糖尿病大鼠血、尿TGF－β1的相关性及糖肾安对其表达的影响

王镁，吴兆利，郑曙琴，王哲，伊桐凝，南春红，岳志军

(1.辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032;2.辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110032)

糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Diabetes mellitus，DM)最主要的慢性并发症之一，转化生长因子 β1(Transforming growth factor－beta1，TGF－β1)是DN复杂的细胞因子网络中的核心因子，是肾脏损伤的关键致病因子，有研究表明TGF－β1高表达与DN肾纤维化进程有关［1］。

1 材料和方法

方法:雄性Wistar大鼠按照55mg/Kg腹腔注射2%STZ溶液，72h后眶静脉取血测血糖≥16.7mmol/L者纳入实验。将成模大鼠随机分3组，另设空白对照组，中药组予糖肾安煎剂(黄芪、茯苓、白术、丹参、山茱萸等组成)灌胃，9.0ml/kg/d;西药组予厄贝沙坦(赛诺菲安万特提供)蒸馏水溶液0.3 ml/kg/d，模型对照组和空白对照组予等容积蒸馏水;每日1次，共8周。8周末用金属代谢笼准确收集24h尿液标本，取4ml离心后保存，待测尿 mALB、TGF－β1水平;用20%乌拉坦腹腔麻醉大鼠，腹主动脉取血离心分离血清，测定血糖、TGF－β1水平，血尿TGF－β1采用双抗体夹心ELISA法，实验步骤严格按说明书进行;经左心室注入4℃预冷生理盐水反复灌洗后至肾脏转为苍白色，取部分肾皮质置于多聚甲醛固定液中24h后，制作石蜡标本、切片，进行HE染色和PAS染色。

2 统计学处理

3 结果

3.1 各组血、尿TGF－β1、尿mALB水平的变化

8周后各组血、尿TGF－β1和mALB水平的变化见表1，模型组大鼠血、尿TGF－β1、mALB明显高于正常组(P＜0.01)，中药组、西药组明显低于模型组(P＜0.01)，与空白对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。

表1 各组血、尿TGF－β1、mALB比较(s)

表1 各组血、尿TGF－β1、mALB比较(s)

注:与正常组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;与模型组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

空白对照组8 77.4 ±3.1 76.1 ±6.3 72.2 ±8.2模型组 9 97.3 ±14.0＊＊ 104.2 ±12.5＊＊ 102.4 ±13.7＊＊中药组 9 82.4 ±7.7△△ 86.4 ±13.1△△ 83.3 ±11.5△△西药组 7 84.4 ±9.7△△ 81.8 ±16.5△△ 81.4±9.4△△

3.2 血TGF－β1与尿TGF－β1的相关分析

各组血TGF－β1与尿TGF－β1进行相关分析结果均呈显著正相关(P＜0.05)，见表2。

表2 各组血TGF－β1与尿TGF－β1的相关分析

3.3 糖肾安对糖尿病大鼠肾脏组织的病理学影响

3.3.1 HE 染色

正常大鼠肾脏结构清楚，细胞核呈蓝色，胞浆呈粉红色。模型组肾小球毛细血管壁狭窄甚至闭塞，并可见部分肾小管上皮细胞空泡变性。中药组、西药组肾小球毛细血管壁狭窄甚至闭塞较模型组减轻，见图1。

3.3.2 肾脏组织PAS染色

正常组肾小球结构正常，未见明显的肾小球系膜增生及基底膜增厚，模型组肾小球基底膜成分明显增加，而中药组、西药组的基底膜成分较模型组明显降低，见图2。

图2 各组肾脏组织PAS染色(PAS，400×)结果

4 讨论

DN的发病机制尚未完全阐明，各种细胞因子影响着肾小球血液动力学、细胞外基质代谢、细胞增殖和肥大，其中TGF－β1可能是各种内源性和外源性刺激引起正常肾组织纤维化发生的主要细胞因子［2］。它能选择性的增加ECM的合成，减少ECM的降解。在DN状态下，TGF－β1及其受体水平在肾脏局部增高，从而促进其基因表达水平升高［3］，使肾小球基底膜的通透性增强，尿蛋白排泄明显增高。

糖肾安由黄芪、茯苓、白术、丹参、山茱萸等组成。已有临床研究表明，糖肾安能降低DN患者尿蛋白排泄量，改善乏力水肿等症状，还具有抗氧化应激作用［4－5］。方中黄芪可以减轻肾小球基底膜病变，抑制肾脏肥大，从而减少尿蛋白排出，亦可部分纠正糖尿病早期的肾脏高灌注、高滤过，对肾脏具有保护作用［6］。丹参对糖尿病早期肾病患者血浆内皮素(ET－1)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和24h尿白蛋白排泄率水平均有不同程度降低。可抑制ET－1产生和CⅣ的合成［7］。在糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞加入山茱萸提取物环烯醚萜总苷后细胞异常增殖明显减少，细胞形态趋于正常［8］。

本实验证明，糖尿病大鼠8周后血尿TGF－β1水平比正常组明显升高，尿mALB水平明显升高。血、尿液TGF－β1与尿微量白蛋白具有相关性，糖肾安有效地降低了尿mALB和血尿TGF－β1的水平。减少糖尿病大鼠尿mALB，减轻了肾小球病理学改变，其对DN的防治作用可能与抑制TGF－β1的表达，预防纤维化发生有关。本研究结果显示，糖肾安能减轻肾小球毛细血管壁的狭窄和闭塞，以及肾小球系膜的增生及基底膜增厚。

［1］Yu HT.Progression of the chronic renal failure［J］.Arch Intern Med，2003，163(12):1417 －1429.

［2］Chen S，Hong SW，Iglesia DE － LA，et al.The key role of the transforming growth factor－beta system in the pathogenesis of diabetic nephropathy［J］.Renal Fail，2001，23(6):470 －481.

［3］Tamaki K，Yoshimura J，Okuda S.Molecular biology in regulation of kidney function:TGF－beta(transforming growth factor－beta)［J］.Nippon Rinsho，2006，64(Suppl2):297 －301.

［4］王镁，韩波.糖肾安对Ⅳ期糖尿病肾病尿蛋白排泄影响的临床观察［J］.中医药学报，2007，35(2):60 －61.

［5］曹光，王镁.糖肾安煎剂对糖尿病大鼠氧化应激影响的研究［J］.中华中医药学刊，2009，27(4):761 －762.

［6］杨瑞峰.黄芪注射液治疗糖尿病肾病56例［J］.医药论坛杂志，2006，27(16):84.

［7］李中和，张建明，霍飞蛟.丹参对糖尿病早期肾病患者血浆内皮素和 IV 型胶原的影响［J］.中国综合临床，2002，18(7):49 －50.

［8］许惠琴，刘洪，沈健，等.山茱萸环烯醚萜总苷对AGEs培养肾小球系膜细胞的影响［J］.中国药理学通报，2006，18(4):53 －57.