HPLC法测定硫酸奈替米星的含量

顾 晔，杜 渊，金 新

1.江苏无锡市产品质量监督检验中心，江苏无锡 214101

2.江苏无锡市第三人民医院，江苏无锡 214041

3.江苏无锡福祈制药有限公司，江苏无锡 214041

硫酸奈替米星为一半合成的氨基糖苷类广谱抗生素。其作用机理是通过抑制敏感微生物的正常蛋白合成而起作用。

本品适用于敏感细菌所引起的包括新生儿，婴儿，儿童等各年龄患者在内的严重或危及生命的细菌感染性疾病的短期治疗。这些感染性疾病包括：1）复杂性泌尿道感染；2）败血症；3）皮肤软组织感染；4）腹腔内感染；5）下呼吸道感染等。

因目前国内药典2010版规定其原料含量测定的方法采用微生物检定法[1]，但此方法操作繁琐，影响因素多且测得结果稳定性差，故本文采用美国药典方法[2]，改用反相高效液相色谱测定方法，用于本品的含量测定，并进行方法验证[3-4]，为控制该原料药的质量提供了可靠依据。结果表明本法灵敏、准确且操作简便。

1 仪器与试药

美国Dionex公司UltiMate 3000型液相色谱仪。庚烷磺酸钠批号31.03.12；磷酸批号31.12.14；乙腈批号为31.01.14，三种试剂均为色谱级供应商为默克。硫酸奈替米星样品（自制，批号20120101，20120102，20120103）。

2 色谱条件

色谱柱：Dionex C18（250×4.6mm 5μ） ；流动相为0.5%稀磷酸（每毫升含有20.22g庚烷磺酸钠）：乙腈（62：38）；流速：1.0ml/min；检测波长为205nm，柱温为35℃；进样量为20μl。

3 溶液配制

1）系统适用性溶液：精密称取硫酸奈替米星标准品和硫酸西索米星标准品各25mg，用流动相稀释至25mLL；2）对照品储备液：精密称取硫酸奈替米星标准品100mg，用流动相稀释至10mL；3）对照品溶液：精密称取硫酸奈替米星标准品50mg，用流动相稀释至50mL；4）供试品溶液：精密称取硫酸奈替米星供试品50mg，用流动相稀释至50mL。

4 专属性试验

取系统适用性溶液，注入液相色谱仪，记录保留时间作为定性指标。硫酸奈替米星对照品的色谱图见图1，硫酸奈替米星色谱峰的保留时间为7.320min，硫酸西索米星色谱峰的保留时间为7.967 min，硫酸奈替米星与杂质硫酸西索米星完全分离，分离度为1.8（要求为应不小于1），理论塔板数按硫酸奈替米星峰计算为7471（要求为应大于3000）。

图1

5 精密度试验

精密称取硫酸奈替米星标准品50mg，用流动相稀释至50mL，连续进样6次，记录色谱图，结果硫酸奈替米星的保留时间、峰面积的平均值分别为7.972、3993.338，RSD分别为0.08%、0.05%，精密度良好。见图2。

图2

6 线性试验

分别精密量取对照品储备溶液（a）0.2、0.5、1.0、1.5、2.0mL加入10mL容量瓶中并用流动相定容（分别相当于测试浓度的20%、50%、100%、150%、200%）。取上述溶液分别连续进样2次，记录称样量、峰面积，并计算平均值、回归方程和相关系数，作出线性图。结果表明在浓度 0.20052mg/mL～2.0052mg/ mL范围内线性关系良好，得线性回归方程Y=3783.8X+132.93，相关系数为0.9998。

7 准确度试验

精密称取25mg硫酸奈替米星对照品，用流动相溶解并稀释至50mL，浓度约为0.5mg/mL，相当于测试浓度的50%，制备3份。

精密称取50mg硫酸奈替米星对照品，用流动相溶解并稀释至50mL，浓度约为1.0mg/mL，相当于测试浓度的100%，制备3份。

精密称取75mg硫酸奈替米星对照品，用流动相溶解并稀释至50mL，浓度约为1.5mg/mL，相当于测试浓度的150%，制备3份。

取上述溶液共9份，分别连续进样，记录称样量，峰面积，按外标法计算回收率及平均值，RSD。计算得到平均回收率为99.87%，RSD1.54%，方法准确可靠。

8 检测限、定量限的测定

准确称取硫酸奈替米星适量，稀释至一定浓度并进样20μl，计算信噪比，其信噪比（S/N）在10左右的目标溶剂浓度即为定量限浓度，信噪比（S/N）在3左右的目标溶剂浓度即为检测限浓度。试验测得硫酸奈替米星的定量限为2.5055μg/mL，相当于0.05ng。检测限为0.25055μg/mL，相当于0.005ng。

9 样品测定结果

取连续生产的样品三批，按3.4项下配制，注入液相色谱仪，记录色谱图。

根据USP32版方法，用外标法计算硫酸奈替米星的含量，计算公式如下：

注：对照品标示量为653μg，对照品干燥失重为7.5%。

3批自制样品20120101、20120102、20120103的含量分别为648.7μg 、 651.1μg 、652.2μg均符合USP药典规定（药典规定应不低于595μg）。

10 讨论

此美国药典方法经过方法学的专属性、精密度、线性、准确性、定量限、检测限试验验证，结果均符合要求。此方法不但简便，而且准确可靠，所以可以采用此反相高效液相色谱法对硫酸奈替米星的含量进行测定，以便于对此产品的生产提供可靠依据，对其质量进行更好的控制，也为该产品在美国市场销售创造条件。

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：987.

[2]USP32_NF27[S].USA.2009:3071-3072.

[3]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录194-195.

[4]王其勇，宋勤.HPLC法测定茵栀黄胶囊中栀子苷的含量[J].药物分析杂志，2009，29(3):470-471.