2型糖尿病8-异前列腺素F2α与脂联素基因SNP+45（T/G）多态性的相关性

徐玉善 赵云娟 杨慧英 刘 华 李 红 黄云超

脂联素具有促进糖脂代谢、减轻胰岛素抵抗、抗感染以及抗动脉粥样硬化等作用[1]。脂联素基因编码位于染色体的3q27，与糖尿病的易感位点位于同一区域[2]。国内一项Meta分析显示，脂联素基因+45G为中国2型糖尿病（T2DM）的危险等位基因型，SNP+45GG基因型与T2DM显著相关[3]。氧化应激水平升高是导致糖尿病慢性并发症的重要机制[4]。8-异前列腺素F2a是反应体内氧化应激的较稳定指标之一，其水平稳定，可以特异、准确地反映体内的氧化应激水平[2]。本研究旨在通过检测T2DM患者脂联素SNP+45（T/G）不同基因型的8-异前列腺素F2α水平，探讨脂联素基因多态性与T2DM氧化应激的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2008年3月—2009年10月于我院就诊的T2DM患者（T2DM组）120例，男63例，女57例，平均年龄（50.7±7.8）岁，病史2～20年，平均（10.2±7.9）年，体质量指数（BMI）≥20 kg/m2，平均（24.6±3.25）kg/m2。纳入标准：参照1999年WHO糖尿病诊断标准，空腹血糖≥7.0 mmol/L或（和）口服75 g葡萄糖粉后2 h血糖≥11.1 mmol/L，若只符合一项，需在另一天复查确认。排除标准：1型糖尿病和其他特殊类型糖尿病者；住院期间处于感染、急性心肌梗死、外伤、手术、糖尿病酮症酸中毒、糖尿病高渗性昏迷等急性应激状态者。同时取2009年1月—2009年3月来我院门诊正常体检者60例为对照组，男31例，女29例，平均年龄（49.5±6.8）岁，BMI正常（<24 kg/m2）,平均（23.3±2.4）kg/m2。2组性别（χ2=0.011）、年龄（t=1.014）差异无统计学意义（P>0.05），BMI差异有统计学意义（t=1.991，P<0.01）。

1.2 主要仪器与试剂 全自动生化分析仪（AU5421，日本奥林巴斯），放射免疫法仪器GC-1500购自中国科学技术大学创新股份有限公司中佳分公司，8-异前列腺素F2α试剂盒购自Cayman公司。

1.3 脂联素基因多态性的检测 采用常规氯酚萃取法提取外周血白细胞DNA；PCR上游引物5′- GCA GCT CCT AGA AGT AGA CTC TGC TC-3′，下游引物5′-GCA GGT CTG TGA TGA AAG AGG CC-3 ′。PCR反应体积为50 μL：10×buffer 5 μL，25 mmol/L MgCl23 μL，2 mmol/L三磷酸脱氧核糖核苷（dNTP）1 μL，上下游引物（20 μmol/L）各1 μL，DNA 模板1 μL，Taq 酶（5×103U/L）1 μL，灭菌纯水37 μL。反应条件：94℃初期变性5 min，94℃变性30 s，63℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35个循环，72℃延伸5 min。PCR产物的酶切：用SmaⅠ酶切，30℃加热模块，过夜酶切。2%的琼脂糖凝胶，电泳结束于凝胶成像系统观察条带并照相。选择典型的TT、TG和GG型条带样品送晨绿生物公司进行测序。

1.4 观察指标 全自动生化分析仪测定空腹血糖（FPG）、总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）；放射免疫法测定空腹胰岛素（FINS）；胰岛素抵抗采用稳态模型HOMA公式评估，即HOMA-IR=FINS（mU/L）×FPG（mmol/L）/22.5；竞争酶免疫测定法检测血清8-异前列腺素F2α的水平。

1.5 统计学分析 采用SPSS 11.5统计软件进行分析。计量数据进行正态分布检验，非正态分布资料，经对数转换后进行分析。以Hardy-Weinberg平衡吻合度检验样品的群体代表性，2组间均数比较用t检验，多组间均数比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK-q法，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 8-异前列腺素F2α检测 T2DM患者血清8-异前列腺素F2α水平高于对照组[（57.92±11.87）ng/L vs（24.81±13.5）ng/L]，差异有统计学意义（t=16.84，P<0.01）。

2.2 T2DM脂联素不同基因型Hardy-Weinberg吻合度检验 372 bp的脂联素基因经SmaⅠ酶切产生3种基因型：TT（野生型，372 bp）；TG（杂合子型，372 bp、163 bp、209 bp）；GG（纯合子突变型，163 bp、209 bp）。对群体资料作Hardy-Weinberg平衡吻合度检验，符合Hardy-Weinberg平衡定律（T2DM组χ2=2.8，对照组χ2=0.70，总体χ2=0.932，均P>0.05）；120例T2DM患者中T等位基因的频率为66.7%，G等位基因的频率为33.3%，与对照组（T等位基因的频率为73.3%，G等位基因的频率为26.7%）比较差异无统计学意义（χ2=1.659，P>0.05）。 2型糖尿病GG基因型与对照组比较差异有统计学意义（χ2=7.059，P<0.05），见表1。

表1 T2DM组与对照组SNP 45等位基因型分布

2.3 T2DM患者脂联素基因SNP 45多态性不同基因型临床指标比较 各基因型间FPG、CHO、TG、HDL-C、LDL-C、HOMA-IR及血清8-异前列腺素F2α水平差异均无统计学意义（P ＞0.05）；GG型BMI高于TT及TG型（均P<0.05），见表2。

表2 T2DM患者脂联素基因SNP 45多态性不同基因型临床指标比较 ±s）

表2 T2DM患者脂联素基因SNP 45多态性不同基因型临床指标比较 ±s）

*P<0.05

TT TG GG F 64 32 24 BMI（kg/m2）23.12±2.51 23.42±3.32 25.43±3.26 5.69*FPG（mmol/L）10.23±3.58 10.09±2.98 11.55±3.91 1.48 CHO（mmol/L）5.33±1.21 5.08±1.36 5.24±1.28 0.416 TG（mmol/L）2.21±1.39 2.14±1.72 2.18±1.47 0.023 64 32 24 HDL-C（mmol/L）1.11±0.32 1.05±0.27 1.19±0.31 1.44 LDL-C（mmol/L）2.96±0.76 3.07±0.82 2.87±0.69 0.49 2.96±1.86 3.17±1.92 3.65±2.23 1.17 8-异前列腺素F2α（ng/L）55.51±16.69 59.89±13.87 59.60±12.91 1.16 TT TG GG F基因型 n基因型 n HOMA-IR

3 讨论

脂联素基因突变可导致脂联素分泌减少或功能不全[6]。Hara等[7]报道日本人患T2DM的风险与脂联素基因SNP+45（T/G）多态性有关。+45G等位基因是由糖耐量异常（impaired glucose tolerance，IGT）转变成糖尿病的危险预测因子[8]。本研究结果进一步证实糖尿病患者GG基因型者居多，与国内学者报道一致[9]。目前研究认为，胰岛素抵抗是其发病的关键环节[10]。Stumvoll等[11]对371例非糖尿病人群研究结果显示，在无糖尿病家族史的人群中，含有G等位基因者的BMI高，胰岛素敏感性下降[6]。本研究结果显示，GG基因型的HOMA-IR较TT和TG呈增高趋势，但差异无统计学意义，BMI均增高且差异有统计意义，提示GG基因型患者可能有较明显的胰岛素抵抗。另一研究示+45G等位基因者可能由于合并有低度炎症，而使IGT的发生率增高[12]。

糖尿病胰岛素抵抗、低度炎症均可使体内氧化应激水平增高。本研究显示，血浆8-异前列腺素F2α水平在T2DM组明显高于对照组，表明T2DM患者体内氧化应激可能明显增加，但对于有较明显的胰岛素抵抗的GG型基因T2DM患者，其体内的8-异前列腺素F2α水平较TT和TG型并无明显增高。鉴于本研究中样本数较少，脂联素SNP+45 GG基因型的氧化应激状况在其易患糖尿病的病生理机制中的作用尚有待扩大样本量进一步研究。

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