经典恒温法预测灯盏花素水溶液的有效期

耿桂香， 李小芳， 高永良

(1.成都中医药大学，四川成都610075;2.军事医学科学院毒物药物研究所，北京100850)

灯盏花，又名灯盏细辛，是菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz的干燥全草，具有活血通络止痛、祛风散寒之功效，用于中风偏瘫、胸痹心痛、风湿痹痛、头痛、牙痛［1］。原系云南民间苗族、彝族等少数民族习用草药，最早见载于《滇南本草》“灯盏花，性寒，味苦。治小儿脓耳，捣汁滴入耳内”［2］。在我国主要分布于西部及西南部高山和亚高山的山坡草地及林缘地带［3］。其主要有效成分是灯盏花素(breviscapine，Bre)［4］，以灯盏乙素(scutellain)-4’，5，6-三羟基黄酮-7-葡萄糖醛酸苷为主(占95%以上)，还包括少量灯盏甲素(芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷)。1980年，在昆明召开的治疗瘫痪新药灯盏花素鉴定会上，证明灯盏乙素是治疗脑血管疾病所致瘫痪的有效成分［5］。

灯盏花素为一黄酮类化合物，易溶于甲醇，难溶于水，微溶于乙醇、丙酮、三氯甲烷，在强酸条件下易水解氧化，在碱性条件下会发生开环反应，稳定性都会受到影响。在临床上使用的制剂主要有口服和静脉滴注，鼻腔给药具有使用方便、吸收迅速、生物利用度高等优点，且具有一定的脑靶向性［6］。鉴于上述优点，鼻腔给药逐渐成为当今制剂学研究领域的热点［7］，同时也存在难点。随着制剂学的不断发展，鼻腔给药可以治疗全身性疾病的这一作用倍受重视［8］，目前，灯盏花素的鼻腔给药正处于进一步研究阶段。本实验使用现代制剂技术增加了灯盏花素的溶解度，将其制成水溶液。本实验通过经典恒温法预测灯盏花素水溶液的有效期，其结果如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UV-2450型紫外可见分光光度计(SHIMADZU，日本产);日本岛津公司SPD-10AVP型高效液相色谱仪，10-ATVP型紫外检测器，浙江大学N2000色谱工作站;万分之一电子分析天平(Sartorius);十万分之一电子分析天平(Sartorius);DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);AC-3型多功能熔焊机(安阳市工业电器总厂);SCD-Ⅱ高纯水装置(军事医学科学院卫生装备研究所)

1.2 试药 灯盏花素原料药(批号:HB20081151，含乙素97.5%);灯盏花素水溶液(自制，C=50 mg/mL);甲醇(Caledon实验有限公司，色谱纯);冰醋酸(北京化学试剂公司，分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:ApolloC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(42∶58∶1);紫外检测波长:335 nm;体积流量:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:20μL。

2.2 灯盏花素水溶液的配制 精密称取灯盏花素5.0 g及一定量的助溶剂，加入0.01%苯扎氯铵水溶液定容至100 mL，振摇使其充分溶解后，得到50 mg/mL的灯盏花素水溶液。

2.3 供试品溶液配制 精密移取灯盏花素溶液0.5 mL，加流动相稀释至溶液质量浓度为5 μg/mL，再用孔径0.45 μm的微孔滤膜过滤后进样。

2.4 标准曲线绘制 取灯盏花素对照品贮备液适量，分别加流动相制得质量浓度为 2、6、10、16、20μg/mL 的一系列溶液，进样测定并记录峰面积。以峰面积A对质量浓度C进行线性回归，得线性方程为:A=55499C-27363(R2=0.999)，表明灯盏花素在2～20 μg/mL范围内线性关系良好。

2.5 日内、日间精密度 配制高、中、低3个质量浓度为16、10、6 μg/mL 的灯盏花素溶液，分别于0、2、4、6 h 和8 h 及0、1、2、3 d和4 d内测定，其日内、日间精密度均小于2%(n=5)，表明该方法稳定性较好。

2.6 回收率试验 为考察方法的准确性，进行了高、中、低3个质量浓度的回收率试验。分别精密移取灯盏花素对照品贮备液0.4、0.5、0.6 mL 至9 个10 mL 量瓶，每个 3 份，并按处方比例加入灯盏花素水溶液剂的空白辅料，流动相定容，摇匀，溶液依法测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.7 重复性试验 取同一浓度的灯盏花素对照品溶液，重复6次注入色谱仪，记录灯盏乙素的色谱峰面积，得出其RSD 为0.19%。

表1 回收率试验结果 (n=3)

2.8 经典恒温试验［9］将灯盏花素样品溶液灌装于2mL安瓿中，熔封，分别置于70、80、90、100℃的恒温烘箱中，各温度按试验设计时间取样，每次分别取出3支安瓿，自然冷却至室温，按2.3项下配制成供试品溶液，进样20μL测定，结果见表2、表3。

表2 灯盏花素水溶液在不同温度下的分解数据

表3 灯盏花素水溶液在不同温度下的回归方程及分解速度常数

根据 Arrhenius指数定律:lgK=-E/2.303RT+lgA，以lgK对1/T做线性回归，得回归方程:lgK=-3767.82/T+8.038;|r|=0.9593。由此推算室温(25℃)的分解速度常数 K 及有效期为:K25℃=2.51636 × 10-5h-1，t0.925℃=0.48 年。

3 讨论

3.1 灯盏花素难溶于水，本试验通过加入助溶剂，在很大程度上增加了灯盏花素在水中的溶解度，可达到50 mg/mL，但是该溶液稳定性不佳，对今后的上市流通环节不甚理想，可是高浓度灯盏花素水溶液的制备将为其临床上多种溶液剂型和给药途径的开发和研究奠定基础。

3.2 本试验制备的灯盏花素水溶液的质量浓度为50 mg/mL，通过经典恒温实验预测灯盏花素水溶液的有效期为0.48年。该水溶液的稳定性可能受此助溶剂的影响，由于灯盏花素在碱性溶液中易发生开环反应，且该制剂浓度较高，可能从而导致了该溶液的稳定性不佳。如何有效地提高该溶液的稳定性有待于进一步的研究。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:138.

［2］竺芷庵.滇南本草［M］.上海:上海世界书局，1937:99.

［3］中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴:第4册［M］.北京:科学出版社，1985:444.

［4］卫生部药品标准中药成方制剂(第20册)［S］.1990:103.

［5］宫碧琴.治疗瘫痪新药灯盏花素鉴定会在昆明召开［J］.中草药，1980，11(10):480.

［6］蒋新国.药物的鼻黏膜吸收［J］.中国新药杂志，2003，12(11):902.

［7］王东兴，高永良.鼻腔给药新剂型研究进展［J］.中国新药杂志，2002，11(8):589-592.

［8］陈新梅.用于全身治疗的鼻腔给药系统的研究概况［J］.中国现代应用药学杂志，2007，24(1):23-27.

［9］彭贤东，唐志立.盐酸普鲁卡因注射液的稳定性考察［J］.现代医药卫生，2005，21(12):1500-1501.