榅桲提取物对抗血栓作用的实验观察

乌兰巴依尔， 杨永新， 王雪飞， 周文婷， 阿布来提·阿布力孜， 依巴代提·吐乎提， 艾尼瓦尔·吾买尔*

(1.新疆巴州卫生学校，新疆 库尔勒841000;2.新疆医科大学，新疆乌鲁木齐830054)

榅桲(Cydonia Oblanga Miller，COM)在我国有着悠久历史，是蔷薇科(Rsaceae)榲桲属(Cydonia)的果树［1］，是维吾尔医应用历史悠久的常用药材之一。维文名为比叶(Biye)，别名为蛮檀，英文名Quince。根据《新疆维吾尔药志》及《维吾尔常用药材学》记载，维吾尔族用榲桲补血、补脑、止咳、降血压、降脂;它具有治胃病、肝病、心脏病、月经不调等功效［2-4］。现代研究表明，榲桲中化学成分极为丰富，成熟果实含有果糖、肉质、原果胶、有机酸、氨基酸等;果肉含肉豆蔻酸、异油酸甘油脂、挥发油、黄酮等;果皮含庚基乙基醚和壬基乙基醚等［5］;种子主要含黏质、苦杏仁苷、脂肪油等;叶子含有生物碱、葡萄糖苷、鞣质、黏质、酮糖、醛糖、脂质、维生素C、氰苷等［6-8］。国外广泛用于食品和药品中［9］，目前在国内榲桲用于医学、食品等方面没被开发，榅桲应用的物质基础及活性缺乏深入研究［8］。本课题以开发和研究新疆民族药作为出发点，充分利用榲桲在新疆的地产资源和栽培资源［4］，为其提供口服型抗栓药具有一定意义。本实验主要对榅桲叶进行水提取，从抗凝血、纤溶、抗动脉血栓等方面探讨榅桲提取物的作用及机制，为其进一步研究有效部位和作用靶点提供药理学依据。

1 仪器、材料、动物

1.1 药品与试剂 榅桲提取物(新疆医科大学药学院药理教研室提供)，阿司匹林(新疆华康药业有限公司，批号020511)，银杏叶片(天津天士力制药有限公司，批号259)，乌拉坦(上海三浦化工有限公司，批号080409)，凝血酶时间(TT)测定试剂盒(上海太阳生物技术有限公司，批号121046)，凝血酶原时间(PT)测定试剂盒(上海太阳生物技术有限公司，批号102108)活化部分凝血活酶时间测定试剂盒(上海太阳生物技术有限公司，批号112098)。

1.2 仪器 RE-52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，DK-S24数显电热恒温水浴锅(江苏省金坛市医疗仪器厂)，SK8210HP超声仪(上海科导仪器厂)，BL1500电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，KH-120M型台式高速离心机(上海安亭科技仪器厂)，定时钟(上海第二钟厂)，秒表(上海秒表厂)，分析天平(梅特勒-托利多仪器厂)。

1.3 动物 ICR小白鼠，雄性，60只，体质量18～22 g，清洁级;均由新疆医科大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK(新)2003-001。

Wistar大鼠，雄性，42 只，体质量 300 ～350 g，清洁级;均由新疆医科大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK(新)2003-0001。

2 试验方法

2.1 榅桲提取物对小鼠优球蛋白溶解时间(ELT)的影响［10-12］取小白鼠60只，体质量22～28 g，雄性，随机分为6组，分别灌胃给予生理盐水对照组，榅桲提取物小、中、大剂量(20、40、80 mg/kg)组，阳性对照组阿司匹林(5 mg/kg)和银杏叶片(20 mg/kg)连续给药14 d，在末次给药1 h，眼眶静脉采血1 mL，试管中加入3.8%枸橼酸钠抗凝，严格控制抗凝剂与血的比例为1∶9。3000 r/min离心10 min，取血浆0.25 mL，加4.5 mL蒸馏水，再加入1%乙酸0.05 mL 使 pH为9，充分混合后，将混合液置于4℃的冰箱中10 min后，3000 r/min离心5 min，将优球蛋白沉淀分出。倾去上清液，将试管倒置于滤纸上吸取多余的液体。加硼酸缓冲液(pH=9.0)0.25 mL于试管中，用细玻璃棒小心搅拌溶解约1 min，将试管放入37℃水浴中2 min后，加入0.025%氯化钙0.25 mL，使其凝固。每隔10 min观察1次，直至凝块完全溶解为止，记录其凝块完全溶解所需的时间，即为优球蛋白溶解时间。结果见表1。

表1 榅桲水提取物对小鼠优球蛋白溶解时间的影响(± s，n=10)

表1 榅桲水提取物对小鼠优球蛋白溶解时间的影响(± s，n=10)

注:与生理盐水组比较，*P＜0.01;小剂量组与阿司匹林组比较，#P＜0.05;大剂量组与银杏叶片组比较，▲P ＜0.05。

/min生理盐水组 10 —257.8 ±52.161银杏叶片组 10 20 156.6 ±25.131*阿司匹林组 10 5 112.3 ±57.669*小剂量组 10 20 183.0 ±49.315*#中剂量组 10 40 157.5 ±11.167*大剂量组 10 80 111.7 ±37.901＊▲组别 动物数/只剂量/(mg/kg)优球蛋白溶解时间

观察方法:药物对大鼠血栓形成抑制率。结果见表2。

表2 榅桲提取物对大鼠动—静脉旁路血栓形成的影响(± s，n=7)

表2 榅桲提取物对大鼠动—静脉旁路血栓形成的影响(± s，n=7)

注:与生理盐水组比较，*P＜0.05;大剂量组与阿司匹林组比较，#P ＜0.05;大剂量组与银杏叶片组比较，▲P ＜0.05。

组别 动物数/只剂量/(mg/kg)血栓/mg抑制率/%生理盐水组 7 — 15.17±2.250—银杏叶片组 7 20 8.014 ±0.807* 47.4阿司匹林组 7 5 9.317 ±3.743* 38.8小剂量组 7 20 9.971 ±2.445* 34.2中剂量组 7 40 6.971 ±1.903* 53.9大剂量组 7 80 3.610 ±0.453*#▲ 76.3#▲

2.3 榅桲提取物对大鼠凝血功能的影响 取Wistar大鼠，雄性，42只，体质量300～350 g，动物分组，给药，麻醉及手术方法同2.2项。在无菌条件下，造模20 min后，腹主动脉采血，用3.8%枸橼酸钠抗凝，血液与抗凝剂之比为9∶1，3500 r/min离心15 min，取血浆。按试剂盒说明测定 TT、PT和APTT。结果见表3。

2.4 实验数据的分析与处理 观察指标以质量分数%表示;实验结果用±s表示，各组之间比较采用t检验，试验结果数据采用SPSS16.0统计软件包处理。

3 结果

3.1 榅桲提取物对小鼠优球蛋白溶解时间(ELT)的影响结果如表1所示，与生理盐水对照组相比，榅桲提取物小、中、大剂量(20、40、80 mg/kg)组显著缩短小鼠优球蛋白的溶解时间(P＜0.01)，有统计学意义。小剂量组与阿司匹林组比较(P＜0.05)，有统计学意义;大剂量组与银杏叶片组比较(P＜0.05)，有统计学意义。见表3。

3.2 榅桲提取物对大鼠动—静脉旁路血栓形成的影响结果如表2所示，与生理盐水对照组相比，榅桲提取物小、中、大剂量(20、40、80 mg/kg)组均明显减轻血栓湿重(P＜0.05)，有统计学意义。大剂量组与阿司匹林组相比(P＜0.05)，有统计学意义;与银杏叶片组相比(P ＜0.05)，有统计学意义。榅桲提取物小、中、大剂量组对大鼠动-静脉旁路血栓抑制率分别为 34.2%，53.9%和76.3%(P ＜0.05)。

3.3 榅桲提取物对大鼠凝血功能的影响 结果如表3所示，与生理盐水对照组相比，榅桲提取物小剂量组(20 mg/kg)明显延长PT(P＜0.05);榅桲提取物中、大剂量(40、80 mg/kg)组显著延长 TT、PT、APTT(P ＜0.01)。榅桲提取物大剂量组与阿司匹林组和银杏叶片组比较(P＞0.05)，无统计学意义。见表3。

4 讨论

在前一期的实验研究中发现榅桲提取物明显延长出血时间和凝血时间，具有明显的纤溶和抗肺栓塞作用。本实验进一步对榅桲提取物的抗血栓作用及机制进行了药理学基础研究。

在小鼠ELT实验中，随着剂量的增加，榅桲提取物对小鼠ELT的缩短作用逐渐增强。ELT反映纤溶活性，与激活纤溶活性物质有关［10-11］。榅桲提取物激活了纤溶活性物质，促纤溶活性而促进了优球蛋白的溶解性。

表3 榅桲提取物对大鼠凝血功能的影响(± s，n=7)

表3 榅桲提取物对大鼠凝血功能的影响(± s，n=7)

注:与生理盐水组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

TT/s PT/s APTT/s生理盐水组组别 动物数/只 剂量/(mg/kg)13.9 ±5.792 11.3 ±2.596 23.6 ±1.812银杏叶片组 7 20 31.4±6.884＊＊ 24.1±13.260* 43.1±15.102＊＊阿司匹林组 7 5 30.5±11.934＊＊ 32.4±11.562＊＊ 34.2±8.204＊＊小剂量组 7 20 17.2 ±9.928 19.4 ±9.676* 27.5 ±11.271中剂量组 7 40 22.9±2.512＊＊ 24.7 ±10.89＊＊ 39.46.±13.754＊＊大剂量组 7 80 25.2±8.438＊＊ 28.0±9.797＊＊ 42.43±10.1237－＊＊

在大鼠动-静脉旁路血栓形成实验中，随着剂量的增加，榅桲提取物对动-静脉旁路血栓逐渐降低血栓湿重，动脉血栓形成率也降低，具有量效关系。动-静脉旁路血栓模型中形成的血栓，类似于动脉中血栓［13，15］，反映整体动脉血流中血小板的黏附、聚集功能，当血小板聚集功能受到抑制时，血栓的重量就减轻［16-19］。榅桲提取物明显降低大鼠动-静脉旁路血栓湿重的作用与抑制血小板聚集而抗血栓形成有关。

本实验中榅桲提取物明显延长了TT、PT、APTT。TT延长反映纤维蛋白原降解及其降解产物增加，PT延长反映凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺乏，APTT延长反映凝血因子Ⅸ缺乏［10-11］，榅桲提取物的作用与凝血因子缺乏和纤维蛋白原降解产物增加有关，从而抑制凝血功能。

综上所述，榅桲提取物具有明显的抑制动脉血栓形成，抗凝血和纤溶作用。在口服型抗血栓药物方面有一定的研究价值和开发利用价值。

［1］茹克娅木·沙德克.维吾尔常用药材学(上册)［M］.乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社，1993:233.

［2］马木提·库尔班.新疆榲桲中总生物碱的测定［J］.食品科学，2005，26(2):186-189.

［3］古丽娜尔.榲桲黄色素的提取及性质研究［J］.新疆师范大学学报:自然科学版，2005，24(2):59-63.

［4］新疆维吾尔自治区卫生厅，维吾尔药材标准(上册)［M］.乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社，1991:183.

［5］江苏新医学院.中药大辞典(下册)［M］.上海:上海人民出版社，1977:5068-5072.

［6］全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(下册)［M］.北京:人民出版社，1978:2431-2432.

［7］维吾尔医学常用材料［M］.乌鲁木齐:新疆人民出版社，1990.

［8］马木提·库尔班，长马力别克·吾买尔.榲桲中总黄酮的测定［J］.新疆师范大学学报:自然科学版，2004，23(4):67-68(90).

［9］夏扎旦·夏克尔，买合布白，艾克白尔，等.新疆榲桲中的鞣质类化合物及其生物活性［J］.生物技术通讯，2006，17(5):840-842.

［10］徐叔云，卞如源，陈 修主编.药理学实验方法［M］.3版，北京:人民出版社，2005:1270-1273.

［11］李仪奎.中药药理实验方法［M］.上海:上海科技技术出版社，1991:141，145，403.

［12］周 琦，王敏伟，王以美，等.竹叶提取物的抗栓作用［J］.沈阳药科大学学报，2006，23(7):162-164.

［13］马恩龙，李春艳，曹颖林，等.溶栓1号抗血小板聚集及抗血栓形成作用［J］.沈阳药科大学学报，2001，18(5):370.

［14］顾 云，孟娟茹.介绍一种简易的抗血栓药物体内筛选法［J］.中国药理学通报，1991，7(4):317.

［15］王 琳，杨静伟，宋凤平，等.穿心莲的药理作用研究进展［J］.中医药信息，2003，20(6):27.

［16］Diminno G，Silver MJ Mouse antithrombotic assa y:a simple method for the evaluation of antithrombotic activity by ethyl alcohol［J］.J Pharmacol Exp Ther，1983，225:57-60.

［17］陈可冀.防治血栓形成［M］.上海:上海科学技术出版社，1990:446.

［18］王晓岚，周次清.心痛宁对大鼠血小板聚集及膜流动性的影响［J］.中国血液流变学杂志，2001，11(2):102-104.

［19］张文博，史 青.抗血栓药物的新进展［J］.滨州医学院学报，2000，23(3):302-305.