紫外分光光度法测定硫酸长春新碱的含量

袁 琦，徐 玫，赵 辉，杨 浩

（河南大学 药学院，河南，开封475004）

长春花为夹竹桃科长春花属中一种重要的药用植物，长春新碱和长春碱是长春花中具有抗肿瘤活性的二聚吲哚类生物碱［1］。长春新碱通过作用于肿瘤细胞微管蛋白而干扰肿瘤细胞代谢，临床主要用于治疗急性淋巴细胞白血病，也用于治疗乳腺癌、支气管肺癌、软组织肉瘤及神经母细胞瘤等［2］。对硫酸长春新碱的研究主要是基于其对神经系统毒性和局部刺激性，由此开发了各种新剂型，如采用与抗体结合［3－4］、脂质体包裹［5］以及控释膜［6］等，以减轻它的毒副作用。

长春新碱是一种二聚吲哚类生物碱，见光或遇热易变质。HPLC法虽然具有较强的分离能力，但测定需要较长时间，药品易随时间延长发生变化，导致HPLC法的准确度降低。而硫酸长春新碱粉针剂中干扰组分较少，可采用分离能力较差的紫外分光光度法测定含量。我们采用紫外分光光度法测定硫酸长春新碱粉针剂中硫酸长春新碱的含量，显示该方法简单快速，且具有较高的准确度和精密度，可用于硫酸长春新碱的含量测定。

1 仪器与试剂

UV-1600型紫外－可见分光光度计（北京瑞利）；试剂均为分析纯；硫酸长春新碱粉针剂（广东岭南制药有限公司，批号090803）；硫酸长春新碱对照品（中国药品生物制品检定所）；稀氨水（实验室自制）。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取硫酸长春新碱对照品0.948mg，加甲醇1mL溶解后转入50mL量瓶，并用甲醇多次洗涤容器，洗液并入量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取硫酸长春新碱粉针剂4.603mg，加甲醇1mL溶解后转入50mL量瓶，并用甲醇多次洗涤容器，洗液并入量瓶中，稀释至刻度，摇匀，既得。

2.2 测定方法

取硫酸长春新碱对照品溶液，稀释后以甲醇做对照液，在190～340nm波长范围内扫描，可知样品在220、240、297nm波长处均有吸收峰。HPLC检测杂质在220nm和240nm处有吸收，故选择297nm处作为紫外法测定硫酸长春新碱含量的检测波长。

2.3 方法学考察

2.3.1 重复性实验 取供试品溶液6份，照“2.2”项下方法测得吸光度值分别为0.366、0.365、0.366、0.365、0.365、0.366，RSD 为0.02%。

2.3.2 稳定性实验 取硫酸长春新碱粉针剂0.5mg溶于25mL容量瓶中，照“2.2”项下方法，按紫外分光光度法，分别于0.00、2.20、4.50、5.67、6.70h进行测定，其吸光度A分别为0.325、0.312、0.301、0.302、0.299，RSD 为22.08%。由结果可知，药品前4h变化较大，后面几乎无变化。说明硫酸长春新碱不稳定，见光或遇热易变质。

2.3.3 加样回收率实验 取9个10mL的容量瓶，分别精密加入供试品溶液4.0mL，再分别精密加入3.0、4.0、5.0mL对照品溶液，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制备低、中、高3种浓度的供试品溶液，每种浓度制备3份样品，按“2.2”项下方法测得吸光度值，计算含量。实验结果表明，本法具有良好的回收率。结果见表1。

表1 加样回收率实验

2.3.4 线性范围 精密量取硫酸长春新碱对照品溶液，加甲醇定量溶解，配制成40、20、10、4、1mg／L的溶液，按照“2.2”项下方法测得吸光度值。以吸光度A为纵坐标，溶液中硫酸长春新碱的浓度为横坐标，绘制标准曲线，（图1）。回归方程为：Y＝0.018 6 X＋0.013 5，r＝0.997 8。

结果表明，硫酸长春新碱在1～40mg／L范围内与吸光度A呈良好线性关系。

2.4 样品测定

分别取3个批号的硫酸长春新碱粉针剂各3份，按“2.2”项下方法测定含量，计算出每个样品占标示量的百分含量。这3个批号样品占标示量的平均值分别为100.2%、99.7%和100.1%，含量符合要求。

图1 紫外分光光度法的线性关系

3 结论

应用本文建立的测定方法，可以对硫酸长春新碱粉针剂中的硫酸长春新碱含量进行测定。经研究证明，该方法准确度和精密度均符合要求，可用于该制剂的质量控制，并能确保产品质量。

4 讨论

在本实验过程中，曾以C18为固定相，水－甲醇（45∶55，磷酸调pH至3.0）为流动相，柱温30℃，20μL进样，分别以220、240、297nm为检测波长。在220nm和240nm处检测时，样品有干扰组分的色谱峰，而在297nm波长下样品峰单一，说明杂质在220nm和240nm处有吸收，在297nm处无吸收。

HPLC法具有较强的分离能力，但在弱酸性流动相及30℃柱温时，样品易受到干扰，且HPLC法测定需要较长时间，药品随时间的延长也会发生变化，最终导致HPLC法的准确性较差。紫外分光光度法操作简便迅速，测定条件温和，具有较高的准确度、精密度。所以在测定注射用硫酸长春新碱粉针剂时最好选用紫外分光光度法，而对于体内实验或对其他剂型进行分析测定时，可以考虑选用分离效能较高的HPLC法。

［1］李浩，李一澎，卢国杰.长春碱、长春新碱提取分离方法研究［J］.应用化学，2008，37（9）：993.

［2］潘岳峰，王慧敏，张玥，等.大孔吸附树脂分离纯化长春花中长春碱和长春新碱［J］.中国中医药信息杂志，2009，16（4）：51.

［3］Rowland G F，Simmonds R G，Gore V A.Drug Localisation and Growth Inhibition Studies of Vindesine-monoclonal Anti-CEA Conjugates in a Human Tumour Xenograft［J］.Cancer Immunol Immunother，1986，21（3）：183.

［4］余竹元，马瑾瑜.长春新碱－抗体结合物的抗肝癌作用［J］.肿瘤，1989，9（4）：154.

［5］Webb M S，Harasym T O，Masin D，et al.Sphingomyelincholesteral Liposomes SiginificantlyEnhance the Pharmacokinetic and Therapeutic Properties of Vincristine in Murine and Human Tumour Models［J］.B J cancer，1995，72（4）：896.

［6］孙勇，周海英.硫酸长春新碱控释膜药效学实验研究［J］.中国药房，2000，11（2）：59.