CYP2C9－1061A/C基因多态性与瓣膜置换术后患者华法林用量关系的临床研究

潘耀东 李胜军

1)苏州大学附属常州市肿瘤医院普瘤外科 常州 213001 2)苏州大学附属常州市肿瘤医院心内科 常州 213001

华法林(warfarin)是香豆素类口服抗凝药，多用于人工瓣膜置换、静脉血栓形成(肺栓塞)、房颤等的口服抗凝治疗。近年的许多研究显示，某些基因的遗传变异可能是造成个体间华法林维持剂量差异的主要原因［1］。大量研究表明，CYP2C9基因具有遗传多态性且与华法林抗凝剂量有关［2］，目前研究最多也是最主要的有 3种，即野生型CYP2C9*1，突变型CYP2C9*2(416C/T)和突变型CYP2C9*3(1061A/C)。现有的文献已证实CYP2C9*2型在亚洲和我国汉族人群中罕见［3］，故本文旨在常州地区汉族人群中探讨CYP2C9基因多态性对瓣膜置换术后华法林应用剂量的影响。

1 材料与方法

1.1 实验对象 73例病例来自2009－08～2010－04在苏

州大学附属常州肿瘤医院胸外科、心内科门诊及住院的患者，其中男41 例，女32 例;平均年龄(54.98 ±14.10)岁。病例入选标准为:汉族人、18岁以上、服用华法林至少2个月、INR控制在1.5～3.0;正常组来自同期在我院门诊体检且性别、年龄均与病例组匹配的正常人68例，男48例，女20例;平均(50.25±12.76)岁。所有入选对象均来自江苏常州市及其周边区域居住的汉族居民，相互间无血缘关系及异族通婚史。

1.2 实验方法 在受试者知情同意前提下，采集其空腹12 h后的外周静脉血2 mL(枸橼酸钠抗凝)，采用PCRRFLP方法进行PCR扩增，然后加入特定的体系进行酶切反应。

2 结果

2.1 CYP2C9*3(－1061A/C)基因多态性检测电泳结果

CYP2C9*3(－1061A/C)扩增产物长度为152 bp。根据单核苷酸突变位点(SNP)A/C的不同，经KpnⅠ酶切检验，可以判断3种基因型:1061A→C后可由KpnⅠ识别，纯合变异型(CC型)的PCR产物经酶切后产生134 bp和18 bp 2个片段，杂合子(AC 型)产生 152 bp、134 bp、18 bp 3 个片段，而野生纯合型(AA型)不能被酶切，只有1个152 bp片段。由于18 bp片段太小，且与134 bp片段距离太远，不易被凝胶分辨，故只能看到134 bp 1个片段。电泳结果见图1。

图1 CYP2C9－1061A/C基因多态扩增产物RFLP电泳图M:Marker;1、4、6:AA 型;2、5:AC 型;3、7:CC 型

2.2 CYP2C9*3(－1061A/C)多态性与华法林应用剂量的关系 将73例患者按不同基因型比较华法林剂量需求(见图2)，图2描述了两个基因不同基因型与华法林每周平均需求剂量的关系，从图2可看出，CYP2C9*3(－1061A/C)三种不同基因型平均周华法林剂量明显不同，纯合变异型CC型的需求剂量最低(13.57±7.10)mg/周，杂合变异型AC型需求剂量为(17.38±7.20)mg/周，野生纯合型AA型需求剂量最高(26.25±11.36)mg/周，变异型(AC 型和 CC 型)与野生纯合型AA型比较，华法林需求剂量减少，差异均具有统计学意义(P＜0.005)。

图2 CYP2C9－1061A/C不同基因型与华法林每周平均需求剂量相关统计图注:*P＜0.005，与野生型AA型相比

3 讨论

由以上统计结果可看出，CYP2C91061A→C变异均显著减少病人的华法林用量，CYP2C91061A→C变异型的个体华法林用量AC要比AA型的下降37.5%，而CC型要比AA型下降达40%以上。本研究在常州地区汉族人中报道了基因因素对瓣膜置换术后华法林需求剂量的影响，CYP2C9*3(－1061A/C)基因变异显著影响瓣膜置换术后华法林剂量需求。若能对临床需口服华法林的瓣膜置换术后患者进行基因型检测，并根据基因分型指导华法林初始剂量的选择，必将减少患者反复抽血化验的痛苦、降低人工瓣膜置换患者抗凝出血的风险。

［1］杨剑，缪丽燕.华法林的基因组学研究进展［J］.中国临床药理学与治疗学，2006，11(12):1 326-1 331.

［2］ Gaedigk A，Casley WL，Tyndale RF，et al.cytochrome P450(CYP2C9)allele frequencies in Canadian native Indian and inuit populations［J］.Canadian J physiology and pharmacology，2001，79(10):841 － 847.

［3］ Wang S L，Huang J D，Lai M D，et al.Detection of CYP2C9 polymorphism based on the polymerase chain reaction in Chinese［J］.Pharmacogenetics，1995，5:37 －42.