中药材益母草中水苏碱含量鉴定分析

陈婷 莫灼康

中药材益母草中水苏碱含量鉴定分析

陈婷 莫灼康

目的研究中药材益母草的水苏碱成分的含量鉴定。方法应用高效液相色谱法测定中药材益母草中水苏碱成分的含量，以Kromasil KR60-5CN为色谱柱，乙腈-甲醇溶液为流动相，以外标法进行检测，设定柱温32℃，流速1.5ml/min，检测波长210nm。结果水苏碱回归方程为Y=1206.578X-173.562，水苏碱进样量在1.00～25.00μg范围内具有良好的线性关系，r=0.9954，样品平均加样回收率为98.83%(n=9)，RSD为0.95%。结论用高效液相色谱法测定中药材益母草中水苏碱含量准确县可靠，可重复利用，是控制该制剂质量的有效方法。

中药材;益母草;水苏碱;含量鉴定

益母草是属唇型科植物，性味辛、苦，微寒，含有生物碱类、二萜类、黄酮类、苷类、脂肪酸类等化学成分。由于益母草中最为主要活性生物碱是水苏碱，因此对益母草药材及制剂的质量控制以水苏碱为指标。因此本研究应用高效液相色谱法用于水苏碱的含量测定，以提高益母草药材定量分析准确度。现报告如下。

1 研究仪器与材料

Agilengt 1200高效液相色谱系统(美国Agilent公司);722型可见光分光光度计(上海光谱仪器有限公司);G1376A高效液相泵，G1367B自动进样器，G1365B多波长UV检测器，G1316A柱温箱;Hystar色谱工作站;1810-B型石英自动双重纯水蒸馏器(购自西安常仪生化仪器有限公司);HH-6型数显恒温水浴锅(购自上海康路仪器设备有限公司)。益母草药材(生产批号20100702)购自广东省东莞国药集团药材有限公司;盐酸水苏碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110712-201008);乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯;水为二次重蒸水。

2 试验方法

2.1 色谱条件的选择 选择色谱柱为Kromasil KR60-5CN(250mm×4.6mm，5μm);流动相组成为乙腈:甲醇:水=60∶30:10;以外标法进行检测，设定柱温32℃，流速1.5ml/min，检测波长 210nm，进样量为 10μl［1］。

2.2 制备对照品溶液 精密称取盐酸水苏碱对照品适量，105℃干燥至恒重，适量水苏碱置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得0.5mg/ml的对照品溶液，摇匀，备用［2］。

2.3 制备供试品溶液 取本品1g，精密称定后，置容量瓶中，精密加甲醇50ml，称定重量，超声(250W，40kHz)处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀滤过，精密量取续滤液25ml，过氧化铝一活性炭柱(碱性氧化铝5g，湿法装柱，上覆层析用40～60目活性炭2g，甲醇预洗)，收集甲醇洗脱液100ml，蒸干后残渣加流动相适量使之溶解，转移至10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得［3］。

2.4 线性关系的分析 精密称取水苏碱对照品23.5mg，置20ml容量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度摇匀即得贮备液(1.175mg/ml)。取母液配成浓度分别为58.75、117.5、235、352.5、528.75μg/ml的对照品溶液，各取 50μl进样，进样量分别进样 2.0、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0μl。以峰面积常用对数值为纵坐标(Y)，盐酸水苏碱进样量常用对数值为横坐标(x)，绘制标准曲线，绘制标准曲线，结果水苏碱回归方程:Y=1206.578X-173.562，线性范围:1.00～25.00μg。

2.5 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h测定水苏碱含量，结果其RSD值为0.95%。说明供试品溶液在本实验条件下24h内稳定。

2.6 精密度试验 取1份对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积，结果其RSD值为1.01%，表明实验精密度良好。

2.7 重复性试验 取同一批供试品溶液(批号2008423)5份，分别进样测定水苏碱峰含量。结果其RSD值为1.14%，表明重复性良好。

2.8 回收率试验 精密量取批号为081208的样品共9份，每份分别精密加入加入盐酸水苏碱对照液0.5mg/ml，适量，摇匀，进样测定，计算盐酸水苏碱回收率为98.83%，RSD为0.95%。

2.9 样品测定 分别精密量取对照品溶液和供试品溶液进样测定。按外标法以峰面积分别计算得5批口服液样品中水苏碱的含量分别为 0.66、0.65、0.70、0.69g/ml。

3 讨论

中医临床将益母草视为较常用的妇科良药，具有活血和调经的作用。现代药理研究可见，益母草中水苏碱等多种活性生物碱具有抑制血小板聚集、提高心功能、改善心肌缺血、抗凝、增加冠状动脉血流、抗血栓形成等多种作用，且作用较久。益母草含水苏碱、益母草碱、益母草啶和益母草宁等多种生物碱。

根据以上的研究方法显示，采用基于氰基柱的高效液相色谱检测的方法，定量测定益母草原药材中水苏碱的含量是可行的，因此该方法具有潜在的通用性，操作简便、可行，重复性好。本实验通过对样品的研究发现，由于盐酸水苏碱的紫外吸收为末端吸收，且其极性较大，故很难以反相HPLC进行测定，有文献采用强阳离子交换柱获得了较好的分离。本实验结果表明用高效液相色谱法测定中药材益母草中水苏碱含量准确可靠，重复性好，可作为控制该制剂质量的方法。

［1］张娴，彭国平.益母草属化学成分研究进展.天然产物研究与开发，2003，15(2):162-166.

［2］晁志，马丽玲，周秀佳.等.反向离子对色谱法测定益母草药材中水苏碱和益母草碱的含量.第一军医大学学报，2009，25:1226-1227.

［3］刘新华，辛宏，朱依谆.等.不仅是“益母”草:益母草的心脏保护作用.生理学报，2007，59(5):578-584.

523018广东省东莞市人民医院普济分院中药房(陈婷);东莞市人民医院制剂室(莫灼康);