基质金属蛋白酶－2在结肠腺癌组织中的表达

周竞奇，李维山

(1.济源市人民医院，河南济源454650;2.漯河医学高等专科学校，河南 漯河462000)

结肠癌是人类常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率有上升的趋势，患者的预后与结肠癌细胞的浸润转移有密切关系。基质金属蛋白酶－2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)的过度表达与恶性肿瘤的转移密切相关［1］。本实验利用组织芯片技术，在一张玻片上一次性完成本研究所采集的组织标本的免疫组织化学标记，检测59例结肠腺癌组织中MMP-2的表达，探讨其在结肠腺癌组织中的表达情况及与临床病理参数之间的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选自济源市人民医院和济源市第二人民医院病理科2006年至2010年存档材料。59例结肠腺癌患者均经复查和病理确诊。患者年龄35～65岁，平均年龄45岁。其中高分化16例，中分化25例，低分化18例;并选取正常结肠组织10例作为对照。标本经体积分数10%中性甲醛固定，石蜡包埋。

1.2 主要试剂 单克隆抗体MMP-2购自福州迈新公司，S-P二步法试剂盒和DAB显色剂购自北京中杉生物公司。

1.3 组织芯片的手工制作 用手电钻在空白蜡块上构建10×9个点阵，间距2 mm。用空心针(内径1.8 mm)把目标组织穿刺取下圆柱状标本，分别种植到对应的点阵中，在38℃恒温箱中烘烤2 h，与空白蜡块融合为一体。

1.4 免疫组织化学 采用S-P二步法，严格按照免疫组织化学检测试剂盒说明书指导步骤进行染色:将构建的芯片蜡块以5 μm厚连续切片，常规脱腊至水，体积分数3%H2O215 min阻断内源性过氧化物酶活性，置入有 0.01 mol·L－1枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0)的高压锅内加热进行抗原修复(从高压锅开始慢慢喷气时，计时3 min)，迅速冷却后洗涤。滴加一抗MMP-2(1∶100)，湿盒中孵育，4℃冰箱中过夜，PBS充分洗涤，DAB显色。苏木素复染，盐酸酒精分化，脱水、透明、水溶性树脂封片，光镜下观察。

1.5 阳性结果判断标准 MMP-2阳性信号以细胞浆出现淡黄色至棕黄色为阳性。根据阳性细胞占全部肿瘤细胞或实质细胞的百分比及着色程度判断结果:无明显阳性反应细胞或阳性细胞数＜10%为阴性;有着色较强细胞或阳性细胞数＞10%为阳性［2］。采用双盲法，由2位有经验的病理医生分别对免疫组化染色结果进行评估。

1.6 统计学处理 应用SPSS 13.0进行统计分析，率的比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 MMP-2在结肠腺癌组织和正常结肠组织中的表达 MMP-2在59例结肠腺癌组织中的表达率为62.7%(37/59)，高于正常结肠组织中表达率20.0%(2/10)，差异有统计学意义 (P＜0.05)。阳性信号主要定位于细胞质。见表1，图1、2。

表1 MMP-2蛋白在不同结肠组织中的表达 例

2.2 MMP-2在结肠腺癌中的表达与临床病理参数的关系 MMP-2在结肠中的阳性率和肿瘤的大小、淋巴结转移、浸润深度以及分化程度有关(P＜0.05)，而与患者的年龄无关(P＞0.05)。见表2。

表2 MMP-2的表达与结肠癌临床病理参数的关系 例

3 讨论

近年来的研究［3］表明肿瘤细胞的浸润和转移最重要的一步就是通过基底膜和细胞外基质，而肿瘤细胞可以分泌MMP-2，最终MMP-2被激活形成Ⅳ型胶原蛋白酶，降解和破坏肿瘤细胞周围细胞外基质中的胶原蛋白及明胶，从而得以沿着破坏的基膜向周围组织浸润蔓延，浸润血管、淋巴管或者体腔后即可发生转移。Papadopoulou等［4］的研究表明 MMP-2的高表达和结肠肿瘤的大小，临床分期以及组织学分级有关，与淋巴结转移无关。但是也有研究［5］表明MMP-2的高表达与淋巴结转移有密切关系。本文结果表明，MMP-2在结肠腺癌组织中表达阳性率高于正常结肠组织，差异有统计学意义，其阳性表达率与患者组织分化程度，肿瘤大小，淋巴结转移和浸润深度均有关，差异均有统计学意义(P＜0.05)，与患者的年龄无关(P＞0.05)，这与文献［4］报道基本一致。MMP-2 表达率越高，肿瘤体积越大，分化越差，浸润越深，越容易发生淋巴结转移，说明MMP-2不仅参与结肠腺癌的浸润和转移，而且参与了结肠腺癌的发生。因此临床中检测肿瘤组织中MMP-2的表达可能会成为判断患者预后的重要指标。

［1］Arvelo F，Cotte C.Metalloproteinases in tumor progression.Review［J］.Invest Clin，2006，47(2):185 －205.

［2］郭琦，唐芙爱，李印，等.Claudin-1和VEGF-c在食管鳞癌中的表达［J］.胃肠病学和肝病学杂志，2009，18(6):515 －517.

［3］Patel BP，Shah SV，Shukla SN，et al.Clinical significance of MMP-2 and MMP-9 in patients with oral cancer［J］.Head Neck，2007，29(6):564－572.

［4］Papadopoulou S，Scorilas A，Arnogianaki N，et al.Expression of gelatinase-A(MMP-2)in human colon cancer and normal colon mucosa［J］.Tumour Biol，2001，22(6):383 －389.

［5］蔡凤林，周士福，马兆生，等.乳腺浸润性导管癌中 COX-2、MMP-2的表达及其相关性［J］.实用癌症杂志，2008，23(1):44－47.