虎杖的提取分离和纯化技术研究新进展

王昌瑞， 徐 溢， 张子春， 盛 静， 季金苟， 周小华

(重庆大学化学化工学院，重庆 400030）

1 引言

虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.为多年生灌木状草本植物，分布于山东、河南、重庆等地。虎杖可以作为观赏植物［1］，其干燥根茎和根经过加工后入药。其主要成分有蒽醌类、二苯乙烯类、黄酮类等。其中以白藜芦醇为代表的二苯乙烯类化合物具有抗菌和改善心血管疾病的作用，近年来发现其还具有抗肿瘤抗自由基等活性，被广泛应用于医药卫生、保健、化妆品等行业，具有巨大的商业价值。白藜芦醇在花生、大豆、葡萄、葡萄酒等食品中均有发现，其中前三者中的白藜芦醇多以葡萄糖苷的形式存在，葡萄酒是反式和顺势白藜芦醇的重要来源，但不是所有人都适合饮酒，虎杖作为游离白藜芦醇的另一个重要来源可以很好的替代葡萄酒发挥作用［2］。同时虎杖中还有大量的大黄素等蒽醌类物质。工业上对虎杖中的白藜芦醇和大黄素的开发力度较大，可以生产20%～98%的白藜芦醇和大黄素产品，但现行的工艺和方法存在着提取率低、生产成本相对较高等问题。因此，虎杖白藜芦醇等成分提取效率的提高是当今医药工业亟待解决的问题之一。另外综合提取是研发虎杖有效组分的基础，充分研究和发现虎杖中的未知有效组分是推动虎杖资源合理利用的一个必要途径，从这个角度讲人们对虎杖资源的开发和挖掘尚显不够。本文将针对虎杖的提取分离和纯化技术现状，相关新技术及其应用等进行综述，以期为虎杖的综合利用、增加虎杖的研发深度和工业开发价值提供借鉴和依据。

2 虎杖提取技术现状

对于虎杖的提取分离研究包括虎杖中单组分分离和一类或几类物质的综合提取研究。前者的深入研究可以提高某种组分的提取效率降低生产成本，后者有利于虎杖的综合开发，发现新化合物，提高药材的附加值。

2.1 常规溶剂提取技术 溶剂提取是中草药中有效部位提取的通用方法。该方法利用溶剂对有效组分的溶解和植物细胞内外的浓差传质达到提取的目的，所以在对目标组分或部位进行提取时溶剂的选择至关重要。虎杖中有效组分的工业提取目前仍然采用常规溶剂提取法。用于虎杖中白藜芦醇的提取溶剂主要有甲醇、乙醇、丙酮、石油醚-乙酸乙酯等，其中以乙醇为溶剂对虎杖进行回流提取为最常用。刘仁旺等［3］通过正交实验优化了乙醇提取虎杖中白藜芦醇的条件，用体积分数为80%乙醇为溶剂，药材与乙醇质量体积比为1∶15(g/mL)，温度为70℃时提取2 h，从10 g虎杖中提取出白藜芦醇及其苷186.36 mg；罗迎春［4］则用95%工业酒精对5 kg虎杖进行了综合提取分离，提取液经不同极性的溶剂萃取和数次柱层析，得到了10种化合物，其中在三氯甲烷萃取相得到白藜芦醇和虎杖苷，白藜芦醇的含有量约为原植物药材的0.28%；聂媛等［5］以乙醇为溶剂对白藜芦醇、虎杖苷、大黄素等有效成分进行提取，确定出最佳工艺为溶剂80%乙醇，提取温度70℃，料液比1∶20(g/mL)，提取时间2 h，提取率白藜芦醇为5.57%、白藜芦醇苷为10.74%、大黄素为2.67%、未知物1为8.87%、未知物2为7.13%。总体来讲利用醇提法对虎杖中的组分进行分离，溶剂相对便宜，而且提取效率较高。

2.2 双水相提取技术(aqueous two phase extraction，ATPE) 双水相萃取属于液液萃取的范畴，指当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等)的作用和溶液环境的影响，在分成的上、下相中具有不同的梯度，从而达到萃取目的的一种方法。具有分相时间短，易于连续化操作，易于放大，技术简单经济等特点。双水相萃取技术主要应用于生物工程领域，表现为对酶、蛋白质等的分离，近几年在天然产物分离中的应用也得到了快速的发展，尤其是分离黄酮、有机酸等物质的双水相萃取技术逐渐成熟。常用的高聚物/无机盐体系是聚乙二醇(PEG)/硫酸盐或PEG/磷酸盐体系、PEG/葡聚糖(Dectran)体系。双水相萃取严格意义上讲属于分离技术而非提取技术，但是可以和提取环节相结合成为一个步骤，既节省时间又可以有针对性的提取组分。Wang H等［6］构建了乙醇/硫酸铵体系对虎杖进行了微波辅助双水相提取分离的研究，以双水相体系为提取溶剂，省去了传统溶剂的再萃取过程，同时具备微波辅助提取和双水相萃取的优点，把两个操作步骤合为一步，提高了收率，降低了成本，比传统的提取方法省去了1～2个步骤，更具优越性。应用该技术对虎杖白藜芦醇和大黄素的提取效率较微波辅助提取和加热回流提取分别提高了10%和20%，单从此收率来看其提高幅度不高，但是双水相萃取技术作为分离技术与虎杖的提取技术的耦合应用较少，还有很大的潜力。

2.3 水解提取技术 由于虎杖中的白藜芦醇、大黄素、黄酮等物质多以葡糖糖苷的形式存在，故在提取过程中为了提高目标物质收率，常常在提取时融合化学、生物等水解技术来展开。现阶段水解剂主要有无机酸、微生物和酶等。

在虎杖的提取中的化学水解主要利用盐酸、硫酸等无机非氧化性酸。刘新荣等［7］利用12%盐酸-乙醇体系对反式白藜芦醇苷在55～75℃进行水解1～3 h，实验表明白藜芦醇苷转化率高达45%，反应时间为1～3 h，大大少于酶水解和酵解所需时间(最低约24 h)。此研究表明可以利用酸来辅助溶剂提取增加白藜芦醇等目标物的提取量。酸水解具有转化效率高，转化时间短，转化成本低等优点，但是由于酸水解相对比较剧烈，可能会催化某些副反应，破坏提取物中的相应组分。因而人们又将反应条件温和，无副反应等优点的生物技术和酶技术应用到虎杖的提取分离中。李梦青等［8］利用纤维素酶对虎杖进行了酶解，酶解后用乙醇在50℃提取2 h，提高了白藜芦醇提取率的同时还提取出白藜芦醇苷和大黄素，其中白藜芦醇得率达到1.50%；另有研究显示［9］，利用质量分数为20 mg/g纤维素酶，加入3倍量的水，水解6 h，再用9倍体积的甲醇提取可使白藜芦醇的提取率从0.5%上升到0.82%；对虎杖进行酶解多用纤维素酶，当然利用复合酶对虎杖进行水解的研究也在进行，黄志芳等［10］利用复合酶酶解虎杖提取物后经水、乙醇-水、碱溶液分步溶解沉淀后，得到的白藜芦醇粗品纯度可达65%。酶法转化率较高，但是酶的回收较为困难，目前的发展趋势是将酶固定化，以提高酶的利用效率。

工业上对于虎杖的水解多采用微生物水解法，如利用酵母等微生物对糖苷键进行水解，水解后得到的苷元产量有较大程度的提高。吕之尧等［11］选取了几种具有含糖苷键水解酶的微生物对虎杖进行直接作用筛选出四种优良菌株，经过TLC分析Aspergillus niger L.，菌株处理后的虎杖得率到达1.197%，与醇提和自酶解后醇提比较，提取效率显著提高；邹贤德等［12］将虎杖用水浸润，控制温度为35～45℃，酵母浸泡发酵72 h后，发酵液中白藜芦醇量提高到原来的2.6～4.1倍；虎杖中的白藜芦醇和大黄素等物质具有抑菌作用，对酵母等微生物的繁殖缓慢，造成发酵时间偏长，Wang H等［13］在发酵培养基中加入虎杖粉末，以此驯化食品级微生物米曲霉，得到的米曲霉能够在虎杖提取物中快速繁殖，用米曲霉直接将虎杖粗药材中的虎杖苷转化为白藜芦醇，白藜芦醇的提取百分率提高到1.36%，是微波辅助提取的3.6倍，最为重要的是发酵12 h后白藜芦醇的转化率就达到了100%。在该研究中的米曲霉是一种β-葡萄糖苷水解酶的高效生产菌株，普通的β-葡萄糖苷水解酶对糖苷键的水解效果在起始阶段较好，但是随着葡萄糖量的增加抑制了该酶的活性，驯化后的米曲霉可以在虎杖提取液中快速繁殖，高效的生产出β-葡萄糖苷水解酶作用域虎杖苷产生的葡萄糖又被米曲霉作为碳源消耗掉，即节省了时间又提高了效率。

2.4 超声提取技术 超声技术在天然产物的分离纯化过程中，通过产生的空化效应、骚动效应、热效应，引起机械搅拌，从而破坏植物组织，加速溶剂穿透，促进有效组分溶出，提高提取率，同时还可以避免高温提取对有效组分的破坏。虎杖中的白藜芦醇极其不稳定，在70～80℃时会发生部分分解，利用超声辅助可以在较低温度下实现高效溶剂提取，保证组分的稳定性。郑可利等［14］通过正交实验优化了虎杖中白藜芦醇的超声辅助提取工艺，以80%的乙醇-丙酮(体积比为1∶1)水溶液为提取剂，料液比1∶10，pH为6，提取温度30℃，提取50 min，白藜芦醇的提取率为1.83%；超声技术同样也可以应用于虎杖中蒽醌类物质的提取，王欣等［15］采用正交设计优选了蒽醌类物质的超声提取工艺，当提取温度为50℃时，用药材8倍量的80%醇溶液超声提取30 min，在40 g虎杖原料中可提取出3.602 g蒽醌类物质。

由于超声提取装置的技术指标只有功率和频率，所以选择合适的溶剂及提取时间尤为重要。超声辅助提取作为一个新的高效的辅助提取技术有着广阔的应用前景，但是其对设备和能源的要求相对较高。

2.5 微波提取技术 微波萃取技术也是近年来应用到天然产物提取方面的新兴技术，微波可直接作用于分子，使分子的热运动加剧，从而引起温度升高，这种热效应可以快速破坏细胞壁，使有效成分更快的被分离提取出来。因此，其具有加热时间短、加热均匀、产品质量好、较易实现自动化控制等优点。而且不同极性的分子加热速度不同，因此，微波技术可以通过控制条件来针对某种组分进行提取。公衍玲等［16］对虎杖中的色素进行微波辅助提取，实验发现当采用30%乙醇溶剂，料液比1∶30(g/mL)，超声温度25℃，功率50 W，提取20 min时，色价和提取率都明显提高；孙娟等［17］利用微波技术提取虎杖苷，在最佳工艺条件下白藜芦醇的提取率可达到了91%；微波提取技术和其它技术联用时能得到更高的提取效率，兰天路等［18］采用纤维素酶-微波联合提取虎杖中的白藜芦醇，以体积分数为80% 乙醇溶液为提取剂，料液质量比1∶20，酶解30 min，510 W功率下微波提取10 s，提取收率提高3倍，缩短了提取时间降低了生产成本；黎彧等［19］则将表面活性剂辅助提取与微波辅助提取技术相结合用于提取虎杖色素，以2 g虎杖干粉为原料，0.03%脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)-60%乙醇水溶液为提取剂，提取剂用量100 mL，微波功率800 W，提取时间0.0694 h，提取2次，与溶剂浸提取法(24 h)和索氏提取法(2 h)相比，提取率分别从77.2% 和61.8%增加到98.9%。由此可见，微波萃取技术应用已经相对成熟，与其它技术之间的联用还有很大的潜力。

2.6 超临界提取法 超临界流体技术是近年来发展起来的一种分离新技术，尤其对生物资源的有效提取分离有独特的特点和优势。应用最多的超临界流体是CO2，由于CO2不会对大气造成污染，更不会对操作者带来身体伤害，符合“绿色化学”的要求，因而得到广泛应用。周锦珂等［20］用95%乙醇作为夹带剂，在50℃的条件下以25 MPa的萃取压力，萃取90 min，最终提取物中的白藜芦醇量达到33%以上。倪网东等［21］使用超临界CO2技术萃取虎杖中的白藜芦醇、虎杖苷、大黄素等成分，当压力为25 MPa、温度为40℃、CO2体积流量为25 L/h、夹带剂为200 mL的80%乙醇，萃取时间为90 min时，获得较高萃取率。超临界CO2作为溶剂极性相对较小，对虎杖中的极性较小的大黄素等蒽醌类物质提取率较高，而对白藜芦醇等物质的提取率相对较差。但是由于虎杖中的有效组分蒽醌类物质较多，超临界萃取残渣中的其他组分也得到了相对的富集，因此，超临界萃取对虎杖的开发和利用提供了一个很好的思路。但是超临界提取装置的成本较高，限制了它的大规模应用。

2.7 环糊精(Cyclodextrin，CD)提取技术 CD及其衍生物是近几年来发展起来的一种新型材料，在改善药物制剂方面的应用尤为广泛，在中药制剂中的应用表现为挥发油的固定化、增加药物的稳定性及溶解性等。国内外学者对虎杖中白藜芦醇CD技术的应用始于制剂［22-24］，但近年CD技术也被用作特异性的提取分离材料应用到包括虎杖在内的天然产物的提取分离方向。研究发现［25］利用分子包含结晶法将水洗后的虎杖药材加入β-CD后加热搅拌，过滤，滤液在冰箱放置即可得到β-CD部位，该包合物的体外抗内毒素作用强于阳性对照多黏菌素B，此过程直接就可以形成制剂，减少了分离步骤，省去了制剂时间。环糊精分离技术用于分离纯化研究较少，还有很大的潜力。

综上所述，虎杖的提取以采取溶剂提取技术为主流，超声、微波和超临界等新技术的引入，能有效提高虎杖药材的提取效率，对环境更加友好。

3 虎杖中有效组分的分离和纯化技术发展

虎杖提取物的有效部位可以直接应用于临床，但是药理学和药效研究则必须得到有效成分单体，这不仅是中药发展和国际化的要求，也是提高产品附加值的有效途径。而有效成分单体的获取有赖于高效的分离纯化技术，柱层析技术是目前天然产物分离纯化的一个重要技术，传统的柱层析技术包括硅胶柱层析和氧化铝柱层析，两者在医药工业发展过程中的贡献不可抹杀，但是其针对性较差，单单靠洗脱剂的极性变化来进行分离纯化，操作繁琐，不容易控制。随着材料技术的不断发展，以大孔树脂、膜分离、分子印记等分离纯化技术被广泛的应用于虎杖有效成分的分离和纯化技术上，有的已经实现了产业化，大大的提高了生产效率。

3.1 大孔树脂技术 大孔吸附树脂是一种具有多空立体结构的合成聚合高分子吸附剂，其聚合单体一般是苯乙烯和二苯乙烯类物质，依靠分子筛和物理吸附作用对组分进行吸附，达到分离富集的作用。虎杖中的白藜芦醇和虎杖苷等物质属于二苯乙烯类物质，与大孔树脂单体结构类似，因此分离富集作用较好。杨菊红等［26］将虎杖被β-糖苷酶水解后的产物利用H1020型大孔树脂进行了分离，其对白藜芦醇的饱和吸附量高达51.4 mg/g，解吸率达到92.4%，纯化后白藜芦醇的纯度达到71.5%(粗品中白藜芦醇纯度仅为8.71%)，起到了很好的富集和纯化的作用；刘丹等［27］则对虎杖有效部位进行了大孔树脂吸附纯化研究，以虎杖苷、白藜芦醇、大黄素、大黄素甲醚和总蒽醌的吸附量和解吸率为评价指标，发现D101树脂对虎杖各有效成分具有较好的吸附分离性能；向海艳等［28］同样使用大孔树脂对白藜芦醇苷进行了分离纯化，用乙醇回流对虎杖有进行提取后，提取液中白藜芦醇苷的纯度仅为5.71%，使用了AB-8型大孔树脂进行分离纯化后藜芦醇苷的纯度可达31.5%。目前商业化的大孔树脂数量和种类已经基本上满足了医药工业的需要，但是其分离纯化的针对性和特异性还不是很强，因此，为了进行更好的分离纯化，研发合成新的大孔树脂材料也成为大孔树脂发展的一个重要方向。

3.2 膜分离技术 膜分离技术是20世纪60年代后迅速崛起的一门分离新技术，由于兼有分离、浓缩、纯化和精制的功能，又有高效、节能、环保、分子级过滤的优点，过滤过程简单、易于控制，因此，其在天然产物分离领域应用和推广速度惊人，并产生了巨大的经济效益和社会效益。刘志昌等［29］用HPLC检测到虎杖白藜芦醇苷粗提物的纯度为8.7%，采用微滤膜对其进行除杂处理后，白藜芦醇纯度达到30.5%，继续采用超滤膜对微滤膜滤液进行浓缩分离处理，得到的白藜芦醇的纯度达到了55.8%，两次膜分离过程膜通量均较高。他们还对膜清洗后的膜通量进行了研究发现，清洗后膜通量为原来的99%，膜可以多次使用；蒋明廉等［30］首先利用逆流萃取对虎杖提取液进行了初步纯化后白藜芦醇纯度达到20%以上，然后选择了截留相对分子量为4000 Da的超滤膜，起到了很好的分离效果，分离后白藜芦醇纯度可以达到95%。由于膜分离过程完全是物理分离作用，耗能低，无废液产生，可以达到清洁生产的目的，但是提取物中的高分子物质可能会造成膜堵塞，所以要进行前处理过程，膜的相对造价较高，该方法适用于后端的分离纯化。

3.3 分子印迹技术 分子印迹技术是近年来迅速发展起来的一种对特定目标分子具有高结合力的聚合物的制备技术，将功能单体在印迹分子上进行交联，然后除去印迹分子，从而所合成的材料对目标物有特定的“契合”位置。故对待分离的物质具有很高的选择性。一般合成的材料性质稳定，对各种环境的耐受性好，该技术应用到分离纯化过程中效果显著。向海艳等［31］以白藜芦醇为模板分子，丙烯酰胺为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂，合成了对白藜芦醇具有较好选择性的印迹聚合物，将虎杖提取液上印迹聚合物柱后，对比上柱前后的HPLC谱图发现白藜芦醇峰消失，利用5%乙酸－甲醇溶液为洗脱剂，洗脱发现洗脱液中主要为白藜芦醇和虎杖苷，达到了非常明显的富集效果；张明磊等［32］则以表面修饰乙烯基团的SiO2微球为基体，白藜芦醇为模板分子，丙烯酰胺(AA)为功能单体，EGDMA为交联剂，采用表面印迹技术制备核-壳型白藜芦醇印迹微球，成功用于分离虎杖提取液中白藜芦醇，分离后白藜芦醇纯度由45.7%提高为89.3%；张艳芳等［33］则将分子印迹技术和膜分离技术结合起来，制备出白藜芦醇分子印迹复合膜，解决了普通印迹聚合物对目标分子类似物的吸附作用，该印迹复合膜对模板分子白藜芦醇的吸附量远远大于其它结构类似物，其饱和吸附量达1.72 μmol/g，为非印迹膜的3倍。分子印迹技术是一种不断发展和创新的技术，但是分子印迹颗粒的合成则必须利用纯度较高的目标产物作为模板分子。因此，成本相对较高，但是可以利用较为廉价的衍生物和结构类似物进行替代，因此分子印迹技术的产业化还有很长的路要走。

3.4 高速逆流色谱技术(High Speed Counter Current Chromatography，HSCCC) 经典色谱技术和高效液相色谱技术在现代天然产物分离和活性研究中发挥了非常重要的作用，已经成为了基础性和标准性的技术。在这些技术中多以硅胶或键合硅胶作为固定相起到载体和支撑作用，固定相对样品的吸附过程会引起样品损失，组分变性，进而样本回收率会有所下降。HSCCC技术则是构建一个两相溶剂系统，以其中一相作为固定相，另外一相作为流动相，独特的转动系统带动分离管道进行高速行星运动，形成无数个分液萃取过程，在短时间内实现样品在两相体系中分配。各组分在两相中分配状况不同从而被流动相带出的顺序也不同，由此达到分离的目的。HSCCC技术分离纯度效率高，可以一步制备纯品，很多标准品制备都用到该技术。HSCCC技术目前也已应用与分离黄酮、生物碱、多酚、醌类等，国内外学者对虎杖的HSCCC分离进行了广泛的探索和研究。如Chen L等［34］利用HSCCC技术对虎杖中乙酸乙酯提取物和水提取部分进行了分离，其中乙酸乙酯提取物用三氯甲烷-甲醇-水(4∶3∶2)组成的溶剂系统进行分离得到白藜芦醇，水提物则用乙酸乙酯-乙醇-水(10∶1∶10)和比例为70∶1∶70相同溶剂系统进行了分离，白藜芦醇和虎杖苷的得率分别为2.18%和1.07%；Chu X等［35］利用HSCCC分离了虎杖中的五种化合物，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶5∶4∶6)构建两相系统，提取物进样后从上相中得到了样本1，从下相中得到了样本2。利用石油醚-乙酸乙酯-水(1∶5∶5)系统处理200 mg样本1后得到19.3 mg的虎杖苷，17.6 mg的大黄素-8-D-葡萄糖苷，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶4∶6)，和石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶7∶3)系统梯度洗脱220 mg样本2，得到了18.5 mg的白藜芦醇，35.3 mg的大黄素和8.2 mg的大黄素甲醚，所得产品的HPLC纯度均在95%以上；Fan P H等［36］对3种白藜芦醇类似物进行了分离，虎杖的甲醇提取物利用半制备HSCCC，以环己烷-乙酸盐-甲醇-水(1∶5∶1∶5)体系作为两相体系，在500 mg提取物中经一步制备出虎杖苷23 mg，白藜芦醇糖苷17 mg，白皮杉醇苷15 mg，纯度均为80%以上。

3.5 各种联用技术 由于分离原理的限制或样本性质的特殊性，各种分离纯化技术在应用中总是存在着一些缺陷，联用技术可以保留各种技术的优势，使各种技术特点实现互补，起到事半功倍的效果。所以，其成为当今药物有效成分分离的一个重要的方法和发展趋势。Zhang D L等［37］利用大孔树脂-反相液相色谱技术将提取物中的虎杖苷、白藜芦醇、大黄素甲醚的纯度分别从7.5%、1.3%、2.4%提高到98.8%、98.2%和98.6%；Du F Y等［38］利用特殊状态下的离子离子液体的不挥发、不可燃、性质稳定特性，结合微波辅助萃取，应用于虎杖的提取分离，取到了相当好的效果，将1-n-丁基-3-甲基咪唑基离子液体作为虎杖微波辅助提取反式白藜芦醇的溶剂，在最优的条件下反式白藜芦醇的提取率达到了92.8%。这些研究显示出技术联用带来的强大效力。

4 展望

随着对中药虎杖的不断研究，其化学成分及其药理作用逐渐的被人们所了解，针对虎杖的开发也将进入了一个崭新的阶段。目前新技术的大规模的推广和利用还远远不够，分离提取方面针对虎杖的提取和分离组分的多样化，实现综合提取，这是增加虎杖商品附加值的有效途径，也是虎杖研发的重要方向。另外，虎杖在国内尚没有一个有效的质量控制标准，这是以虎杖为代表的中药走向世界，为国际医学界所认可的瓶颈之一。随着仪器技术的发展和材料科学的不断进步，虎杖中有效成分的提取分离技术以及相应的质控技术也将得到不断的更新和升级，我们有理由相信这些新生力量在不久的将来会成为降低生产成本、发展绿色经济的强大引擎。

［1］宋庆安.虎杖组培苗移栽技术研究［J］.中国农学通报，2007，23(4):135-138.

［2］Burns J，Yokota T，Ashihara H，et al.Plant foods and herbal sources of resveratrol［J］.J Agric Food Chem，2002，50(11):3337-3340.

［3］刘仁旺，滕增辉，张邦乐，等.虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定［J］.第四军医大学学报，2008，29(3):197-199.

［4］罗迎春.虎杖化学成分提取分离研究［D］.贵阳:贵州大学，2007.

［5］聂 媛，李梦青，张 洁，等.虎杖中白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素等有效成分的提取［J］.河北工业大学学报，2008，32，(2):60-65.

［6］Wang H，Dong Y S，Xiu Z L.Microwave-assisted aqueous twophase extraction of piceid，resveratrol and emodin from Polygonum cuspidatum by ethanol/ammonium sulphate systems［J］.Biotechnol Lett，2008，30(12):2079-2084.

［7］刘新荣，高丽萍，夏 涛，等.利用反式白藜芦醇苷水解制备反式白藜芦醇的方法:中国，101519343A［P］.2009-09-02.

［8］李梦青，聂 媛，张 洁，等.酶解法提取虎杖中白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素［J］.精细化工，2008，25(5):467-470.

［9］赵鸿宾，陈华国，龚小见，等.酶解法提取虎杖中的白藜芦醇［J］.贵州师范大学学报:自然科学版，2010，28(2):104-106.

［10］黄志芳，易进海，刘倩伶，等.酶解法提取纯化虎杖提取物中自藜芦醇的工艺研究［J］.天然产物研究与开发，2009，21(6):1061-1064.

［11］吕之尧，郭崇华.微生物酶法从虎杖中提取白藜芦醇的研究［J］.食品科学，2008，29(5):283-286.

［12］邹贤德，舒 鑫.提高中药虎杖中白葬芦醇含量的方法:中国，CNI385535A［P］.2002-12-18.

［13］Wang H，Liu L，Guo Y X，et al.Biotransformation of piceid in Polygonum cuspidatum to resveratrol by Aspergillus oryzae［J］.Appl Microbiol Biotechnol，2007，75(4):763-768.

［14］郑可利，郑小林，吴青青，等.超声波辅助提取虎杖中自藜芦醇工艺研究［J］.宝鸡文理学院学报:自然科学版，2008，28(2):110-115.

［15］王 欣，王晓欣，陈王莹，等.正交设计优选虎杖中蒽醌成分的超声提取工艺［J］.河北化工，2008，31(7):55-56.

［16］公衍玲，金 宏，于慧荣，等.超声法提取虎杖色素及其稳定性的研究［J］.生物加工过程，2010，8(2):36-40.

［17］孙 娟，刘 茜，童 星，等.微波辅助提取虎杖中白藜芦醇苷［J］.中南大学学报:自然科学版，2007，38(4):686-691.

［18］兰天路，朱宏吉，李少白，等.纤维素酶-微波提取虎杖中白藜芦醇的工艺［J］.化学工业与工程，2008，25(5):394-398.

［19］黎 彧，李善吉，吴 川，等.表面活性剂协同微波提取虎杖色素的研究［J］.材料科学与工艺，2007，12(5):244-247.

［20］周锦珂，李金华，葛发欢，等.超临界CO2萃取虎杖中白藜芦醇的工艺研究［J］.中药材，2004，27(9):675-676.

［21］倪网东，满瑞林，李乐于，等.超临界CO2萃取虎杖中有效成分的研究［J］.化学工程师，2006，29(9):3-7.

［22］Lu Zhong，Chen Rong，Liu Hui，et al.Study of the complexation of resveratrol with cyclodextrins by spectroscopy and molecular modeling［J］.J Incl Phenom Macrocycl Chem，2009，63(3-4):295-300.

［23］Bertacche V，Lorrnzi N，Nava D，et al.Host-guest interaction study of resveratrol with natural and modified cyclodextrins［J］.J Incl Phenom Macrocycl Chem，2006，55(3-4):279-287.

［24］安伟娟，锁 然，李 娜，等.白藜芦醇-羟丙基-β-环糊精包合物的制备及鉴定［J］.河北农业大学学报，2009，32(1):103-106.

［25］马坤芳，王德旺，任 勇，等.β-环糊精选择性提取虎杖化学成分及体外抗内毒素活性研究［J］.上海中医药杂志，2008，42(8):81-82.

［26］杨菊红，王 楠，孙艳华，等.大孔吸附树脂结合酶解法分离纯化虎杖中白藜芦醇的研究［J］.离子交换与吸附，2009，25(3):274-281.

［27］刘 丹，汤海峰，张三奇，等.大孔吸附树脂吸附纯化虎杖有效部位的研究［J］.中国中药杂志，2007，32(11):1019-1023.

［28］向海艳，周春山，雷启福，等.大孔吸附树脂法分离纯化虎杖白藜芦醇苷的研究［J］.中国药学杂志，2005，40(2):96-98.

［29］刘志昌，夏 炎，张 莹，等.膜分离技术纯化白藜芦醇的研究［J］.时珍国医国药，2009，20(1):203-204.

［30］蒋明廉，李植飞.膜分离法分离虎杖中白藜芦醇的工艺研究与含量测定［J］.华夏医学，2008，21(4):628-629.

［31］向海艳，周春山，钟世安，等.白藜芦醇分子印迹聚合物合成及其对中药虎杖提取液活性成分的分离［J］.应用化学，2005，25(7):739-743.

［32］张明磊，张朝晖，刘 丽，等.核-壳型白藜芦醇分子印迹微球研制及应用［J］.分析化学，2010，38(1):129-131.

［33］向海艳，张艳芳，祁 超，等.白藜芦醇分子印迹复合膜的制备及选择性研究.应用化学，2009，26(7):786-790.

［34］Chen L，Han Y S，Yang F Q，et al.High-speed counter-current chromatography separation and purification of resveratrol and piceid from Polygonum cuspidatum［J］.J Chromatogr A，2001，907(1-2):343-346.

［35］Chu X，Sun A L，Liu R M.Preparative isolation and purification of five compounds from the Chinese medicinal herb Polygonum cuspidatum Sieb.etZucc by high-speed counter-current chromatography［J］.J Chromatogr A，2005，1097(1-2):33-39.

［36］Fan P H，Marston A，Hay A E，et al.Rapid separation of three glucosylated resveratrolanalogues from the invasive plant Polygonum cuspidatum by high-speed countercurrent chromatography［J］.J Sep Sci，2009，32(17):2979-2984.

［37］Zhang D L，Li X N，Hao D X，et al.Systematic purification of polydatin，resveratrol and anthraglycoside B from Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc［J］.Sep Purif Technol，2009，66(2):329-339.

［38］Du F Y，Xiao X H，Li G K，et al.Application of ionic liquids in the microwave-assisted extraction of trans-resveratrol from Rhizoma Polygoni Cuspidati［J］.J Chromatogr A，2007，1140(1-2):56-62.