藏药经典验方“玛奴西汤”颗粒免疫调节作用的实验研究

红 梅 陈秋红 王志瑾 刘有菊

1.青海省藏医药研究院，青海西宁 810003；2.青海高原医学科学研究所中心实验室，青海西宁 810012

“玛奴西汤”（缩写为MNXT）系藏药经典验方，载于藏医名著《四部医典》，至今已有一千多年的临床应用史，由藏木香、悬钩木、宽筋藤和干姜4 味药材组成，具有解表、发汗之功效。用于治疗瘟病初期、流感初期、恶寒头痛、关节酸痛、类风湿关节炎、发热等病症[1-2]。但目前临床应用的剂型仍是传统的汤散剂，存在携带不便、生物利用度差等问题，因此本项目为其确定适宜剂型，阐明其有效性及安全性，采用炭粒廓清法和2，4-二硝基氟苯（DNFB）所致的迟发性超敏反应法研究“玛奴西汤”颗粒对免疫功能的影响，为藏药“玛奴西汤”颗粒在临床中的应用提供依据。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器

秒表，粤字03000122，飞亚运集团；紫外光栅分光光度计，型号：752，上海精密科学仪器有限公司；电子天平，型号：JD1060-2，沈阳龙腾电子称量仪器有限公司。

1.2 实验试剂

玛奴西汤颗粒，规格：30 g/袋，生产批号：20111212，由青海省藏医药研究院基础研究所传统工艺室提供；醋酸泼尼松片，规格：5mg/片，生产批号：12020102，天津天药药业股份有限公司；生理盐水，生产批号：H11021313，四川科伦药业股份有限公司；羧甲基纤维素钠，生产批号：20080399，常州市武进庙桥第二化工有限公司；2，4-二硝基氟苯，生产批号：20070519，成都市科龙化工试剂厂；丙酮，生产批号：2006年4月26日，天津市化学试剂六厂；硫化钠，生产批号：060320，成都金山化学试剂有限公司生产；碳酸钠，生产批号：030211，西安化学试剂厂；印度墨汁，生产批号：NBLD2012Y0518，北京诺博莱德科技有限公司；微量采血管，生产批号：201204，姜堰市健化医疗器械有限公司；静脉血样采集容器普通管，规格：5mL，生产批号：120226，湖南省浏阳市医用仪具厂。

1.3 实验动物

昆明种小鼠，清洁级，体重18～22 g，合格证号：青医动字号20120007，购于青海省实验动物中心。

2 方法与结果

2.1 实验方法

2.1.1 炭粒廓清法[3-4]取18～22 g雄性小鼠60只，随机分为空白组、模型组、醋酸泼尼松组（10.0 mg/kg）、玛奴高剂量组（2.0 g/kg）、玛奴中剂量组（1.0 g/kg）、玛奴低剂量组（0.5g/kg），每组10只。每组小鼠每日灌胃给药1次，连续给药7 d，给药量按小鼠体重折算，空白组和模型组给予蒸馏水。末次给药前禁食16 h，每组小鼠于末次给药后1 h于尾静脉注入用1%明胶溶液稀释4 倍的印度墨汁（0.01 mL/g体重）。于注入墨汁后2 min及12 min用微量采血管从小鼠眼眶后静脉丛取血20 μL， 立即吹入装有2 mL，0.1%Na2CO3溶液的血液采集管中，并立即摇匀。以空白组血容液校零，用752 型分光光度计在680 nm处测定吸光度A。后将小鼠颈椎处死，取脾脏、 肝脏称重。 并计算廓清指数：K=（lgA1-lgA2）/（t2-t1）（A1为 2 min时血样的吸光度，A2 为12 min时血样的吸光度，t1为第1次采血时间，单位为min，t2 为第2次采血时间，单位为min）；吞噬指数：a=体重 × K1/3/（脾重+肝重）（K为廓清指数）。

2.1.2 迟发性超敏反应[4]取18～22 g小鼠60只，雌雄各半，分组与给药方法同“2.1.1”。于给药1 d后，每只小鼠用7%的硫化钠溶液涂抹腹部脱毛[5]，并在24 h后将5%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液50 μL均匀涂抹于小鼠腹部脱毛处致敏，继续给药7 d。末次给药前禁食不禁水16 h，每组小鼠于末次给药后1 h，于小鼠左耳两面均匀涂抹20 μL，1%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液进行攻击，24 h后将小鼠颈椎处死，剪下小鼠左右两耳，用直径为7 mm的打孔器于小鼠左右两耳片同部位等面积铳下耳片，用精密电子天平称重，计算小鼠肿胀度（左右耳片重量差）。

2.1.3 统计学方法 采用统计软件SPSS 12.0 对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2.2 实验结果

2.2.1 玛奴西汤颗粒对小鼠廓清指数和吞噬指数的影响 连续给药7 d后，玛奴中剂量组的廓清指数和吞噬指数显著提高，与模型组比较，差异有统计学意义 （P＜0.05 或P＜0.01）；并且高、低剂量组的吞噬指数显著提高，与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 玛奴西汤颗粒对小鼠廓清指数和吞噬指数的影响（±s，n=10）

表1 玛奴西汤颗粒对小鼠廓清指数和吞噬指数的影响（±s，n=10）

注：与模型组比较，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；“-”表示无数据

组别 剂量 K 吞噬指数（a）空白组模型组醋酸泼尼组玛奴高剂量玛奴中剂量玛奴低剂量----10.0 mg/kg 2.0 g/kg 1.0 g/kg 0.5g/kg 0.017 8±0.0152 0.016 8±0.008 8 0.022 5±0.0058 0.032 2±0.009 3*0.02 92±0.009 8 3.88±1.42 3.78±1.19 5.10±0.74*5.77±0.82**5.13±0.68*

2.2.2 玛奴西汤颗粒对小鼠迟发性超敏反应的影响 连续给药7 d后，用1%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液攻击小鼠的左耳两面，玛奴中、低剂量组的左右耳重量差明显升高，与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 玛奴西汤颗粒对小鼠迟发性过敏反应的影响（±s，n=10）

表2 玛奴西汤颗粒对小鼠迟发性过敏反应的影响（±s，n=10）

注：与模型组比较，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；“-”表示无数据

组别 剂量 耳肿胀肿胀度（mg）空白组模型组醋酸泼尼组玛奴高剂量玛奴中剂量玛奴低剂量--10.0 mg/kg 2.0 g/kg 1.0 g/kg 0.5g/kg 0.30±0.54**14.55±3.06 14.03±1.08 16.76±2.28 17.31±2.35*17.63±3.09*

3 讨论

藏药“玛奴西汤”别名四味藏木香汤散，是藏药中经典方剂之一，已有相关文献证明该方剂有增强机体特异性体液免疫功能[6]。其主要成分是由藏木香、悬钩木、宽筋藤、干姜四味药物组成，藏木香是方剂中的君药，为菊科旋覆花属植物藏木香的根[7]，含有丰富的总黄酮[8]和可溶性多糖[9]成分，而黄酮类化合物和多糖具有对机体免疫功能调节作用[10]，并且方剂中含有丰富的微量元素与之相结合致使有效成分提炼[11]，在治疗疾病时有独特的疗效[12]，这是藏药文化优势和独到之处。

本文通过小鼠炭粒廓清法和迟发性超敏反应，观察工艺优化的颗粒剂的免疫调节作用。实验结果表明，小鼠灌服“玛奴西汤”颗粒后，能显著提高小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能及2，4-二硝基氟苯丙酮溶液所致的耳肿胀度，说明“玛奴西汤”颗粒具有增强机体免疫的功能，这为临床用药提供了科学的依据。

[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·藏药[S].北京：中华人民共和国卫生部药典委员会，1995：309.

[2] 青海省卫生厅.青海省藏药标准[S].西宁：青海省卫生厅，1992：139.

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[5] 铁茹，刘利兵，李旭波，等.硫化钠脱毛剂最佳脱毛浓度的探讨[J].陕西医药杂志，2009，38（10）：1283-1288.

[6] 陈湘宏，童丽，王津慧，等.四味藏木香散剂对免疫功能低下小鼠的影响[J].时珍国医国药，2012，23（1）：99-100.

[7] 张婷，陈若芸.藏木香的化学成分研究[J].中国药学杂志，2011，46（15）：1159.

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