抗纤丸的质量标准研究*

黄雁霞，潘赞红，毕丽萍，边 景，王 丽

(天津市传染病医院，天津 300192)

抗纤丸为本院院内制剂，主要功能为活血化瘀，扶正祛邪，抗纤维化，用于慢性活动性肝炎及肝硬化。由于原标准中鉴别方法略显简单，无法准确控制质量，所以本实验建立薄层色谱法、高效液相色谱法对抗纤丸进行质量控制，使该制剂质量标准有较大幅度提高。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪LC-20AT,LCsolution色谱工作站(日本岛津)；五味子甲素对照品(中国药品生物制品检定所，批号 0746-200107)、黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110715-200212)，当归对照药材(中国药品生物制品检定所，批号120927-200613)、川芎对照药材(中国药品生物制品检定所，批号120918-200608)；抗纤丸(本院制剂室提供，规格：9 g/丸，批号 20100720、20100709、20100629 、20100530) ；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。

2 方法和结果

2.1当归、川芎的薄层鉴别

2.1.1溶液制备

2.1.1.1供试品制备 取本品5 g，剪碎，加乙醚40 ml，加热回流30 min，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2 ml使溶解，作供试品溶液。

2.1.1.2对照品制备 取当归、川芎对照药材各1 g,加乙醚20 ml，加热回流30 min，过滤，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2 ml使溶解，作为对照药材溶液。

2.1.1.3阴性样品制备 按处方比例(除当归、川芎)根据制法制成阴性样品，按“2.1.1.1”项下方法提取，作为阴性对照溶液。

2.1.2薄层条件 参照薄层色谱法[1]试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各6 μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 mm)下检视。在其色谱中与对照药材色谱相应的位置上应有相同颜色的斑点[1]。结果见图1。

A1.供试品20100720 A2.供试品20100709 A3.供试品20100629 A4.供试品20100530 B.对照药材当归 C.对照药材川芎 D.阴性对照

2.2五味子的薄层鉴别

2.2.1溶液制备

2.2.1.1供试品制备 取本品9 g，剪碎，加乙醚40 ml，加热回流1 h，滤过，滤液挥干，残渣加丙酮1 ml使溶解，作供试品溶液。

2.2.1.2对照品制备 取五味子甲素对照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含五味子甲素1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.1.3阴性样品制备 按处方比例(除五味子)根据制法制成阴性样品，按“2.2.1.1”项下方法提取，作为阴性对照溶液。

2.2.2薄层条件 照薄层色谱法[1]试验，吸取供试品溶液8 μl，对照品溶液4 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 mm)下检视。在其色谱中与对照品及药材色谱相应的位置上应有相同颜色的斑点[1]。结果见图2。

2.3黄芩中黄芩苷的含量测定

2.3.1色谱条件 高效液相色谱仪LC-20AT,LCsolution色谱工作站。以奥泰十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂(250 mm×4.6 mm，5 μm)；甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相；流速1.0 ml/min，检测波长为280 mm，柱温35 ℃，进样量20 μl，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2 500。

A1.供试品20100720 A2.供试品20100709 A3.供试品20100629 A4.供试品20100530 B.对照品 C.阴性对照

2.3.2溶液液备

2.3.2.1供试品制备 取本品5 g剪碎，混匀，取1.0 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加入70%乙醇至刻度,超声提取60 min，放冷后加70%乙醇至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，即得。

2.3.2.2阴性对照溶液的制备 按处方比例(黄芩除外)根据制法制成的阴性样品，按“2.3.2.1”项下方法提取，作为阴性对照溶液。

2.3.2.3对照品溶液制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含黄芩苷0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.3专属性实验 依“2.3.1”项下的色谱条件，取黄芩苷对照品、供试品溶液、阴性对照溶液进样，记录色谱图，见图3。结果在黄芩苷出峰位置未见其他色谱峰，表明在实验条件下，其他药材成分对测定无干扰。

2．3．4线性关系考查 精密量取储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 ml，分别置100 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述6种浓度的对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，按“2.3.1”色谱条件，测定各自峰面积，以峰面积值为横坐标，样品浓度(μg/ml)为纵坐标，求得回归方程为：Y=9.818 5×10-6X+0.448 77(r=0．999 5)，黄芩苷在0.1～1.0 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.3.5稳定性考查 取批号为20100629的样品1份，剪碎，取1 g，按照“2.3.2.1”供试品溶液制备操作，按“2.3.1”色谱条件分析，分别在0、1、3、16、18、20 h，测定样品中黄芩苷峰面积，测得峰面积值的RSD为1.72%，符合要求。

2.3.6精密度试验 取批号为20100629的样品1份，剪碎，取1g，按照“2.3.2.1”供试品溶液制备操作，按“2.3.1”色谱条件分析，连续进样5次，测定样品黄芩苷峰面积，测得峰面积值的RSD为0.58%，符合要求。

1.黄芩苷

2.3.7重复性试验 取同一批号(20100629)样品，共6份，剪碎，取1 g，按照“2.3.2.1”供试品溶液制备操作，按“2.3.1”色谱条件分析，测定每份样品中黄芩苷含量。结果样品中含量为2.134 mg/g，RSD为0.95%，符合要求。

2.3.8回收率试验 取同一批号(20100629)样品，剪碎，取0.5 g，共6份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品溶液(1 mg/ml)2.0 ml，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，依法测定峰面积，计算回收率，得平均回收率为99.78%，RSD为1.58%。结果见表1。

2.3.9样品测定 取3批样品，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按所给色谱条件分别取供试品溶液及对照品溶液进样，测定峰面积，用外标法计算含量，结果见表2。

表1 黄芩苷加样回收率试验结果

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1对制剂提取方法的优化 本实验对提取方式、提取溶剂、提取溶剂量和提取时间进行了比较，采用70%乙醇对样品进行加热回流提取与超声提取，时间均为60 min，超声处理所得结果比加热回流提取所得结果稍高，故采用超声提取方法处理供试品。在选择提取时间时，分别用70%乙醇超声提取30、45和60 min,结果超声60 min测得的黄芩苷峰面积较大，所以提取时间定为60 min。

3.2医疗机构制剂绝大部分为临床多年经验的总结，并且疗效确切，在患者中广受欢迎，但其质量控制方法相对简单，不能有效地控制质量。本试验的抗纤丸就是一例。通过实验，运用了薄层层析和高效液相色谱分析方法，方法简便、重复性好，为抗纤丸的质量控制提供了分析方法，加大了质控力度。本制剂中黄芩苷的含量均大于1.2 mg/g，符合相关制剂标准。

1 中国药典.一部.2005: 109，211, 311，463