不同化疗药物对口腔鳞状细胞癌抑制率的体外实验分析

董立新，李向春，董淑芬，付占昭

(1秦皇岛市第一医院，河北秦皇岛066000;2昌黎县医院)

本文通过MTT法检测分别加入环磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、平阳霉素(PYM)、紫杉醇(PTX)、顺铂(CDDP)5种化疗药物后的23例口腔鳞状细胞癌细胞样本的活细胞数，并通过与空白对照组比较得出5种化疗药物对口腔鳞状细胞癌细胞的体外抑制率来反映5种化疗药物的抗肿瘤活性，并简要复习5种药物的作用机制，希望对口腔颌面部鳞状细胞癌化疗方案的制定有所帮助。

1 材料与方法

1.1 材料 23例口腔颌面部恶性肿瘤组织新鲜标本均来自秦皇岛市第一医院口腔科2009年9月～2010年10月手术和活检组织标本，所有病例经病理诊断证实为鳞状细胞癌。取材部位:舌7例、牙龈7例、颊6例、口底2例、唇1例。肿瘤细胞抑制率检测选用药物:CTX、5-FU、PYM、PTX、CDDP。试剂:MTT为美国Sigma公司产品，RPMI 1640培养基和胰蛋白酶为美国Gibco公司产品，胎牛血清为杭州四季青生物工程材料公司产品。

1.2 MTT法检测 肿瘤细胞抑制率的MTT检测方法参考周晓健等［1］方法并依据我处实验条件做出相应修改:①肿瘤组织标本用GKN液冲洗2～3次，去除血块及坏死组织，以胰蛋白酶2 mg/ml消化40 min，200目滤网收集细胞入10 ml GKN液，加于离心管中1 000 r/min离心7 min，弃上清，细胞混悬于适量RPMI 1640培养基(含15%胎牛血清)中，调细胞数为5×106/ml;②细胞培养板及培养基预温至37℃;③每孔加细胞悬液200μl，每4孔为1组，设实验组及对照组，轻微振荡混匀;④培养板置37℃、5%CO2培养箱中培养24 h，各孔加入抗肿瘤药物(CTX:120μg/ml;5-FU 40 μg/ml;PYM:1.28 μg/ml;PTX:11.6 μg/ml;CDDP 12.6μg/ml)，继续培养48 h;⑤每孔加入MTT(5 mg/ml)20μl，于37℃、5%CO2培养箱中继续培养4 h以上;⑥离心(1 000 r/min)，弃上清，每孔加入DMSO 100 μl，终止反应;⑦ST-360型酶标仪检测各孔在450 nm下的OD值;⑧肿瘤细胞生长抑制率计算公式:肿瘤细胞抑制率=(1－A/B)×100%，A为给药孔平均OD值，B为对照孔平均OD值;⑨药物敏感性判断标准:高度敏感，细胞生长抑制率≥50%;敏感，细胞生长抑制率≥30%;不敏感，细胞生长抑制率﹤30%。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0软件包进行统计学分析，实验数据均以±s表示，各药物间差别显著性应用多个独立样本非参数检验法检验。以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

各种化疗药物对口腔鳞状细胞癌细胞抑制率及敏感程度情况见表1。由表1可见，本实验23例口腔鳞状细胞癌组织样本经药物敏感试验后测得各药物对肿瘤细胞抑制率以PTX为最高，P＜0.05。

表1 5种抗肿瘤药物对口腔鳞状细胞癌细胞抑制率极敏感程度比较

3 讨论

口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤，采用手术为主的综合治疗已为人们广泛接受，如何选择对肿瘤敏感的抗肿瘤药物是临床工作中研究的重点。目前应用于口腔颌面部恶性肿瘤治疗的药物主要有 CTX、5-FU、PYM、PTX、CDDP，其作用机制各不相同［2～4］。

由于肿瘤在个体的差异性，相同组织类型、同样临床阶段的恶性肿瘤，对于不同的患者，即使用同一化疗药物，同样治疗方案，其疗效常不一致［5］。因此在为患者进行化疗前有必要进行针对患者肿瘤的化疗药物敏感性测定，以实现化疗的个体化。MTT法则是目前临床上常用的化疗药物敏感性测定方法［6］。本研究通过MTT法检测5种化疗药物针对口腔鳞状细胞癌细胞的抑制率反映药物的敏感性，结果表明PTX对口腔鳞状细胞癌细胞的抑制效果较强，CTX、5-FU、PYM、CDDP间无差异，随着 PTX在抗肿瘤临床治疗中的应用逐渐广泛，可通过更广泛的临床观察确证PTX对口腔癌的治疗效果。

［1］周晓健，陈万涛，林李嵩，等.口腔颌面部恶性肿瘤化疗药物敏感性临床分析［J］.口腔颌面外科杂志，2000，10(2):134-137.

［2］黄峻，皇祖珊.临床药物手册［M］.4版.上海:上海科学技术出版社，2008:149.

［3］林毅，欧子民，邝海.应用甲酰四氢叶酸钙使5-FU增效的舌癌化疗［J］.临床口腔医学杂志，1999，15(12):79.

［4］李雅东.口腔颌面部恶性肿瘤化疗药物现状［J］.天津医药，2002，14(3):22-23.

［5］邱春元.张嘉庆.化疗药物敏感性测定方法近况［J］.中国肿瘤临床，1991，18(5):368-372.

［6］郑顺友，朱翌，丁熙，等.口腔癌中HSP-70表达和体外药物敏感试验的关系［J］.实用口腔医学杂志，2006，22(16):1839-1841.