灵芝多糖对鸡新城疫疫苗抗体滴度的影响

孙秋艳 韩伟涛 王彩霞



灵芝多糖对鸡新城疫疫苗抗体滴度的影响

孙秋艳①韩伟涛②王彩霞①

（①山东畜牧兽医职业学院 山东 潍坊 261061 ②山东潍坊市海洋环境监测中心）

90只14日龄公鸡随机均分成3组，用新城疫LaSota弱毒疫苗点眼滴鼻免疫的同时，2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的灵芝多糖溶液，注射1次/d，连续注射3次，对照组注射生理盐水。各组分别于免疫后7、14、21、28、35、42d翼下静脉采血，分离血清，用微量血凝抑制(HI)测定新城疫抗体效价。结果表明，灵芝多糖高、低剂量组的HI抗体效价明显高于对照组；灵芝多糖的高剂量组抗体效价明显高于低剂量组；表明灵芝多糖对新城疫疫苗的抗体滴度有明显的增强作用，灵芝多糖高剂量组对新城疫疫苗抗体滴度的增强作用更显著。

灵芝多糖 新城疫疫苗 抗体滴度

目前的养禽生产中长期大量使用抗生素、雌性激素，但长期使用这样的药物带来诸多弊端，如引起鸡肠道菌群失调、耐药株增多、免疫功能下降、畜产品中药物残留严重超标等。所以天然、低毒、无药物残留的中药成了医学和兽医学领域都是倍受关注的课题，近年来中药活性成分的研究成为中兽药的研究重点。许多中药活性成分与疫苗合用，可以增强机体的免疫功能和抗病能力[1、2，3]，使抗体在血液中或粘膜表面维持更长时间，发挥持久的免疫效果。大量研究表明，灵芝多糖(GLP)是一种良好的中药活性成分，现代药理学和临床研究表明，GLP具有多种生理活性和药理作用。GLP能显著提高吞噬细胞的吞噬能力，增强体液免疫和细胞免疫功能[4,5,6,7]，还能提高红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性[8,9]，对人体有显著的抗肿瘤作用、抗癌[10,11]作用。GLP还具有免疫调节作用、抗衰老作用[12]、降血糖作用、降血脂的作用、抗氧化作用[12]、保护肝脏[13]和镇痛作用等[14,15]。本试验利用GLP的免疫调节作用，与新城疫LaSota弱毒疫苗配合使用，来探讨灵芝多糖对鸡新城疫疫苗免疫鸡血清抗体滴度的影响，通过测定新城疫抗体效价和免疫器官指数的动态变化，评价GLP糖对ND疫苗的免疫增强效果，旨在为开发中药活性成分免疫增强剂提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 GLP的提取 灵芝购自山东省潍坊市药材公司。按照常规水提醇沉法提取：刘英梅等人[11]称取灵芝200g，研磨至粉末，加水2000ml，80℃水浴3h，重复4次。合并4次滤液3000r/min离心20min。所得上清液浓缩至1/5体积，浓缩液加入3倍量95%乙醇，过夜，弃上清，3000r/min离心20min，所得沉淀真空干燥，得GLP7.12g。使用前用双蒸水配制成0.07g/ml和0.035g/ml，高压灭菌，4℃冰箱保存备用。

1.1.2 新城疫LaSota弱毒疫苗 购自齐鲁动物保健品有限公司，生产批号：150252007；新城疫标准抗原和阳性血清，由山东畜牧兽医职业学院防检系微生物与传染病试验室提供。

1.1.3 试验动物 由山东畜牧兽医职业学院动物饲养房提供1日龄海兰褐公鸡，隔离饲养至14日龄，试验期间的饲养管理按常规方法进行。

1.2 方法

1.2.1 试验设计与分组 海兰褐公鸡养至14日龄(平均母源抗体效价为4 log2，随机分为3组，每组30只，分别用新城疫LaSota弱毒疫苗点眼滴鼻首免，3羽份/只，2个试验组为灵芝多糖的高(GLPH)、低(GLPL)剂量组，分别肌肉注射0.07g/ml和0.035g/ml的GLP，0.1ml/羽，1次/d，连续注射3d，对照组(Control)注射等量生理盐水；28日龄每只颈部皮下注射新城疫LaSota弱毒疫苗二免。

1.2.2 鸡新城疫HI抗体滴度的测定 于免疫后7、14、21、28、35、42d翼下静脉采血0.5ml，2000r/min离心5min分离血清，用微量血凝抑制法测定鸡新城疫HI抗体滴度。

1.2.3 数据处理 所有试验数据采用SPSS10.0统计软件进行单因素方差分析和Duncan’s多重比较，以P=0.05为显著水平。试验结果以平均值±标准差表示。

2 结果

2.1 GLP对新城疫抗体滴度的影响

见表1。与对照组相比，注射GLP的试验组产生抗体的速度要比对照组快，在免疫后第14d就能达到高水的抗体。所有注射GLP的试验组的抗体滴度均高于对照组，试验组在免疫后14、21、28、35、42d的同期抗体水平显著高于对照组(P<0.05)，高剂量组的抗体水平显著高于低剂量组(P<0.05)。免疫后第14d试验组的抗体滴度显著高于对照组，免疫后第21d高剂量组抗体水平显著高于低剂量组(P<0.05)，免疫28d所有组抗体滴度都达到最高峰值，免疫后42d所有组的抗体滴度都开始降低，试验组仍维持高水平的抗体。

注：同列数据肩标字母不同表示差异显著(P<0.05)，字母相同表示差异不显著(P>0.05)。

3 结论

体液免疫是机体抗御传染病的主要因素之一，抗体是介导体液免疫的重要分子，抗体滴度的高低直接反应机体的体液免疫状态。在免疫后第7天GLP验组的抗体效价都高于对照组，但差异不显著，其原因可能是由于GLP作为免疫增强剂作用于机体免疫器官帮助机体产生高水平的抗体需要一个过程。在免疫后14d试验组抗体水平均显著高于对照组，说明GLP可以加快抗体的产生速度。在免疫后28d灵芝多糖试验年组的抗体效价达到最高峰，GLP高剂量组的抗体滴度为12.3Log2，比对照组高3.7 Log2，且从21d开始到第42d都维持高水平的抗体滴度；低剂量组的抗体滴度为11.3 Log2，比对照组高2.7 Log2，同高剂量组一直到第42d都维持高水平的抗体滴度，说明GLP能够延长较高抗体滴度的维持时间，对鸡新城疫疫苗的免疫效果有显著的增强作用。在免疫后第21d开始高剂量组的抗体滴度显著高于低剂量组，说明在一定限度内，新城疫抗体滴度会随着GLP的注射量的增加而增加。本试验结果表明，GLP不仅可以加快抗体的产生速度，还可以显著提高机体产生抗体的水平，明显改善机体的体液免疫机能。GLP在试验所选取的质量浓度范围内高剂量组比低剂量组的免疫增强效果好，为进一步研究GLP的免疫增强效果提供了理论依据。

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（2012–04–19）

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