喉疾灵口含片抗炎抑菌作用实验研究△

赵永良，王超，韩亚朋，刘景彬，刘红玲，谢印芝，程鹏，李建慧

(天津美伦医药集团有限公司药物研究院，天津 300400)

喉疾灵口含片抗炎抑菌作用实验研究△

赵永良，王超*，韩亚朋，刘景彬，刘红玲，谢印芝，程鹏，李建慧

(天津美伦医药集团有限公司药物研究院，天津 300400)

目的：对喉疾灵口含片进行抗炎、抑菌作用实验研究。方法：采用二甲苯致小鼠耳壳肿胀、角叉菜致大鼠足趾肿胀、大鼠棉球肉芽肿等炎症模型，以及含药血清体外抑菌实验模型，评价喉疾灵口含片的抗炎、抑菌作用。结果：与空白对照比较，喉疾灵口含片明显抑制了小鼠耳壳肿胀(P<0.05或P<0.01)、大鼠足趾肿胀以及大鼠棉球肉芽肿的形成(P<0.05)；其含药血清对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及白色念珠菌具有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论：上述结果表明，喉疾灵口含片对化学刺激所致炎症有明显的抑制作用，其含药血清具有显著的体外抑菌作用。

喉疾灵口含片；胶囊；抗炎；抑菌

20世纪90年代天津美伦医药集团推出了喉疾灵胶囊产品，用于咽喉疾病，主要由冰片、牛黄、山豆根、诃子等组成。目前，该品种属于国家中药保护品种、天津市医保品种。因其服用剂量大，质控指标不够精确，我们按照现代制药技术理论与手段对其进行了二次开发，研制出喉疾灵口含片。该品种服用方便，质控指标更加完善与精准。本文主要对其抗炎、抑菌方面的药效进行了实验研究。

1 动物、试药与仪器

1.1 动物

KM品系雄性小鼠及SD品系大鼠(雌、雄)均为SPF级，由天津市山川红实验动物科技有限公司提供，许可证号分别为：SCXK(津)2009-0001，SCXK(津)2009-0001。动物试验室：温度20～25 ℃，湿度40 %～70 %，饲料购自中国医学科学院试验动物研究所繁育场。饲养期间大、小鼠均自由饮水与取食。

1.2 试药

1.2.1 喉疾灵口含片 1 g药粉相当于7.2 g生药(天津美伦医药集团有限公司,批号：090101)。临床拟定用法用量为每次1片，每天3次，每片含药粉0.386 6 g，实验前以纯水配制成不同浓度的混悬液备用。

1.2.2 喉疾灵胶囊 市售品，内容物1 g药粉相当于5.4 g生药(天津美伦医药集团有限公司，批号：081205)。临床用法用量为每次3粒，每天3次，每粒含药粉0.25 g，实验前以纯水配制成不同浓度的混悬液备用。

1.2.3 吲哚美辛胶囊 25 mg/粒(河北永丰药业有限公司，批号：20090304)。

1.2.4 角叉菜胶 (东京化成工业株式会社，批号：FGN01)。

1.2.5 青霉素粉针 100万单位/支(GREENFIELD PHARMACEUTICAL，CO.LTD，批号：080101)。

1.2.6 二甲苯 分析纯(天津市赢达稀贵化学试剂厂，批号：20090531)。

1.2.7 注射用头孢曲松钠 1.0 g/瓶(台湾泛生制药厂股份有限公司，批号：20090627)。

1.2.8 甲泼尼龙片 4 mg/片(天津药业集团有限公司，批号：200905003)。

1.2.9 实验菌株 金黄色葡萄球菌[菌号：CMCC(B)26003]、铜绿假单胞菌[菌号CMCC(B)10104]、白色念珠菌[菌号：CMCC(F)98001](中国药品生物制品检定所)。

1.2.10 培养基 营养肉汤培养基(批号：080513)、营养琼脂培养基(批号：081210)、改良马丁培养基(批号：080909)，均由北京制药科技开发公司购入。

实验中我们依据《药理学实验方法》一书中的相关换算方法[1]，同时结合预实验结果制定出了不同实验部分的给药剂量。

1.3 仪器

比浊标准管(中国细菌浊度标准，中国药品生物制品检定所)。滤纸片(PAPER DISC for Antibiotic examination，SIZE 8M/MDIA，TOYO SEISAKUSHO CO.，LTD)。

仪器设备：YLS-7B足趾容积测量仪(山东省医学科学院济南科技发展有限公司)。

2 方法与结果

2.1 抗炎作用

2.1.1 喉疾灵口含片对二甲苯所致小鼠耳壳炎症的影响[1]取健康雄性小鼠，体重20～22 g，随机分成6组，每组10只，设空白对照组(Control)，阳性对照组，喉疾灵口含片8，4，2 g生药·kg-13个剂量组(HJLBTH、HJLBTM、HJLBTL)和喉疾灵胶囊组(HJLC)4 g生药·kg-1；各组小鼠连续灌胃给药3 d，阳性组在试验当日一次给予吲哚美辛胶囊(YDMX)10 mg·kg-1，空白对照组给予等量的纯化水，给药体积均为20 mL·kg-1。各组于末次给药后1 h，每只小鼠右耳两侧涂二甲苯0.05 mL致炎，45 min后断颈处死动物摘取左、右两耳，用直径7 mm角膜环钻切下两耳片称重，求其两耳重量差值作为炎症肿胀程度指标，计算肿胀抑制率，肿胀抑制率=(对照组耳片差值—给药组耳片差值)/对照组耳片差值×100 %,结果见表1。

表1 喉疾灵口含片对二甲苯所致小鼠耳壳炎症的影响

注：(1)n=10，(2)与Control组比较，*P<0.05，**P<0.01

据表1可知，与Control组比较，喉疾灵口含片中、高剂量组明显抑制二甲苯所致的小鼠耳壳肿胀(P<0.05或P<0.01)；喉疾灵胶囊(4 g生药·kg-1)同样显著抑制了小鼠耳壳肿胀(P<0.05)，肿胀抑制率较同剂量口含片偏低。上述结果表明喉疾灵口含片对免疫炎症反应有一定的抑制作用。

2.1.2 喉疾灵口含片对角叉菜所致大鼠足跖炎症的影响[2]取健康雄性SD大鼠，体重200～220 g，随机分成6组，每组10只，设空白对照组(Control)，阳性对照组，喉疾灵口含片3,1.5,0.75 g生药·kg-13个剂量组(HJLBTH、HJLBTM、HJLBTL)和喉疾灵胶囊组3 g生药·kg-1(HJLC)；各组大鼠连续灌胃给药5 d，阳性药吲哚美辛(YDMX)10 mg·kg-1在试验前日和试验当日各给药1次，空白对照组给予等量的纯化水，给药体积均为10 mg·kg-1。各组在末次给药的同时，于大鼠右后足跖皮下注入1 %角叉菜胶溶液0.1 mL/只致炎，在致炎前和致炎后的1，2，3，4，5，6 h测量大鼠足跖容量，以致炎前后足跖容量差值作为炎症肿胀度指标，并与对照组同期进行统计学比较，计算炎症抑制率,炎症抑制率=(对照组足跖肿胀度-给药组足跖肿胀度)/对照组足跖肿胀度×100 %，结果见表2。

据表2可知，与空白对照组比较，喉疾灵口含片中剂量组在致炎后第2,3 h，高剂量组在致炎后2,3,4 h，大鼠足趾肿胀程度明显低于对照组(P<0.05)；喉疾灵胶囊3 g生药·kg-1剂量下，于致炎2,3 h显著抑制了大鼠足趾肿胀(P<0.05)，但效力比同剂量口含片稍弱。说明喉疾灵两种剂型能够明显抑制角叉菜所致的大鼠足趾肿胀，口含片作用强度略优于胶囊。

2.1.3 喉疾灵口含片对大鼠棉球肉芽肿炎症的影响[3]选用SD大鼠，雌雄各半，体重200～220 g。每只大鼠于试验前预先背部剃毛，面积4 cm×7 cm。腹腔注射戊巴比妥钠40 mg·kg-1麻醉，俯卧位固定，在大鼠背部脱毛处以碘伏棉球局部消毒，切1 cm长小口，将20 mg高压灭菌棉球滴入青霉素注射液(20万单位·mL-1)0.2 mL后，用眼科镊子分别从切口处植入左右腋部皮下，随即缝合皮肤。手术后随机分成6组，每组10只，设空白对照组(Control)，阳性对照组，喉疾灵口含片3，1.5，0.75 g生药·kg-13个剂量组(HJLBTH,HJLBTM,HJLBTL)和喉疾灵胶囊组(HJLC，3 g生药·kg-1)。手术当日起，连续给药14 d，每天1次。阳性组给予甲泼尼龙(JPNL，5 mg·kg-1)，空白对照组给予等量纯化水，给药体积均为10 mL·kg-1。于末次给药24 h后麻醉动物，打开原切口，取出棉球肉芽组织，置烘箱中70 ℃烘干，天平称重。将称得的重量减去棉球原重量即得肉芽肿重量作为炎症反应指标，并计算炎症抑制率,炎症抑制率%=(对照组棉球增重-给药组棉球增重)/对照组棉球增重×100 %，结果见表3。

据表3可知，与空白对照组比较，喉疾灵口含片中、高剂量组大鼠棉球肉芽肿重量明显降低(P<0.05)；喉疾灵胶囊(3 g生药·kg-1)显著抑制了肉芽肿的形成(P<0.05)。上述结果表明喉疾灵口含片能够明显减少炎症肉芽肿的形成，抑制慢性炎症性增生反应。

表2 喉疾灵口含片对角叉菜所致大鼠足跖炎症的影响

注：(1)n=10，(2)与Control比较，*P<0.05，**P<0.01.

表3 喉疾灵口含片对大鼠棉球肉芽肿炎症的影响

注：(1)n=10，(2)与control比较，*P<0.05，**P<0.01.

2.2 喉疾灵口含片含药血清的体外抑菌作用

2.2.1 含药血清的制备 该项实验及体外抑菌实验参考了梅林等[4]报道中的方法，选用SD大鼠，雄性，体重200～220 g。随机分成6组，每组8只，设空白对照组(Control)，喉疾灵口含片24,12,6 g生药·kg-13个剂量组(HJLBTH、HJLBTM、HJLBTL)和喉疾灵胶囊组6 g生药·kg-1(HJLC)；阳性药组于试验前日和试验当日各腹腔注射头孢曲松钠(TBQSNa)200 mg·kg-1(5 mL·kg-1)1次，其他给药组采用重复灌胃给药方式，即每日早、晚各给药1次，连续2 d，试验当日再给药1次。空白对照组给予等量的纯化水。各组末次给药后1 h，乙醚麻醉，腹主动脉取血制备含药血清，备用。

2.2.2 体外抑菌实验 将各细菌分别在营养肉汤培养基、改良马丁培养基中培养18～24 h，通过比浊法，用无菌纯化水将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌菌液调整浓度为l×106CFU·mL-1、白色念珠菌菌液调整浓度为l×105CFU·mL-1，用无菌棉签蘸取上述菌液分别均匀涂布于琼脂平板表面。

将各组动物的含药血清滴加于无菌滤纸片(直径8 mm)上，每片50 μL，分别将充分浸润含药血清的滤纸片均匀放置在涂有不同菌的琼脂平板上，置37 ℃培养24 h，测量抑菌圈直径，结果见表4。

表4 喉疾灵口含片大鼠含药血清对不同菌株的抑菌作用

注：(1)n=8，(2)与Control比较，*P<0.05，**P<0.01.

据表4可知，与Control组比较，喉疾灵口含片中、高剂量组大鼠含药血清对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌以及白色念珠菌均有显著的抑制作用(P<0.05或P<0.01)，其低剂量组含药血清显著抑制了白色念珠菌(P<0.01)；喉疾灵胶囊组(6 g生药·kg-1)含药血清对3种菌群均未显示抑制作用。上述结果表明喉疾灵口含片的大鼠含药血清具有一定的体外抑菌作用。

3 讨论

对于喉疾灵胶囊，前期报道中曾有人对其原料制备工艺进行过改进[5]。我们针对喉疾灵的药用特点，采用现代制药技术手段对其进行了较为系统的二次研发，在原有基础上改进了原料制备工艺，改变了原有剂型，提高了部分指标成分的质控水平，使该品种质量及可控性有了一定的提升，同时新剂型更加符合现代药剂学理论，服用方便，起效迅速。

通过文献检索我们发现，尽管喉疾灵胶囊对于多种咽喉疾病具有确切的疗效，但与该品种相关的研究却寥寥无几，而关于其药效机制方面的基础研究更是少有问津。本文主要从抗炎、抑菌两方面对喉疾灵口含片的药效进行了初步探讨。结果显示，喉疾灵口含片对于3种动物模型炎症反应具有较好的抑制作用。由于检索文献未发现喉疾灵胶囊相关药效学方面的研究报道，对于该药物作用强度的数据表征我们缺乏一定的基础资料，导致相应口含片的相关情况亦不甚了解。基于此，我们在不同的实验部分中引入了不同剂量的喉疾灵胶囊组(但未进行两种剂型之间的统计学比较研究)，以期对其作用强度进行初步摸索，积累一定的原始资料，为后期进行口含片临床研究，摸索适合的临床用量提供适当的参考。

[1] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].第三版.北京：人民卫生出版社，2002：1860-1861，911.

[2] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993：302.

[3] 吴在德，吴肇汉.外科学[M].北京：人民卫生出版社，2004：683-684.

[4] 梅林，贺锡中，熊云，等.中药黄芩的血清抑菌活性试验研究[J].医学研究杂志，2009，38(1)：102-103，85.

[5] 蒙双鹏，谢琳，郭钟慧，等.喉疾灵胶囊处方工艺研究[J].中药材，2007，30(10)：1317-1319.

ExperimentalStudyontheAnti-inflammatoryandAntibacterialEffectsofHoujilingBuccalTablet

ZHAO Yong-liang，WANG Chao，HAN Ya-peng，LIU Jing-bin，LIU Hong-ling，XIE Yin-zhi，CHENG Peng，LI Jian-hui

(InstituteofMateriaMedica,TianjinMeilunPharmaceuticalGroupInc,Tianjin300400,China)

Objective: To study the anti-inflammatory and antibacterial effects of Houjiling buccal tablet(HJLBT)by experiments.Methods： Three inflammatory models including the swelling of ear induced by xylene in mice， carrageenan-induced foot acute inflammatory edema in rat， and the cotton-pellet granuloma of the rat were employed to evaluate the anti-inflammatory effects of the drug.Additionally，the model of bacteriostasis in vitro by the serum with drug was used to examine the antibacterial activities of HJLBT.Results： Compared with control group，HJLBT strongly inhibits swelling of ear in mice(P<0.05 orP<0.01)，foot acute inflammatory edema in rat and the cotton-pellet granuloma in rat(P<0.05). The serum with HJLBT has significant inhibitedStaphylococcusaureus，PseudomonasaeruginosaandCandidaalbicans(P<0.05 orP<0.01).Conclusion： All results indicate that HJLBT exerts significantly inhibitory action against inflammation caused by chemical agents， and the serum with HJLBT also has strong antibacterial activity.

Houjiling buccal tablet；Capsule；Anti-inflammation；Bacteriostasis

天津市科技创新专项基金项目(08FDZDSH01407)

*王超，Email：duwu565984@126.com

2010-09-20)