猪病的实验室诊断技术

王新 （山东省济南市长清区平安兽医站 250306） 邢兆苗 （山东省济南市长清区归德兽医站）



猪病的实验室诊断技术

王新 （山东省济南市长清区平安兽医站 250306） 邢兆苗 （山东省济南市长清区归德兽医站）

1 猪的血尿诊断

1.1 尿中的潜血检查

肾、膀胱及尿路的出血性疾病以及溶血性疾病，如猪瘟、猪丹毒、新生仔猪溶血病等，在其尿液中均含有血液或血红蛋白，但若仅有少量，肉眼直接看不到，必须借助化学方法来测定。常用联苯胺测定法。

1.1.1 原理 血红蛋白中的铁，具有过氧化物酶的作用，可分解过氧化氢放出氧，使联苯胺氧化呈绿色或蓝色。

1.1.2 试剂 （1）联苯胺冰醋酸饱和液；（2）3%过氧化氢溶液。

1.1.3 测定方法 取被检尿液3~5ml，置洁净试管中煮沸，以破坏其他可能存在的过氧化物酶。冷却后加入联苯胺冰醋酸饱和液数滴，再加3%过氧化氢溶液数滴，混合，数秒钟后即可呈现反应。

1.1.4 结果判定 若供检尿呈绿色或蓝色，为阳性反应，颜色的深度(绿、蓝绿、蓝色、深蓝)，可表示反应的强弱。若5min后仍不变色，则为阴性反应。

1.2 粪中的潜血检查

粪便中潜血阳性，见于胃溃疡、胃穿孔及胃肠道的出血性疾病。

1.2.1 原理与试剂 与尿的潜血检查相同。

1.2.2 测定方法 取洁净棉签两根，滴以生理盐水，一支棉签上涂粪，另一支作对照，均置酒精灯上加温片刻，以破坏可能存在的几种过氧化物酶。待冷，各加1%联苯胺冰醋酸溶液及3%过氧化氢液各2滴，观察颜色出现的快慢及深浅。

1.2.3 结果判定 如果涂粪棉签呈蓝色，而对照棉签颜色不变，为阳性反应；假若两支棉签均呈蓝色，为假阳性反应；若两支棉签均不变色，为阴性反应。检验结果，可按以下规定记录：加试剂后立即出现深蓝或深绿色者为最强阳性反应。加试剂后初现浅蓝色，0.5min内渐现深蓝或深绿色者，为强阳性反应。

1.3 粪便的显微镜检查

本法是借助显微镜观察检查粪便中的寄生虫虫卵和幼虫，同时也可了解到被检猪的消化能力和胃肠道有无炎症病变。直接涂片法：取洁净载玻片1片，先滴1大滴生理盐水(若用50%甘油水溶液更好)，再以竹签挑取被检粪便少许，与载玻片上的生理盐水混匀，涂成薄层，即可镜检。本法简便易行，常用于检查粪便中有无寄生的蠕虫卵，由于取粪量很少，检出率较低，所以要求每个样品多涂5~6片。若在涂片中同时见到多量的红细胞和白细胞，则表示肠道有炎症。

2 猪的血液常规检查

血液常规检查的项目有多种，但是目前用于猪病诊断的项目不多，常用的有血红蛋白含量测定、红细胞计数、白细胞计数等。必须指出的是，血液常规检查仅仅是为临诊诊断提供一些数据，是一种辅助诊断手段，在操作时要严格遵循操作规程和注意事项，力求准确，避免差错，同时应与临诊检查密切结合，才能得到正确的结论。

2.1 血红蛋白含量测定

健康猪的血红蛋白值为10.5g/100ml(变动范围9.5~ 12.0，若是血红蛋白的含量增多，见于各种原因引起的血液浓缩，如剧烈的腹泻、呕吐、出大汗及某些中毒病。血红蛋白含量降低，见于仔猪贫血及各种慢性消耗性疾病，如慢性猪瘟、仔猪蛔虫病等

2.2 红细胞计数

红细胞计数是将一定量供检血经一定倍数稀释后，计算其一定容积内的红细胞数，并换算为每立方毫米血液的含量，健康猪的红细胞数平均值为600万/m3(变动范围为500~700万)。红细胞增多，为血液浓缩，如脱水、出大汗、胸膜炎的渗出期等；红细胞减少，为各类贫血性的疾病或慢性消耗性的疾病。计算按下列公式进行：每立方毫米血液内红细胞总数=x/80×400(小方格总数)×稀释倍数×10。x为计数5个中方格(80个小方格)的红细胞数。如血液稀释200倍，为计算方便，也可将计数5个中方格(80个小方格)内的红细胞总数，乘以10000，即得每立方毫米血液内的红细胞总数。

2.3 白细胞计数

白细胞计数，对某些疾病的辅助诊断有重要的意义。多数细菌性感染和炎症，都能使白细胞增多，如猪丹毒、肺炎、链球菌感染等。而一些病毒性的传染病则能使白细胞减少，如猪瘟、流行性感冒等；某些严重疾病的后期，机体高度衰竭时，亦可见白细胞减少；长期应用某种药物(如氯霉素)，也可引起白细胞减少。健康猪白细胞的平均值为13000个m3(变动范围为11000~16000个)。方法：（1）取清洁、干燥的小试管1支，以0.5ml吸管准确吸取白细胞稀释液0.38ml，放入试管中。（2）稀释血液。以血红蛋白吸管准确吸取供检血液至20m3处，用干棉球擦去管尖外壁所附的血液，立即将被检血吸入已装稀释液的试管底部，并吸取上清液反复洗净沾在吸管内壁上的血液数次，然后振摇试管1~2min，使血液与稀释液充分混合，即可成为20倍稀释的血液。（3）充液的步骤和操作，同红细胞计数。（4）计数的方法与红细胞计数相同，但白细胞计数时用低倍显微镜即可，计数四角处4个大方格(每个大方格包括16个中方格)内的白细胞总数。

3 细菌的分离、培养和鉴定

猪的细菌性疾病种类很多，危害不小，常见的细菌病有仔猪黄痢、白痢、猪水肿病、副伤寒、猪丹毒、猪肺疫、链球菌病等，其中有的疾病可以一目了然(如仔猪黄痢、白痢等)，易于诊断，有些疾病则一时难以确诊(如副伤寒、猪接触传染性胸膜肺炎等)，而更多的细菌病是并发或继发感染的，为了做到及时、正确地诊断猪病，规模化的猪场有必要开展细菌的分离、培养和鉴定工作，同时还可将分离出的细菌，通过抑菌试验筛选出敏感性强、疗效好的抗菌药物进行治疗。掌握了细菌学的检查技术，还可开展对猪舍消毒效果的测定，饮用水、饲料中的细菌学检查等项工作。

化验室开展这项工作，需要一定的设备和条件，操作人员应该具备兽医微生物学的基本知识和实验室的操作技术、要求做到正确、熟练，其内容包括病料的采集，细菌的分离培养，形态观察，生化试验和动物接种试验等。

4 药物敏感试验

抗菌药物在诸病防治上已得到了广泛的使用，但是对某种抗菌药物长期或不合理地使用，可引起这些细菌产生耐药性。如果盲目地滥用抗菌药物，不仅造成药物的浪费，同时也延误了治疗时机。药物敏感试验，是一项药物体外抗菌作用的测定技术，通过本试验，可选用最敏感的药物进行临珍治疗，同时也可根据这一原理，测定抗菌药物的质量，以防伪劣假冒产品的过期失效药物进入猪场。常用的药敏感试验的方法有纸片法等三种，具体介绍一种：纸片法。各种抗菌药物的纸片，市场有售，是一种直径6mm的圆形小纸片，要注意密封保存，藏于阴暗干燥处，切勿受潮。注意有效期，一般不超6个月。

4.1 试验材料

经分离和鉴定后的纯培养菌株，营养肉汤，琼脂平皿，棉拭子，镊子，酒精灯，药敏纸片若干。

4.2 试验步骤

将测定菌株接种到营养肉汤中，置37~c条件下培养12h，取出备用。用无菌棉蘸取上述菌液，均匀涂于琼脂平皿上。待培养基表面稍干后，用无菌镊子分别取所需的药敏纸片均匀贴在培养基的表面，轻轻压平。将培养皿置37℃温箱12~18h后，测量各种药敏纸片抑菌圈直径的大小。

（2012–06–21）

S858.28

B

1007-1733(2012)10-0048-02