Akt和磷酸化Akt1在胰腺癌组织中的表达及意义

刘俊 裘正军 江弢 黄陈 孙晶 孙红成 钟福全 金宇彪 胡宏慧

·论著·

Akt和磷酸化Akt1在胰腺癌组织中的表达及意义

刘俊 裘正军 江弢 黄陈 孙晶 孙红成 钟福全 金宇彪 胡宏慧

目的了解Akt和磷酸化Akt1(p-Akt1)蛋白在胰腺癌组织中的表达情况，探讨其临床意义。方法应用免疫组织化学法检测74例胰腺癌组织、10例正常胰腺组织中Akt和p-Akt1蛋白的表达，并分析其与临床病理学特征及预后的关系。结果Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为87.8%和83.8%，而正常胰腺组织均阴性表达，相差非常显著(Plt;0.05)。癌组织中Akt和p-Akt1蛋白的表达呈正相关性(r=0.274,P=0.018)。Akt和p-Akt1蛋白表达与年龄、性别、肿瘤生长部位、肿瘤大小、病理学分级、淋巴结转移、临床分期及神经浸润均无显著相关性(Pgt;0.05)，但p-Akt1蛋白高表达与病理学T分期及TNM分期相关(P=0.002)。Akt和p-Akt1蛋白高表达者的中位生存期分别为(16.0±5.7)个月和(23.0±5.5)个月，明显高于低表达者的(9.3±0.2)个月和(11.1±1.8)个月(P分别为0.007和0.004)。结论胰腺癌组织中p-Akt1蛋白表达的程度与良性预后有关，检测胰腺癌中p-Akt1蛋白的表达具有一定的临床意义。

胰腺肿瘤； 免疫组织化学； 蛋白激酶类； Akt； p-Akt1； 预后

Akt是一个丝/苏氨酸激酶，可被很多生长因子激活，进而通过抑制凋亡和调节细胞增殖在肿瘤的发生以及耐药中起着重要作用[1-2]。Akt有三个亚型(Akt1、Akt2和Akt3)，在肿瘤中的作用不同[3]。磷酸化Akt(p-Akt)为其活化状态，在胰腺癌的作用存在争议[4-5]。为此，本研究检测胰腺癌组织和正常胰腺组织中Akt和p-Akt1蛋白的表达，分析其与临床病理学特征及预后的关系。

材料与方法

一、病例资料

收集上海交通大学附属第一人民医院1993年8月至2009年1月手术切除的胰腺癌标本74例，其中男50例，女24例，平均年龄(64±10)岁(40～80岁)。另取10例正常胰腺组织标本作为对照。通过电话和直接上门相结合的方式进行随访。

二、Akt和p-Akt1蛋白表达的检测

采用免疫组织化学法检测，严格按试剂盒(上海明睿公司)说明书操作。参考Shah等[6]的标准，随机选择5个高倍视野，每视野计数500个细胞，无阳性细胞为-,阳性细胞lt;10%为+，10%～50%为++，gt;50%为+++。-和+为低表达组，++和+++为高表达组。

三、统计学处理

采用SPSS17.0软件分析。Akt和p-Akt1的相关性采用Spearman等级检验分析，Akt和p-Akt1表达与临床病理资料间关系用χ2检验，生存分析采用Kaplan-meier法，Plt;0.05为有统计学意义。

结 果

一、胰腺癌组织中Akt和p-Akt1蛋白的表达

Akt和p-Akt1蛋白主要在细胞质中表达，少数在细胞核中表达(图1)。Akt和p-Akt1蛋白在胰腺癌组织中总的阳性表达率分别为87.8%和83.8%，阳性细胞数≥10%的表达率分别为73.0%和55.4%，阳性细胞数≥50%的表达率为28.4%和21.6%，而正常胰腺组织中均呈阴性表达(Plt;0.05)。

二、胰腺癌Akt和p-Akt1蛋白表达的相关性

胰腺癌组织Akt和p-Akt1蛋白的表达具有正相关性(表1，r=0.274,P=0.018)。

三、胰腺癌组织Akt和p-Akt1蛋白表达与临床病理学特征的关系

胰腺癌Akt蛋白表达与年龄、性别、肿瘤生长部位、肿瘤大小、病理分级、淋巴结转移、临床分期及神经浸润均无显著相关性。而p-Akt1高表达与肿瘤T分期及TNM分期相关(表2)，与其他特征无显著相关性(Pgt;0.05)。

四、Akt和p-Akt1蛋白表达与预后

胰腺癌患者总的中位生存期为(14.3±1.4)个月。Akt高表达者的中位生存期为(16.0±5.7)个月，明显高于低表达者的(9.3±0.2)个月(图2a，P=0.007)。p-Akt1高表达者的中位生存期为(23.0±5.5)个月，明显高于低表达者的(11.1±1.8)个月(图2b，P=0.004)。多因素分析显示，TNM分期为胰腺癌预后差的因素(r=1.436，P=0.041)，p-Akt1为胰腺癌良性预后因素(r=0.421，P=0.010)。

表1 胰腺癌组织Akt和p-Akt1蛋白的表达(例数)

图1正常胰腺和胰腺癌组织中Akt和p-Akt1的表达(SP ×400)。(a)正常胰腺Akt阴性表达，(b～e)胰腺癌中Akt表达(-、+、++、+++)；(f)正常胰腺p-Akt1阴性表达；(g～j)胰腺癌中p-Akt1表达(-、+、++、+++)

表2胰腺癌组织中Akt和p-Akt1蛋白表达与临床病理学特征的关系

参 数例数Akt蛋白低表达高表达p-Akt1蛋白低表达高表达年龄 ≤60岁244201212 gt;60岁5016342129性别 男5011392426 女24915915肿瘤部位 胰头6517482936 胰体尾93645分化程度 高分化15411411 中分化4713342324 低分化103764淋巴结转移 无4611352224 有289191117T分期 T1+T228622622a T34614322719TNM分期 Ⅰa+Ⅰb19514415a Ⅱa27621189 Ⅱb+Ⅲ+Ⅳ289191117神经浸润 无3410241616 有307231317肿瘤大小 ≤2cm101928 gt;2cm6419453133

注：aPlt;0.01

图2胰腺癌组织Akt(a)和p-Akt1(b)蛋白表达与患者生存期的关系

讨 论

Hutchinson等[7]报道Akt1高表达可加速ErbB-2介导的乳腺肿瘤的发生，但抑制肿瘤的侵袭能力。Maroulakou等[8]报道，不表达Akt1的肿瘤更具有侵袭性。Chadha等[4]报道，Akt蛋白在胰腺癌的高表达率为71.8%。在很多胰腺癌细胞株中Akt也高表达[9]。本实验结果显示，胰腺癌组织Akt蛋白的高表达率为73.0%，明显高于正常胰腺组织。而且p-Akt1蛋白高表达与肿瘤病理学T分期及TNM分期相关，提示Akt1的高表达可能与胰腺癌的局部侵袭能力下降有关，与上述文献报道结果一致。

Akt在PI3K或缺氧微环境的刺激下发生磷酸化，其中T308位点和S473位点的同时磷酸化为Akt活化所必需。激活的Akt从细胞质募集至胞膜或转位到胞核，使底物蛋白特定部位的丝氨酸、苏氨酸磷酸化。p-Akt通过抑制凋亡促进细胞的存活，在肿瘤的发生中起重要作用。Ng等[9]报道，p-Akt1在很多胰腺癌细胞株中高表达。本结果显示，p-Akt在胰腺癌组织中也高表达，且Akt和p-Akt1蛋白的表达存在明显的正相关，提示Akt的磷酸化激活与Akt的异常过表达有关。

至于p-Akt对胰腺癌预后的意义存在争议。Chadha等[4]认为，p-Akt是胰腺癌预后良好的指标之一，而Yamamoto等[5]认为，p-Akt在胰腺癌的高表达与预后差相关。本结果显示，Akt和p-Akt1蛋白高表达者的中位生存期均明显高于低表达者，多因素分析提示p-Akt1高表达为良性预后因素。这可能与p-Akt1高表达者胰腺癌的局部浸润少有关。

[1] Woodgett JR.Recent advances in the protein kinase B signaling pathway.Curr Opin Cell Biol,2005,17:150-157.

[2] Sheng S,Qiao M,Pardee AB.Metastasis and AKT activation.J Cell Physiol,2009,218:451-454.

[3] Dillon RL,Marcotte R,Hennessy BT,et al.Akt1 and akt2 play distinct roles in the initiation and metastatic phases of mammary tumor progression.Cancer Res,2009,69:5057-5064.

[4] Chadha KS,Khoury T,Yu J,et al.Activated Akt and Erk expression and survival after surgery in pancreatic carcinoma.Ann Surg Oncol,2006,13:933-939.

[5] Yamamoto S,Tomita Y,Hoshida Y,et al.Prognostic significance of activated Akt expression in pancreatic ductal adenocarcinoma.Clin Cancer Res,2004,10:2846-2850.

[6] Shah A,Swain WA,Richardson D,et al.Phospho-akt expression is associated with a favorable outcome in non-small cell lung cancer.Clin Cancer Res,2005,11:2930-2936.

[7] Hutchinson JN,Jin J,Cardiff RD,et al.Activation of Akt-1 (PKB-alpha) can accelerate ErbB-2-mediated mammary tumorigenesis but suppresses tumor invasion.Cancer Res,2004,64:3171-3178.

[8] Maroulakou IG,Oemler W,Naber SP,et al.Akt1 ablation inhibits, whereas Akt2 ablation accelerates,the development of mammary adenocarcinomas in mouse mammary tumor virus (MMTV)-ErbB2/neu and MMTV-polyoma middle T transgenic mice.Cancer Res,2007,67:167-177.

[9] Ng SSW,Tsao MS,Chow S,et al.Inhibition of phosphatidylinositide 3-kinase enhances gemcitabine-induced apoptosis in human pancreatic cancer cells.Cancer Res,2000,60:5451-5455.

2009-07-15)

(本文编辑：屠振兴)

ExpressionandclinicalsignificanceofAktandphosphoryledAkt1inpancreaticcarcinoma

LIUJun,QIUZheng-jun,JIANGTao,HUANGCheng,SUNJing,SUNHong-cheng,ZHONGFu-quan,JINYu-biao,HUHong-hui.

DepartmentofGeneralSurgery,FirstPeople′sHospitalofShanghai,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200080,China

QIUZheng-jun,Email:qiuwryb@online.sh.cn

ObjectiveTo investigate the expression of Akt and phosphoryled Akt (p-Akt1) protein in pancreatic carcinoma and to determine the clinical significance.MethodsIn 74 cases of pancreatic carcinoma and 10 cases of normal pancreatic tissue samples, the expression of Akt and p-Akt1 were detected by immunohistochemical method, and the its relationship with clinicopathologic characteristics and prognosis were analyzed.ResultsThe positive expression rate of Akt and p-Akt1 in pancreatic carcinoma were 87.8% and 83.8% respectively, while there was no expression of Akt and p-Akt1 in normal pancreatic tissue, and the difference was statistically significant (plt;0.05). There was a positive correlation between the expression of Akt and p-Akt1 in pancreatic carcinoma (r=0.274,P=0.018). The expression of Akt and p-Akt1 was not significantly associated with the age, sex, location, size, pathology stages, lymph nodes metastasis, clinical stages and nerve invasion of the tumor (Pgt;0.05). But the higher expression of p-Akt1 was associated with T stages and TNM staging (p=0.002). Patients with high intensity of Akt and p-Akt1 expression showed a significantly longer median survival time [(16.0±5.7) month and (23.0±5.5) month, respectively] than those with low intensity expression [(9.3±0.2) month and (11.1±1.8) month (P=0.007 andP=0.004) respectively].Conclusionsp-Akt1 expression is a significant positive prognostic factor for pancreatic carcinoma and detection of p-Akt1 expression may be of clinical value.

Pancreatic neoplasms； Immunohistochemistry； Protein kinases; Akt； p-Akt1； Prognosis

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.02.018

200080 上海，上海交通大学附属第一人民医院普外科(刘俊、裘正军、江弢、黄陈、孙晶、孙红成、钟福全)，病理科(金宇彪 、胡宏慧)

裘正军，Email: qiuwryb@online.sh.cn