高效液相色谱法测定酚类化合物

2012-01-29 06:09
环境科学导刊 2012年4期
关键词:出峰甲酚三氯

林 芳

(昆明市城市排水监测站,云南 昆明 650031)

1 引言

高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法,高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体,为了减低柱压,高效液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。高效液相色谱的特点:高压,高速,高效,高灵敏度。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:速度快,分辨率高,灵敏度高,色谱柱可反复使用,样品量少,容易回收。

酚类化合物是造成环境污染的重要工业化学品,不但有毒,而且它可使水带有讨厌的气味和颜色,因而水中酚类物质测定具有重要意义[1]。目前水质分析中常用4-氨基安替比林萃取光度法测定挥发酚[2,3],而用高效液相色谱测对苯酚、间甲酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚等酚类的测定不常用。

测定中影响高相液相色谱仪测定酚类化合物出峰因素较多,本文主要通过不同梯度淋洗来研究4种酚的出峰时间,从而找到最合适的测定淋洗梯度。

2 实验部分

2.1 主要仪器和试剂

美国Waters公司高相液相色谱仪,包括2690Alliance分离系统 (四元泵及自动进样器),2487紫外检测器。乙腈:高效液相色谱专用 (fisher公司)。甲醇:色谱纯,无酚高纯水。苯酚、间甲酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚标准物质。

2.2 色谱条件

色谱柱:Waters spherisorb C-18(4.6×250mm,5μm);流动相:A乙腈,B无酚高纯水。进样量:10μl。检测器:UV -280nm[4]。

2.3 标准溶液配制

苯酚、间甲酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚标准物质浓度均为1000mg/L,将1000mg/L的标准物质用甲醇稀释成所需的混合标准工作曲线。所有标准溶液在0~4℃下保存。

2.4 定性与定量方法

采用标准物质的保留时间、色谱图定性,依次配制不同浓度的混合标准工作液进样分析,以质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线,外标法定量。

3 结果与讨论

3.1 淋洗梯度

梯度淋洗1:开始 (30%A+70%B),15min(80%A+20%B),流速:1.00ml/min。

梯度淋洗2:开始 (30%A+70%B),15min(80%A+20%B),16min(30%A+70%B),20min(30%A+70%B),流速:1.00ml/min。

梯度淋洗3:开始 (30%A+70%B),20min(80%A+20%B),21min(30%A+70%B),25min(30%A+70%B),流速:1.00ml/min。

梯度淋洗4:开始 (30%A+70%B),25min(80%A+20%B),26min(30%A+70%B),30min(30%A+70%B),流速:1.00ml/min。

3.2 不同梯度出峰时间

梯度1出峰时间:苯酚:3.830;间甲酚:5.443;2,4-二氯酚:10.108;2,4,6-三氯酚:13.417。

梯度2出峰时间:苯酚:5.037;间甲酚:6.228;2,4-二氯酚:9.423;2,4,6-三氯酚:11.02。

梯度3出峰时间:苯酚:5.566;间甲酚:6.889;2,4-二氯酚:10.647;2,4,6-三氯酚:12.561。

梯度4出峰时间:苯酚:6.154;间甲酚:7.659;2,4-二氯酚:11.047;2,4,6-三氯酚:13.261。

从图1可以看出梯度1中4个酚类所用的出峰时间最长,虽然梯度1只用15min所有峰就分离完全,但该梯度经15min后未经缓冲就直接进入下一个样品梯度,即80%A+20%B直接就进入开始(30%A+70%B),4个峰之间间隔时间太长,单个酚峰重叠性不好。

梯度2的出峰时间是4个梯度最少的,各个峰分离度最好,每一个样品所用时间是4个梯度中最少,所用流动相也是4个梯度中最少的。该梯度15min后经缓冲才进入下一个样品梯度,单个酚峰重叠性最好。苯酚出峰时间RSD为1.23%,间甲酚出峰时间RSD为0.07%,2,4-二氯酚出峰时间RSD为0.07%,2,4,6-三氯出峰时间RSD为0.05%。苯酚峰面积RSD为0.13%,间甲酚峰面积RSD为0.16%,2,4-二氯酚峰面积RSD为0.03%,2,4,6-三氯峰面积RSD为0.18%。苯酚峰高RSD为0.82%,间甲酚峰高RSD为1.39%,2,4-二氯酚峰高RSD为0.87%,2,4,6-三氯峰高RSD为0.42%。

梯度3和梯度4的出峰时间没有梯度2少,各个峰分离度虽然好,但是每一个样品所用时间都比梯度2长。

4 结论

经过对4种酚类物质4种不同梯度的分析比较,做这4种酚类物质的时候,选用梯度2在运行大批量样品时可以节约很多时间和流动相。进样过程中,进完样后的缓冲很重要,缓冲能增加样品之间峰的重叠性,保证分析的准确性。

[1]胡秋芬,杨光宇,黄章杰,等.固相萃取-高效液相色谱法测定水中酚类物质[J].分析化学研究简报,2002,5(5):560-563.

[2]本书编委会.水和废水监测分析方法(第3版) [M].北京:中国环境监测出版社,1989:411.

[3]徐泠,孙东红.关于挥发酚测定中有关问题的探讨[J].中国环境监测,1997,(13):57.

[4]本书编委会.水和废水监测分析方法 (第4版)[M].北京:中国环境科学出版社,2002.

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