HPLC法测定返魂草中4-羟基苯乙酸的含量

苗艳平，苗艳波，张宪平

(1.长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.吉林省中医药科学院，吉林 长春 130021；3.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

返魂草为菊科千里光属植物SeneciocannabifoliusLess.的干燥地上部分[1]。包括单叶返魂草SeneciocannahifoliusLess.Var.integrifolius(Koidz.)Kitag.和宽叶返魂草(又名麻叶千里光，SeneciocannabifoliusLess.)。具有清热解毒，散血消肿，下气通经，清热祛痰，镇咳平喘。用于瘀血肿痛，跌打损伤，肺内感染，慢性支气管炎，喘息性支气管炎，急性呼吸道感染等症[2]。为更好的控制返魂草药材质量，本文采用4-羟基苯乙酸作为测定对象，建立了用HPLC测定返魂草[3-5]中4-羟基苯乙酸的方法。

1 材料

岛津LC-2010CHT全自动高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站；4-羟基苯乙酸(C8H8O3)对照品(批号：140736-200501；含量：98.5%；规格:约10 mg/支)由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为优级纯；水为自制超纯水；其他均为分析纯。样品提供：吉林敖东力源药业股份有限公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性 色谱柱：钻石C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)；流动相：甲醇-水-冰醋酸(14∶86∶1)混合液；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃;检测波长为224 nm；理论塔板数按4-羟基苯乙酸峰计算，应不低于8 000。

2.1.1 对照品溶液的制备 取4-羟基苯乙酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取本品中粉约5 g，精密称定，精密加水100 mL，称定重量，加热回流提取3 h,放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15 mL,浓缩近干，残渣加甲醇研磨使溶解，转移至5 mL量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪，测定，即得。

2.2 标准曲线和检出限及定量限 取4-羟基苯乙酸对照品溶液(43.14 μg/mL)。分别精密吸取1、5、10、15、20 μL进样，结果进样量在43.14～862.8 μg范围内,回归方程为Y=6 266.7X+1 369.5，r=0.999 9。检测限为0.4 μg；定量限为1.3 μg。

2.3 仪器精密度和样品稳定性、重复性试验

2.3.1 精密度试验 精密吸取同一样品溶液10 μL，注入HPLC仪，重复进样6次，测定对照品溶液峰面积积分值，结果RSD=0.8%。

2.3.2 稳定性试验 精密量取同一供试品溶液在0、2、4、7、12、21 h进样10 μL，以4-羟基苯乙酸峰面积的相对标准偏差反映样品的稳定性，结果RSD=1.0%。

2.3.3 重复性试验 取同一批号样品依含量测定项下方法独立制备6分供试品，分别依法测定，结果RSD=1.4%。

2.4 准确性试验 取样品(0.0225%)适量，研细，精密加入4-羟基苯乙酸对照品溶液4 mL，精密加水50 mL，按质量标准含量测定项下方法测定，进样10 μL，共6分，进行回收率试验。

2.5 含量测定 取样品，按2.1.2项下方法制备供试品溶液后，精密吸取供试品溶液10 μL，按2.1项下色谱条件测定，用外标法计算返魂草中4-羟基苯乙酸的含量，结果见表1。

表1 6批样品4-羟基苯乙酸含量测定结果

3 结论

本文为首次采用HPLC法以4-羟基苯乙酸为定量指标进行含量测定。根据4-羟基苯乙酸对照品的流动相溶液的紫外吸收光谱扫描图，显示在278 nm和224 nm波长处有最大吸收，但在224 nm波长处响应值明显高于278 nm波长处响应值，最终确定224 nm为本法的测定波长。对流动相进行了筛选。1)甲醇-水-冰醋酸(14∶86∶1)混合液，2)甲醇-1%冰醋酸(30∶70)混合液。方法:分离效果较好，保留时间适中，故选择其作为本文方法。专属性:按正文条件采用二极管阵列检测器检查4-羟基苯乙酸峰纯度，结果表明峰纯度较好,无杂质峰包埋。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂[M].北京:人民卫生出版社,1991:附录.

[2]严仲铠,李万林.中国长白山药用植物彩色图志[M].北京:人民卫生出版社,1997:78.

[3]马鸿雁,杨莉.单麻叶千里光中的一个新化学成分[J].药学学报,2008,43(6):626-629.

[4]吴斌,吴立军.麻叶千里光抗菌化学成分的研究(Ⅰ)[J].沈阳药科大学学报,2004,21(5):341-344.

[5]吴斌,吴立军.麻叶千里光抗菌化学成分的研究(Ⅱ)[J].中草药,2005,36(10):1447-1450.