缬沙坦对野百合碱诱导肺动脉高压模型大鼠血浆CRP、ET-1和NO水平的影响

文 宏，李醒三，曾晓聪

(广西医科大学第一附属医院，南宁530021)

特发性肺动脉高压(IPAH)是一种进展迅速且预后极差的疾病，即使给予最积极有效的治疗，5年生存率仅50% ～60%［1］。目前病因及发病机制仍尚未阐明。研究发现神经内分泌因子ET/NO失衡是其重要的病理过程;炎症在肺动脉高压的发展过程中也可能起重要作用［2］。本实验拟通过野百合碱(MCT)复制肺动脉高压模型，外源性缬沙坦干预，观察能否改善ET/NO失衡状态从而降低肺高压模型的肺动脉压。

1 材料与方法

1.1 动物 健康成年雄性Wistar大鼠30只，体质量200～220 g，由广西医科大学实验动物中心提供。

1.2 药物、试剂及仪器 缬沙坦(瑞士诺华公司，商品名代文);MCT(Sigma公司);SPACE LABS 90369型心电监护系统(美国);CRP酶联试剂盒(武汉博士德生物制品有限公司);ET-1试剂盒(北京东亚放免研究所);NO试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3 肺动脉高压大鼠模型的建立及动物分组 参照Hayashi等方法建立肺动脉高压大鼠模型，随机分为单纯肺动脉高压模型组(M组)、缬沙坦干预组(V组)及正常对照组(C组)，每组10只。将MCT结晶以生理盐水配成2%的溶液，M组和V组分别一次性项背部皮下注射MCT 60 mg/kg;C组以等量生理盐水一次性项背部皮下注射;3组动物均同等条件下自由饮水、摄食4周后，V组以缬沙坦20mg/(kg·d)灌胃;其余仍与C、M组同等条件下继续饲养，4周后达实验终点。

1.4 大鼠肺动脉平均压(mPAP)测定和右室肥大指数的计算 参照孙波等的方法测定血流动力学指标，腹腔内注射2%戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉后，仰卧固定，颈正中切口，分离右颈外静脉，将一肝素化的微导管自右颈外静脉插管达肺动脉;微导管另一端接压力换能器并与SPACE LABS 90369型心电监护系统相连，据其压力波形记录mPAP。放血处死动物，取出心脏。剪除心房，分别游离右心室(RV)及左室加室间隔(LV+S)，滤纸吸水后分别称重。以右室肥大指数［RV/(LV+S)］来反映右室的重量变化。

1.5 血浆 CRP、ET-1、NO的检测 在进行完血流动力学检测后，抽取其肺动脉血4 ml，4℃ 3 000 r/min离心10min，取上清液，于－70℃冰箱中保存备用。CRP用酶联吸附反应法测定;ET-1采用放射免疫法测定;NO采用硝酸还原酶法测定，通过测定亚硝酸盐/硝酸盐浓度间接反映NO含量。均严格按试剂盒说明书进行操作。

1.6 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件，数据以±s表示，采用方差分析检验，3组间的总体差异、两组间差异比较采用q检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 mPAP与RV/(LV+S)比较 见表1。

表1 3组大鼠m PAP、右室肥大指数的比较(±s)

表1 3组大鼠m PAP、右室肥大指数的比较(±s)

注:与 M 组比较，*P ＜0.05，△P ＜0.01

组别 n mPAP(mmHg) RV/(LV+S)(%)C 组 10 14.20 ±2.57△ 23.40 ±5.30△M 组 10 32.90 ±5.15 44.10 ±5.93 V 组 10 27.60 ±4.88* 37.80 ±4.44*

2.2 血浆中CRP、ET-1和NO含量变化 见表2。

表2 3 组大鼠 CRP、ET-1、NO 含量的变化(±s)

表2 3 组大鼠 CRP、ET-1、NO 含量的变化(±s)

注:与 M 组比较，*P ＜0.05，△P ＜0.01

组别 n CRP(mg/L) ET-1(pg/ml) NO(μmol/L)C 组 10 12.30 ±0.87△ 48.93 ±7.21△ 136.80 ±45.20△M 组 10 22.60 ±1.03 120.30 ±15.64 72.16 ±12.42 V 组 10 19.70 ±0.96* 94.58 ±9.38* 102.60 ±24.90*

3 讨论

MCT是豆科植物野百合中提取的双吡咯生物碱，在体内经肝脏转化为吡咯野百合碱，能选择性的作用于肺血管内皮细胞，导致内皮细胞肿胀、坏死、脱落，原位血栓形成，内皮下平滑肌增殖、迁移，导致肺动脉结构性重建，最终引起肺动脉高压，是目前国际上公认的复制肺高压模型之一。本实验研究证实M组mPAP高于V组、C组，经缬沙坦干预后V组mPAP有所降低。目前研究认为，肺动脉高压的发生涉及细胞、体液介质和分子遗传等多个方面。血管收缩、血管重构和原位血栓是肺动脉高压发生、发展的重要病理生理基础［3］。本实验发现M组CRP高于其他两组，说明炎症反应在肺高压的产生和形成过程中扮演了重要的角色，与文献报道一致［4］。经过缬沙坦干预后，CRP水平下降。同时，作为重要的神经体液调节机制，ET/NO的失衡可能是肺高压的病理基础之一，经过缬沙坦干预后ET/NO失衡亦有所改善。

缬沙坦为选择性AT1受体拮抗剂，通过与AT1受体选择性结合，从而减少AngⅡ对内皮细胞的刺激，使ET排泄增加，改善内皮功能，并切断AngⅡ与ET的正反馈机制，同时刺激AngⅡ与AT2受体结合，使内皮细胞合成NO增加，发挥其扩张肺血管作用，从而降低肺动脉压力;抑制血管平滑肌细胞的增殖、迁移;阻断AngⅡ促进钙内流的作用，减轻内皮细胞的钙超负荷，使内皮功能失调得以纠正等机制达到对血管内皮功能的保护作用［5］。此外，缬沙坦通过阻断血小板中的AngⅡ，对血小板聚集和血小板主要受体有持久的抑制作用，且其抗血小板的特性并不依赖于用药剂量和疗程［6］。从而抑制血小板的活化反应，改善纤溶功能，抑制血栓形成。

本研究结果显示，经过缬沙坦干预后，可有效降低MCT性肺高压大鼠的肺动脉压，降低CRP等炎性指标水平［7］，改善ET/NO失衡状态，上述结果可能与其阻断AngⅡ与内皮细胞的结合，从而产生独特的内皮细胞保护功能有关。

［1］Opitz CF，Wensel R，Winkler J，etal.Clinical efficacy and survivalwith first-line inhaled iloprost therapy in patients with idiopathic pulmonary arterial hypertension［J］.Eur Heart J，2005，26(18):1895-1902.

［2］Bogaard HJ，Abe K，Vonk Noordegraaf A，etal.The right ventricle under pressure:cellular and molecular mechanisms of right-heart failure in pulmonary hypertension ［J］.Chest，2009，135(3):794-804.

［3］Stenmark KR，McMurtry IF.Vascular remodeling versus vasoconstriction in chronic hypoxic pulmonary hypertension:a time for reappraisal［J］.Circ Res，2005，97(2):95-98.

［4］王毅，林伟，施举红.野百合碱处理大鼠肺动脉高压模型的塑造［J］.浙江临床医学，2007，9(6):749-750.

［5］王高频，赵力艳，陆红.缬沙坦对高血压患者血管内皮功能的影响［J］.中国心血管杂志，2004，9(5):368-370.

［6］Serebruany VL，Pokov AN，Malinin AI，et al.Valsartan inhibits platelet activity at different doses inmild tomoderate hypertensives:Valsartan Inhibits Platelets(VIP)trial［J］.Am Heart J，2006，151(1):92-99.

［7］Yang J，Jiang H，Yang J，et al.Valsartan preconditioning protects against myocardial ischemia-reperfusion injury through TLR4/NF-kappaB signaling pathway［J］.Mol Cell Biochem，2009，330(1-2):39-46.