2（C-4″），79.5（C-5″），62.5（C-6″），60.8（OMe）。以上数据与文献［12］报道的 4′-methoxy-5， 6-dihydroxyisoflavone-7-O-β-D-glucopyranoside数据一致。

化合物11白色粉末，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性，FAB-MSm/z419［M+H］+。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ:5.45（1H，dd，J=12.5，2.7 Hz，H-2），2.65（1H，dd，J=15.9，2.7 Hz，H-3），3.05（1H，J=12.5，15.9 Hz，H-3），7.72（1H，d，J=8.8 Hz，H-5），6.51（1H，dd，J=8.8，2.2 Hz，H-6），6.35（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），7.43（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，H-6′），7.13（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，H-5′），4.89（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），3.25-3.33（m，H-2″-H-5″），3.69（1H，dd，J=11.5，5.5 Hz，H-6″a），3.45（1H，dd，J=11.5，3.0 Hz，H-6″b）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ:80.7（C-2），44.9（C-3），193.2（C-4），134.5（C-5），111.8（C-6），165.4（C-7），102.3（C-8），164.8（C-9），115.1（C-10），129.9（C-1′），128.8（C-2′，C-6′），116.3（C-3′，C-5′），158.9（C-4′），103.8（C-1″），74.8（C-2″），77.8（C-3″），71.2（C-4″），78.4（C-5″），62.4（C-6″）。以上数据与文献［13］报道的 4′-羟基二氢黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷数据一致。

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