高效液相色谱法测定盐酸吗啉胍注射液的含量

张树强

(安徽省蚌埠市食品药品检验所，安徽 蚌埠 233000)

盐酸吗啉胍为抗病毒药，主要用于流感病毒及疱疹病毒感染。盐酸吗啉胍注射液的含量测定方法为紫外分光光度法[1]。笔者参考文献[2－3]，采用高效液相色谱(HPLC)法测定盐酸吗啉胍注射液的含量，方法灵敏、准确、简便，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100 Serise高效液相色谱仪，VWD紫外可变检测器，Agilent 1100型自动进样器，Agilent液相色谱工作站;日本岛津UV－2401PC型紫外可见分光光度计;Mettler AE－240型电子分析天平(0.01 mg)。盐酸吗啉胍对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100483－200402，供含量测定用);盐酸吗啉胍注射液(河北天成药业有限公司，批号分别为0811221，0901129，0901174，规格均为1 mL∶50 mg);甲醇为色谱纯;冰醋酸、三乙醇胺为分析纯;水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Technologies Eclipse XDB C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:三乙醇胺(冰醋酸调节 pH 至 4.2)－ 水－甲醇(1 ∶400 ∶100);检测波长:237 nm;流速:0.8 mL/min;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

精密量取盐酸吗啉胍注射液2 mL，置50 mL量瓶中，加流动相振摇使溶解，取1 mL，置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密称取盐酸吗啉胍对照品100.68 mg，置50 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，取10 mL，置200 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按处方比例称取除盐酸吗啉胍外的辅料适量，制成盐酸吗啉胍阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:分别精密量取2.2项下3种溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。由图1可见，辅料对盐酸吗啉胍的含量测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品溶液 2.0，3.0，4.0，5.0，8.0，10.0，15.0，20.0 mL，置 50 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取各质量浓度溶液10 μL，注入液相色谱仪，每种质量浓度重复进样4次，记录峰面积，以盐酸吗啉胍峰面积为纵坐标、进样量为横坐标(μg)进行线性回归，得回归方程 Y=55.6039 X+14.6354，r=0.9999(n=8)。结果表明，盐酸吗啉胍质量浓度在 4.03 ～40.27μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密量取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样8次，记录色谱图。结果峰面积的 RSD为0.088%(n=8)。

重复性试验:精密量取盐酸吗啉胍注射液(批号为0811221)共6份，按含量测定项下的方法制备供试品溶液，精密量取10 μL，注入液相色谱仪。结果盐酸吗啉胍含量的 RSD为0.24%(n=6)。

稳定性试验:取依法制备的供试品溶液，于0，4，8，12 h时分别进样测试，记录色谱图。结果盐酸吗啉胍峰峰面积的 RSD为0.36%(n=4)，表明盐酸吗啉胍在12 h内基本稳定。

加样回收试验:精密量取盐酸吗啉胍注射液(批号为0811221)2 mL，置100 mL量瓶中，加流动项稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，共9份，分成3组，每组按高、中、低分别加入对照品溶液6，10，14 mL，加流动相稀释至刻度，精密量取10 μL，注入液相色谱仪，计算盐酸吗啉胍含量。结果见表1。

2.4 样品含量测定

精密量取盐酸吗啉胍注射液2 mL，依法制备供试品溶液，精密量取10 μL，注入液相色谱仪进行色谱分析，计算含量。与国家药品标准中紫外分光光度法比较，结果见表2。

3 讨论

在流动相选择中，曾试验三乙醇胺(冰醋酸调节pH至4.2)－水－甲醇(1∶400∶100)、庚烷磺酸钠溶液－甲醇－乙腈(25∶30∶18)、磷酸盐缓冲液(含0.025 mol/L磷酸二氢钾、0.025 mol/L庚烷磺酸钠和0.2%三乙胺，用磷酸调 pH至3.0)－甲醇(65∶35)，均得到了很好分离效果，考虑流动相配制的难易和毒性，最终选择第1种流动相。本法灵敏、准确、简便，可作为盐酸吗啉胍注射液含量测定方法的检查方法。

表1 盐酸吗啉胍加样回收试验结果(n=9)

表2 盐酸吗啉胍注射液含量测定结果(标示量%，n=3)

[1]WS－10001－(HD－0651)－2002.国家药品标准·化学药品地方标准上升国家标准(第七册)[S].

[2]周小露，何勇虎，伍思强，等.治感佳片中对乙酰氨基酚和盐酸吗啉胍的含量测定[J].中国药业，2008，17(24):24.

[3]方东伟，王正权.反相高效液相色谱法测定盐酸吗啉胍片的含量[J].中国药业，2006，15(3):41.