结直肠腺癌中Tiam1、血管内皮生长因子－C和血管内皮生长因子受体－3的表达及其临床意义

吕 铮 张志勇 阎继东 张 林 (唐山工人医院胸外科，河北 唐山 063000)

T淋巴瘤侵袭转移诱导基因1(Tiam1)可特异地激活与Rac相关的通路，改变肿瘤细胞形态和功能，对肿瘤的分化、侵袭及转移有重要作用。近来研究认为Tiam l与肿瘤脉管生成有关〔1，2〕。血管内皮生长因子-C(VEGF-C)通过血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)有效调节肿瘤中淋巴管的生成。但是，Tiam1与VEGF-C的作用尚未见报道。本研究应用免疫组化技术检测结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表达，分析其在不同临床特征中的表达差别，探讨Tiam1对淋巴管生成的作用，以期为研究肿瘤的淋巴管生成提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 临床材料 收集2005年1月至2006年12月唐山工人医院病理科确诊的结直肠腺癌标本作为观察组，均符合WHO关于结直肠腺癌的诊断标准。患者术前均未进行任何放、化疗，共87例;其中男47例，女40例，年龄35～69岁，中位年龄56岁。选取距癌超过10 cm的正常肠黏膜组织作为对照组，共80例;其中男50例，女30例;年龄36～68岁，中位年龄55岁。两组相关临床资料比较无明显差别，具有可比性。

1.2 免疫组化检测Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表达Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白表达检测试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限责任公司，均进行预实验。免疫组化采用二步法完成。

1.3 Tiam1、VEGF-C和 VEGFR-3染色结果的判读 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白阳性染色部位为细胞质中，切片中显示为均匀的棕黄色细颗粒，选取有代表性的10个400倍显微镜视野，计算每个视野中阳性细胞的百分率后取平均值。阳性细胞≥25%为阳性，＜25%为阴性。

1.4 统计学处理 采用SAS6.12进行分析，组间比较采用χ2检验，并进行线性相关分析和生存分析。

2 结果

2.1 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在观察组与对照组中的表达比较 观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的阳性率明显高于对照组(均P＜0.001)。见表1。

表1 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在观察组与对照组中的表达比较〔n(%)〕

2.2 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在观察组不同临床病理特征中的表达差别 观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3阳性率均与肿瘤淋巴结转移、淋巴结转移个数、Dukes分期及Ki-67的表达密切相关。见表2。

2.3 观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的相关性线性相关分析结果显示，Tiam1和 VEGF-C(r=0.44，P=0.023 1)、VEGF-C 和 VEGFR-3(r=0.49，P=0.003 5)、Tiam1和VEGFR-3(r=0.40，P=0.036 9)的表达均呈正相关。

2.4 观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3表达的生存分析本组患者随访时间为6～60个月，平均34.5个月。Tiam1(χ2=32.172 4，P ＜0.001)、VEGF-C(χ2=10.906 0，P=0.001)和 VEGFR-3(χ2=4.344 5，P=0.037 1)的阳性率均与预后相关，即Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3高表达患者的预后差。见图1。

表2 Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在观察组不同临床病理特征中的表达〔n(%)〕

图1 Tiam1、VEGF-G、VEGFR-3蛋白表达与结直肠癌预后的关系

3 讨论

结直肠腺癌临床常见，作为实体肿瘤，浸润、生长及转移是其重要的生物学行为，临床发现影响结直肠腺癌预后最关键的是淋巴道转移，至今人们尚未确定淋巴道转移的机制〔3〕。近来人们发现了以VEGF-C为代表的淋巴生成促进因子。VEGF-C基因定位于染色体4q34，其长度为40 kb，含有7个外显子，其中外显子3和4编码VEGF的同源区，外显子5和7编码富含半胱氨酸的C6XC10XCRC型的基序，外显子6编码丝蛋白典型的C10XCXC基序。VEGF-C基因表达VEGF-C蛋白，其具有419个氨基酸残基，在酶的作用下，位于227位的精氨酸和228位的丝氨酸之间发生水解，形成31 000/29 000的异二聚体而发挥生物学作用。VEGF-C在作用过程中，主要通过其受体VEGFR-3协同发挥淋巴管新生的作用，但是有关此通路的影响因素研究较少。Tiam1是新发现的重要的肿瘤转移促进基因，定位于人染色体21q22.11，表达产物为Tiam1蛋白，在体内外均可以特异性激活Rho GTPase家族中的Rac1，参与肿瘤的侵袭和转移〔4，5〕。Xu 等〔6，7〕研究认为 Tiam1 还能调节相关蛋白的细胞膜定位，诱导膜皱褶形成，促进肿瘤的运动功能;同时，Tiam1的生物学功能多样，对肿瘤细胞的增殖、分化及运动也有重要作用〔8，9〕。

本实验提示Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3在肿瘤进展中重要的促进作用，即三者可以促进肿斩发生，并具有与癌基因类似的作用。观察组中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3的阳性率均与肿瘤淋巴结转移、淋巴结转移个数、Dukes分期、Ki-67的表达密切相关，提示Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3参与肿瘤的淋巴道转移及细胞增殖等进展。由于淋巴道转移、Dukes分期及Ki-67的表达均与肿瘤的预后相关，因此Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3的联合检测对判断预后有重要的价值。而且本实验的生存分析直接证实了Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3对预后的价值，提示结直肠腺癌标本Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3阳性表达时，患者的预后差。由于VEGF-C和VEGFR-3是淋巴管生成的经典通路，而Tiam1与VEGF-C和VEGFR-3均具有相关性，提示Tiam1对VEGF-C和VEGFR-3介导的淋巴管生成具有重要的促进作用，即Tiam1具有淋巴管生成的作用。Tiam1的调节过程可能通过催化Rac1的活性而诱导 VEGF-C的表达而实现〔10〕。Tiam1可能作为上游基因，激活Rac1后再经JNK、P38MAPK等信号分子转导，调节细胞骨架重组，影响细胞形体极化，促进细胞运动〔11〕;而在此过程中可以间接调节VEGF-C的表达，促进肿瘤中淋巴管新生。结直肠癌组织中过多的淋巴管生成后，肿瘤细胞进入淋巴道更顺畅，为淋巴道转移提供了最便捷的路径。

综上所述，结直肠腺癌中Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3具有协同作用，三者对肿瘤的进展具有促进作用，术后联合检测Tiam1、VEGF-C和VEGFR-3蛋白高表达时，提示预后不良。

1 Chen B，Ding Y，Liu F，et al.Tiam1，overexpressed in most malignancies，is a novel tumor biomarker〔J〕.Mol Med Report，2012;5(1):48-53.

2 Desouki MM，Liao S，Conroy J，et al.The genomic relationship between primary breast carcinomas and their nodal metastases〔J〕.Cancer Invest，2011;29(4):300-7.

3 张志勇，姜 丽，高艳敏，等.大肠癌中VEGF-D、VEGFR-3表达及淋巴管生成关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2006;26(7):867-9.

4 Luo F，Poulogiannis G，Ye H，et al.Synergism between K-rasVal12 and mutant Apc accelerates murine large intestinal tumourigenesis〔J〕.Oncol Rep，2011;26(1):125-33.

5 Hsueh C，Lin JD，Yang CF，et al.Prognostic significance of Tiam1 expression in papillary thyroid carcinoma〔J〕.Virchows Arch，2011;459(6):587-93.

6 Xu K，Rajagopal S，Klebba I，et al.The role of fibroblast Tiam1 in tumor cell invasion and metastasis〔J〕.Oncogene，2010;29(50):6533-42.

7 Liu L，Wang S，Zhang Q，et al.Identification of potential genes/proteins regulated by Tiam1 in colorectal cancer by microarray analysis and proteome analysis〔J〕.Cell Biol Int，2008;32(10):1215-22.

8 Chen JS，Su IJ，Leu YW，et al.Expression of T-cell lymphoma invasion and metastasis 2(TIAM2)promotes proliferation and invasion of liver cancer〔J〕.Int J Cancer，2012;130(6):1302-13.

9 Yang W，Lv S，Liu X，et al.Up-regulation of Tiam1 and Rac1 correlates with poor prognosis in hepatocellular carcinoma〔J〕.Jpn J Clin Oncol，2010;40(11):1053-9.

10 Zhong D，Li Y，Peng Q，et al.Expression of Tiam1 and VEGF-C correlates with lymphangiogenesis in human colorectal carcinoma〔J〕.Cancer Biol Ther，2009;8(8):689-95.

11 朱金明，余佩武，赵永亮.Tiam1和Rac1表达与胃癌病理生物学行为的关系〔J〕.中国普通外科杂志，2005;14(3):168-72.