大叶醉鱼草快繁技术初探

刘 琦，陈 晔，詹寿发*

（1.九江市教研室，江西 九江 332000；2.九江学院生命科学学院，江西 九江 332000）

大叶醉鱼草快繁技术初探

刘 琦1，陈 晔2，詹寿发2*

（1.九江市教研室，江西 九江 332000；2.九江学院生命科学学院，江西 九江 332000）

以庐山野生植物大叶醉鱼草的茎段为材料，对芽、丛生芽及生根培养方面进行了初步的研究.结果表明：MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L的培养基适宜诱导醉鱼草茎段芽和丛生芽生长，MS＋NAA 0.2 mg/L的培养基适宜醉鱼草茎段生根.

大叶醉鱼草；茎段；组织培养；快速繁殖

0 引 言

大叶醉鱼草（Buddleia davidii）为马钱科植物，别名闹鱼花，落叶灌木，既具有很好的园林观赏价值，又具有杀虫、杀蛆、灭孑孓等作用，因此，备受人们的关注.醉鱼草属植物中有些种容易进行人工繁殖（如种子、扦插等），但也有少数种（如大叶醉鱼草）的种子在土中多年不发芽，难以繁殖[1].近年来国内一些研究者对醉鱼草属中的一些种进行了组织培养繁殖研究，以其茎段或芽作为外植体，以MS培养基作为基本培养基并添加适当浓度的细胞分裂素和生长素，可诱导出试管苗.如段新玲等[2-3]对白花和蓝花大叶醉鱼草进行组培快繁的研究已取得成果；曾春霞等[4]对花叶日本醉鱼草进行了组织培养研究并申请了专利；陈贤等[5-6]对野生的柱穗醉鱼草进行了组织培养研究，建立了植株再生和快速繁殖体系.国外研究者对大叶醉鱼草的组培快繁研究也已取得成果[7]，但国内却未见相关报道.为了进一步筛选、提取和研究大叶醉鱼草中具有杀虫活性的次生代谢产物，本文对庐山野生植物大叶醉鱼草[8]进行了组织培养快繁技术的初步研究，为其开发利用提供一定的参考.

1 材料与方法

1.1 材料

大叶醉鱼草一般生长于海拔20～1 000 m的山坡林缘、沟边、水旁，在庐山及周边地区均有分布.供试的醉鱼草采自庐山山下莲花洞国家森林公园.

1.2 实验方法

2008年秋季在莲花洞国家森林公园内选择健康无病害的大叶醉鱼草，采取10 cm长幼嫩的带有饱满侧芽的醉鱼草茎段带回实验室进行实验.将茎段用清水冲洗3 h后用70%乙醇消毒30s，0.1%升汞消毒15min之后用无菌水冲洗3次，切取120个相同的1 cm长并带有两个侧芽的茎段，分别接种在添加4种不同浓度激素配比的A、B、C、D组MS培养基上，配方见表1.每瓶培养基中接种3个茎段，每种培养基10瓶，培养温度控制在（24±2）℃，每日光照持续12 h.接种后观察统计茎段培养25 d时出芽等生长情况，并将生长25 d的单个芽体转入继代培养基中进行继代增殖培养以诱导丛生芽，以后每隔30 d继代1次.将继代培养中苗高3～4 cm，并有3～4片展开叶的健壮小苗转到生根培养基中诱导生根，再经过炼苗移栽，以得到完整的植株[9-12].

表1 培养基配方

2 结果与分析

2.1 无菌芽体的诱导

将经消毒过的1 cm长并带有两个侧芽的茎段接种于A、B、C、D四组培养基中进行出芽诱导培养.接种25 d时观察结果见表2.从表2可以看出，四种培养基中茎段的成活率均较高，且其基部都产生少量愈伤组织，但A、B组芽的诱导率明显高于C、D组，均达到了38%以上.观察比较发现A、B组愈伤组织块也明显较C、D组大，其中A组的侧芽已分化出丛生芽，且较B、C、D组差异显著.由此可见，大叶醉鱼草芽诱导的培养基中最佳激素浓度配比为6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L.

表2 不同培养基茎段生长情况

2.2 茎段继代培养

将2.1节中大叶醉鱼草茎段诱导生成的单芽剪切成带有1叶（非展开叶）1芽的茎段，接种于A-E、B-F、C-G、D-H四组培养基（配方见表1）中进行继代培养.培养30～35 d，观察发现最初转入继代培养时，茎段的芽体数增加缓慢，形成丛生芽的数目少，经过2～3次继代培养后，丛生芽率逐渐增大.A-E组培养基容易诱导茎段丛生芽（丛生芽率100%）和多芽体的发生，并且呈矮小密集状生长.表明继代培养时，茎段逐渐适应了相应的培养条件，也可能是体内逐步积累了较多的细胞分裂素和生长素，同时也对外部环境中激素的需求有所降低[3].从表3可以看出，四组培养基中经继代培养的茎段的成活率均达到了100%（培养30 d所统计的茎段成活率）.A-E、B-F组培养基中茎段的分化率均达到100%，但B-F组培养基的丛生芽率较低（50%）；C-G组培养基中茎段的分化率偏低，但诱导丛生芽率为75%；D-H组培养基的分化率最低，未形成丛生芽.表明高浓度6-BA和NAA的激素组合会抑制丛生芽的生长，因此A-E组培养基是大叶醉鱼草茎段继代培养较为理想的培养基，即添加激素的配比为6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L的MS培养基.

表3 不同培养基茎段继代培养生长情况

2.3 生根培养

当继代培养基中单株小苗高度达到3～4 cm并有3～4片展开叶时，即可进行生根培养.挑取长势良好的健壮单株小苗分别接种于M、N两种不同激素配比的生根培养基（配方见表1）中进行生根培养，30 d时观察并统计生根情况，结果见表4.M组培养基中苗的生根率、平均根数以及最大根长均明显高于N组培养基，其中生根率达到了100%，而N组培养基的生根率为80%.表明添加NAA浓度为0.1～0.4 mg/L的培养基均可用于诱导大叶醉鱼草茎段生根，但浓度为0.2 mg/L的诱导效果最佳.

表4 不同NAA浓度对茎段生根的影响

2.4 试管苗移栽

将生根的组培苗取出组培室，炼苗1周左右后，打开瓶盖1～2 d后取出苗（不要伤根）.洗净琼脂后移栽到炼苗基质中，移栽前先将基质浇足水分，移栽后浇水，完成后罩上塑料薄膜.第1周，每天用小喷雾器喷洒MS培养液（按照水与MS培养液的体积比为2:1配制）1次；1周后，移去塑料薄膜.观察发现大叶醉鱼草试管苗适应外界环境能力较强，1周后，成活率达90%以上.

3 结 语

本实验结果表明大叶醉鱼草茎段最佳芽诱导和继代培养的培养基均为MS＋6-BA 0.5 mg/L，而较易生根的培养基则为MS＋NAA 0.2 mg/L，选择大叶醉鱼草带芽茎段作为外植体较易诱导芽的萌发.因此，在选用适当激素配比的条件下，用组培方法可以使大叶醉鱼草快速繁殖，以便满足从大量大叶醉鱼草植物中筛选、提取和研究具有杀虫活性的次生代谢产物的需要，为开发植物型环保农药提供一定的依据，同时可以解决园林绿地大量栽培需求的问题，也可以更好地保护庐山野生大叶醉鱼草资源.

[1] 孔卫邦，孔繁才.紫花醉鱼草种子萌发条件的研究[J].种子，2002（6）：8-9.

[2] 段新玲，苏雪痕.蓝花大叶醉鱼草组培快速繁殖的研究[J].林业科技通讯，1999（10）：17-19.

[3] 段新玲，任岁动，于军.白花大叶醉鱼草的离体培养和植株再生[J].植物生理学报，2002（12）：533.

[4] 曾春霞，孙卫邦.花叶日本醉鱼草的微型快繁[J].植物生理学通讯，2004，40（2）：199.

[5] 陈贤，杨德，关文灵.野生柱穗醉鱼草组培快繁技术体系的研究（Ⅰ）外植体的诱导培养[J].云南农业大学学报， 2008， 23（1）： 19-21.

[6] 陈贤，龚元圣，杨德，等.野生柱穗醉鱼草嫩芽的组培技术研究[J].西部林业科学，2007，36（4）： 74-79.

[7] Miller A.The distribution and ecology of Buddleia davidii Fr in Britain， with particular reference to condition supporting germination and the establishment of seeding[M].D Phil thesis.CNAA：Oxford Polytecnic， 1984.

[8] 詹寿发，樊有赋，王萍兰，等.庐山野生杀虫植物资源调查初报[J].安徽农业科学，2007，35（36）： 11 886-11 889.

[9] 季蒙.互叶醉鱼草引种及繁殖栽培技术研究[J].辽宁林业科技，1996（4）：5-7.

[10]刘庆昌，吴国良.植物细胞组织培养[M].北京：中国农业大学出版社，2003.

[11]潘瑞炽.植物组织培养[M].3版.广州：广东高等教育出版社，2003.

[12]李成才.繁花优品醉鱼草[J].园林，2002（11）：18.

Abstract：The stem sections of wild Buddleia davidii in Mountain Lushan are taken as materials to conduct a preliminary research on callus induction and the proposed method makes the stem section and root grow rapidly.The results show that,MS+6-BA 0.5 mg/L has a significant effect on Buddleia davidii callus induction and the stem section and root propagates rapidly.

Key words：Buddleia davidii； stem section； tissue culture； rapid propagation

Preliminary Research on Rapid Propagation of Buddleia Davidii

LIU Qi1， CHENYe2， ZHANShou-fa2*

（1.Jiujiang Science of Education Research Institute， Jiujiang 332000， Jiangxi， China； 2.College of Life Science，Jiujiang University， Jiujiang 332000， Jiangxi， China）

Q 945.52

B

1001-4217（2010）02-0076-05

2009-10-26

刘琦（1966-），男，江西九江人，高级教师.研究方向：生物教学和生物资源.E-mail：jjlq095@sina.com；*通讯联系人E-mail：zhan9630@126.com

江西省教育厅科技项目（GJJ09353）