环保透明剂替代二甲苯在病理制片技术中的应用

第四军医大学唐都医院病理科（西安710038）

兰 淼 李艳红△ 巩 丽 朱少君 任 拼 姚 丽 韩秀娟 张 伟▲

在常规组织石蜡制片技术中，组织透明、切片脱腊、透明、封固剂制备都离不开透明剂的使用，是病理制片必须使用的有机溶剂。二甲苯作为病理石蜡切片透明剂效果优良，但随着其对人体的毒性研究，发现长期使用二甲苯可对机体构成众多危害［1］，吸入二甲苯蒸气可引起眼、鼻、喉的刺激，高浓度时可致严重的呼吸困难，甚至死亡。卫生部在《工业企业设计卫生标准》中对二甲苯的最高容许浓度做了具体规定［2］，已把二甲苯中毒定为职业病之一。环保透明剂是以纯天然植物提取油配制而成无色芳香透明液体。我们采用环保透明剂代替二甲苯运用到病理制片和染色过程中，观察其运用效果，现报道如下。

材料与方法

1 材 料 选取本院2010年4～6月临床送检的活体组织标本，其中胃肠组织30例，甲状腺组织30例，皮肤组织30例，淋巴结组织30例，共计120例。仪器包括德国Leica SP300全自动封闭式脱水机2台、德国Laica自动染色封片机2台、德国Leica RM 2235石蜡切片机均由西安康源生物器材公司提供；YT－6B型摊烤片机由湖北孝感亚光医用生物器材公司提供。试剂包括环保透明剂（由广州市秀威贸易有限公司提供）、二甲苯分析纯（西安化学试剂厂）、苏木素（英国进口上海化学试剂分装厂提供）、伊红（北京化学试剂厂）、中性树胶（中国上海标本模型厂）。

2 方 法 120例标本每例标本分别取两块组织，取材大小为1．5c m×1．5c m×0．3c m。分为二甲苯组与环保透明剂组各120块。分别放入装有环保透明剂和二甲苯试剂的全自动封闭式脱水机中，组织按常规脱水程序进行固定、脱水、透明和浸蜡。每组各设2缸透明剂，作用时间相同。每缸为30 min，2缸总共为60 min。两组组织分别进行石蜡包埋，4μm厚切片，烤片机烤片，温度70℃，时间1h。再分别放入装有环保透明剂和二甲苯试剂的全自动染色封片中，切片按常规程序进行脱蜡脱水、HE染色、脱水透明和封片。

结 果

1 脱水机组织处理时间比较 见表1。二甲苯组与环保透明剂组各个环节的组织脱水浸蜡时间无增减。环保透明剂组两组梯度乙醇脱水时间无差别。

表1 两组标本全自动组织脱水机处理程序比较

2 染色机各环节时间比较 见表2。二甲苯组与环保透明剂组的切片脱蜡时间一致，环保透明剂组的脱蜡时间较二甲苯组稍长，两组梯度乙醇脱水时间无差别。

表2 两组切片全自动染色封片机染色程序比较

3 组织处理效果比较 见表3。环保透明剂应用于组织透明效果与二甲苯基本一致，利于切片，染色鲜亮，对比度强，有效的减少了环境污染。

表3 环保透明剂与二甲苯病理组织处理效果的比较

讨 论

在常规石蜡制片技术中，组织在固定后需要进行脱水透明和浸蜡等处理，石蜡切片必须经过脱蜡后才能进行相关的染色。一直以来在病理组织制片过程中，二甲苯是首选的脱蜡剂［3］。环保透明剂是一种新型的生物组织透明剂，它是一种无色、不挥发的有机溶剂，天然水果味，即使加热也不会产生对人体不利的有害气体，符合国家 GB18583－2001环保标准。由于乙醇和石蜡不能相混合。因此组织在乙醇脱水后必须要经过一种过渡的溶剂，才能进入石蜡浸蜡。环保透明剂具有既能和乙醇又能和石蜡及树胶互溶的物理特点，对组织也有透明作用，因此在脱水剂乙醇和石蜡之间能起到一种“桥梁作用”。环保透明剂和二甲苯对组织都有收缩作用，但比二甲苯少，能很好地保存组织细胞结构，其作用效果与二甲苯相当。在快速石蜡制片的操作过程中，将环保透明剂加热至45℃，低于浸蜡的温度，相应减少作用时间，也不会引起组织收缩和破坏组织抗原［4－8］。使用该试剂制作的组织蜡块软硬适中，易于切出2～3μm完整切片。切片经环保透明剂脱蜡后进行HE染色、特殊染色和免疫组化染色，组织细胞结构完好，核浆染色分明：能显示出相应的组织细胞结构和其他组织成分如胶原纤维、网状纤维、基底膜和中性黏液物质等；也能很好地将组织中的相应抗原特异地显示出来，定位准确，背景干净。

本研究表明，采用环保透明剂可以代替二甲苯用于病理制片技术，制作出的组织染片不会对组织细胞结构和组织细胞内其他成分以及组织抗原造成破坏，符合临床病理诊断和研究所要求的优质染色片的要求，同时也符合实验室环保的要求。缺点是价格较高，且对于长期保存的蜡块切片，其蜡块粘固度，有无皲裂及切片长期封固效果，有无褪色现象还有待观察。因此，该试剂能否广泛应用于病理组织制片中，达到良好而持久的应用效果，尚需进一步研究。

［1］Andres S，Revilla A，Cezar R，et al．Potential toxicity of toluene and xylene evoked by mitochondrial uncoupling Toxicology in Vitro［J］．2007，21（5）：782－788．

［2］中华民共和国卫生部主编．工业企业设计卫生标准［M］．北京：人民卫生出版社，1979：1112．

［3］蔡爱英，王希萍．以正丁醇、硬脂酸为媒剂的石蜡包埋法［J］．齐齐哈尔医学院学报，2002，23（8）：945．

［4］陈海滨，董从丽，潘 云．高质量病理切片的一种脱水透明方法［J］．大理学院学报，2003，2（3）：67－68．

［5］田 珑，张卫光．正丁醇脱水制作肝组织石蜡切片［J］．解剖科学进展，2004，10（2）：190．

［6］周 导，顾 萍，严军宁，等．硬脂酸石蜡混合液替代二甲苯透明剂制片的探讨［J］．诊断病理学杂志，2006，13（1）：75．

［7］李 蓓，杨继洲．TO型生物制片透明剂在病理制片中的应用体会［J］．中国医疗前沿，2007，2（17）：76．

［8］潍常兰，刘付华，贺美华，等．松节油代替二甲苯快速脱蜡在病理切片中的应用［J］．怀化医专学报，2003，2（1）：91．