RP-H PLC法测定复方美登木片中重楼皂苷的含量

赵琪钟 孔凡建 李晓梅

（普洱市食品药品检验所，云南 普洱 665000）

RP-H PLC法测定复方美登木片中重楼皂苷的含量

赵琪钟 孔凡建 李晓梅

（普洱市食品药品检验所，云南 普洱 665000）

目的：建立测定复方美登木片中重楼皂苷含量的反相高效液相色谱法 （reverse phase-high performance liquid chromatography，RP-HPLC）方法。方法：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（42∶58）；流速0.8 mL/min；检测波长为203 nm，柱温35℃。结果：结果表明重楼皂苷I在0.304 0～ 3.040 0μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率为103.21%（n=9），RSD=1.26%;重楼皂苷Ⅱ在0.308 0～3.080 0 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率为97.98%（n=9），RSD=2.56%。结论：本法操作简单、灵敏、准确，可用于复方美登木片的质量控制。

反相高效液相色谱法；复方美登木片；重楼皂苷；含量测定

复方美登木片是普洱市民族传统医药研究所在挖掘、抢救民族民间中草药过程中，研发、筛选出来的用于治疗乳腺小叶增生的中药复方制剂，为拉祜族验方，由美登木、重楼等六味传统中药组成。原医院制剂对方中重楼采用薄层色谱法鉴别，为更好地控制该制剂质量，本文采用RP-HPLC法测定复方美登木片中主要有效成分重楼中皂苷I、皂苷II的含量，为更好地控制该产品质量提供检测方法。

1 仪器与试药

美国Agilent-1200高效液相色谱仪，带四元泵；DAD二级管阵列检测器，塞多利斯电子天平BS210S（德国）。

乙腈（色谱纯，Fisher，USA），乙醇（分析纯），水为超纯水。重楼皂苷Ⅰ对照品（中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号：111590-200402）；重楼皂苷Ⅱ对照品（中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号：111591-200402）；复方美登木片3批（普洱民族传统医药研究所提供，批号：090401，090402，090403）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）柱；流动相：乙腈-水（42∶58）；流速0.8 mL/min；检测波长为203 nm[1]，柱温 35℃；进样量：10 μL；理论板数按重楼皂苷Ⅰ峰计算应不低于4 000；阴性样品无干扰（见图1）。

2.2 对照品储备液的制备

精密称取在40℃减压干燥2 h的重楼皂苷Ⅰ对照品和重楼皂苷Ⅱ对照品适量，用乙醇制成每1 mL含0.152 mg的溶液，即得。

图1 对照品（A）、样品（B）、阴性对照（C）的HPLC色谱

2.3 供试品溶液的制备

取复方美登木片20片（批号：090402），除去薄膜衣，精密称定，研细，混合均匀，取以上供试品约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇25 mL，称定重量，振摇混匀，超声处理（工作频率233 KHz，250 W）30 min，放冷至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀后静置。过滤，弃去初滤液，续滤液用0.45 μm的滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性样品溶液

按样品处方比例制备不含重楼的阴性样品溶液，照上述供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。

2.5 线性关系的考察

精密称取重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ对照品适量，置量瓶中，加甲醇制成每mL含重楼皂苷152.0 μg的溶液和含重楼皂苷Ⅱ154.0 μg的溶液，即得。分别进样2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 μL，以进样量（μg）横坐标，面积为纵坐标，得重楼皂苷Ⅰ回归方程Y=121.062 21 X-3.306 83（r=0.999 9）结果表明重楼皂苷Ⅰ在0.304 0～3.040 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；重楼皂苷Ⅱ回归方程Y=92.379 56 X-1.841 303（r=0.999 9）结果表明重楼皂苷Ⅱ在0.308 0～3.080 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 空白试验

取“2.4”项阴性样品溶液，照含量测定方法制成供试液，进样20 μL测定，未检出重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ。且在与重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ对照品保留时间相对应的位置上也未检出样品峰，结果表明该色谱条件下阴性无干扰。

2.7 精密度试验

取对照品储备溶液照含量测定方法测定，连续进样6针，进样10 μL，以峰面积计算，结果重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ总量的RSD分别为0.723%、0.281%（n=6）。

2.8 稳定性试验

取复方美登木片（批号：090402）20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，混合均匀，精密称取约2 g照含量测定方法制成供试液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进样，进样10 μL，以重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ总峰面积计算，结果RSD为0.505%，说明样品在12 h内稳定。

2.9 重复性试验

取复方美登木片（批号：090402）50片，除去薄膜衣，精密称定，研细，混合均匀，精密称取6份各约2 g，照含量测定方法制成供试液，进样10 μL，以峰面积计算含量，结果重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ总量的RSD为0.455%，（n=6）

2.10 加样回收率试验

取复方美登木片（批号：090402）30片，除去薄膜衣，精密称定，研细，混合均匀，称取9份，取样量分别约为1.0 g，精密称定，分置具塞锥形瓶中，分别加入重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ对照品溶液1.5、2.0、3.0 mL（每mL含重楼皂苷Ⅰ0.92 mg和重楼皂苷Ⅱ0.52 mg），放置挥干，精密加乙醇25 mL，称定重量，振摇混匀，超声（工作频率233 KHz，250 W）提取30 min，放冷至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀后静置。进样前过滤，弃去初滤液，续滤液用0.45 μm的滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。依法操作，进样10 μL，分别测定，计算回收率，结果见表1、2。

表1 重楼皂苷Ⅰ回收率测定结果

表2 重楼皂苷Ⅱ回收率测定结果

表3 复方美登木片3批样品测定结果（n=2）

2.10 样品测定

取不同批号（3批）样品，按“2.3”项下方法制备所需的供试品溶液，在“2.1”色谱条件下，测定其峰面积（每批平行测定3份），并样品中重楼皂苷的含量，结果见表3。

3 讨论

3.1 重楼具有清热解毒，消肿止痛的功效，《中国药典》2010版记载有小毒，且其在治疗乳腺小叶增生的复方美登木片中为主药之一，为了临床用药安全，有必要采用更好的方法对其质量进行监控。

3.2 试验过程中曾考察过超声处理时间分别为20、30、40 min，结果表明，样品超声30 min已经提取完全，故含量测定方法超声提取时间选择为30 min。

[1] 国家药典委员会.中国药典2010年版（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：243.

Content Determination of Paridis Saponins in Compound Maytenus Tablets by RP-HPLC

Zhao Qizhong，Kong Fanjian，Li Xiaomei（The Institute for Food and Drug Control of Puer City，Yunnan Puer 665000，China）

Objective:To establish a method for the content determination of paridis saponins in compound maytenus tablets by RP-HPLC.Methods:HPLC was performed to determine the content of paridis saponins using Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase was acetonitrile-H2O（42∶58）.The flow rate was 1.0 mL/min.The detection wavelength was at 203 nm.Results:The linearity of paridis saponins I was within the range of 0.304 0～3.040 0 μg（r=0.999 9），and the average recovery was 103.21%（n=9，RSD=1.26%）.The linearity of paridis saponinsⅡwas within the range of 0.308 0～3.080 0 μg（r=0.999 9），and the average recovery was 97.98% （n=9，RSD=2.56%）.Conclusion:This method is simple，sensitive and accurate，and can be used for the quality control of compound maytenus tablets.

RP-HPLC；Compound Maytenus Tablets；Paridis Saponins；Content Determination

2011-07-08）

赵琪钟，男，主管中药师，研究方向：中药质量控制。E-mail:ynsmzqz@126.com