2011年宜春市218例临床疑似重症手足口病病原学检测

2012-10-26 05:05陆红云祝晓静黄秋艳谢海珍
关键词:肠道病毒口病核酸

陆红云,祝晓静,钟 玲,黄秋艳,谢海珍,王 倩

2011年宜春市218例临床疑似重症手足口病病原学检测

*陆红云,祝晓静,钟 玲,黄秋艳,谢海珍,王 倩

(宜春市疾病预防控制中心,江西,宜春 336000)

对2011年宜春市各医院疑似重症手足口病病例样本进行实验室检测分析,从而为本地区手足口病的综合防治提供参考依据。采用real-time RT-PCR方法,对宜春市各医院采集的218份疑似重症手足口病患者的咽拭子、疱疹液、粪便、肛拭样本,进行肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16(COX16)以及肠道病毒通用型(EV)的核酸检测。218份不同类型样本中,EV71病毒114例、COX16病毒4例、EV病毒20例。阳性率分别为52.29%、1.83%、9.17%。病例人群男性高于女性(1.38:1),1~2岁年龄段病例数最多,4~6月份为本年度重症报告病例最多的月份。2011年宜春市手足口病引起重症病例的病毒株主要以EV71型为主,应特别加强对EV71引起的重症病例的监测,提前落实抢救措施,防止病情恶化导致死亡。

手足口病;肠道病毒71型;柯萨奇病毒A组16型

手足口病是由多种肠道病毒引起的常见多发性传染病,以婴幼儿发病为主。为了解本地区引起手足口病重症病例的主要致病病原体,宜春市对2011年辖区各医院报告的218例临床疑似重症手足口病样本进行了real-time RT-PCR检测。现报告如下:

1 材料与方法

1.1 材料

采集宜春市各医院临床疑似重症手足口病病例的咽拭、疱疹液、粪便、肛拭样本进行核酸检测。

1.2 实验材料

1.2.1试剂

RNA提取试剂盒(采用德国QIAGEN公司试剂),肠道病毒通用型核酸检测试剂盒(RCR-荧光探针法)、肠道病毒71型核酸检测试剂盒(RCR-荧光探针法)、柯萨奇病毒A16型核酸检测试剂盒(RCR-荧光探针法)均采用广州中山大学达安基因股份有限公司核酸检测试剂。

1.2.2实验仪器

实时荧光PCR扩增仪为Applied Biosystems 7300 Real-Time。

1.3 方法

Real-Time RT-PCR法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

1.3.1标本处理

咽拭和疱疹液直接提取核酸。粪便样本加入相应Hank’s液振荡混匀制成悬液,2000 r/min×5 min,离心吸取上清液,置-70℃备用。

1.3.2病毒RNA提取

按照Viral RNA mimi Extraction Kit 操作说明提取病毒RNA,提取RNA立即进行逆转录。

1.3.3Real-Time PCR

对肠道病毒通用型、肠道病毒71型、肠道病毒A组16型鉴别诊断。

提取的病毒RNA按照达安基因试剂公司提供的试剂盒说明配置反应体系,经45 ℃反转录25 min,94 ℃变性3 min,再按95 ℃×15 s→55 ℃×45 s,循环40次。反应体系为25 uL。荧光通道检测选用FAM通道。

1.3.4 结果判断

扩增曲线呈典型S型扩增曲线且Ct值 = 34.8判为阳性,无典型S型扩增曲线且Ct值>34.8判为阴性。

2 结果

2.1 肠道病毒核酸检测结果

对218例受检者咽拭、疱疹液、粪便、肛拭采用Real-Time PCR法检测结果显示,肠道病毒通用型(EV)阳性20例,肠道病毒71型(EV71)阳性114例,肠道病毒柯萨奇A组16型(COXA16)阳性4例,阳性率分别为9.17%(20/218)、52.29%(114/218)和1.83%(4/218)。

2.2 年龄分布

表1 不同年龄段患儿手足口病核酸检测情况

(注:EV是指除EV71和COXA16以外的肠道病毒)

218例受检者中,3岁以下年龄段患儿193例,占总患儿数的88.48%(193/218)。1~2岁年龄段的患儿较多,阳性数分别占总患儿的35.78%(78/218)和16.06%(35/218);而0~1和3~4年龄段患儿阳性数均为12例,各占5.5%(12/218)。

2.3 性别构成

表2 不同性别患儿手足口病核酸检测情况

218份病例样本中,男性为126例,阳性率为62.70%(79/126);女性为92例,阳性率为64.13%(59/92);男女比例为1.36:1。男性重症病例明显高于女性,与报道相符[1]。这可能是男孩子普遍生性好动,与外界接触较多,且卫生行为习惯较差,增加了接触感染的机会,但病原阳性检出率男女无明显差异。

2.4 区域分布

从218份病例样本的病例居住地看,城区为43例,阳性率为79.07%(34∕43);农村为175例,阳性率为59.43%(104∕175)。城区患儿比农村患儿病原阳性检出率高,其原因与城市人口密度大,儿童入园率高,儿童集居生活和密切接触以及城镇居民健康意识较强,入院就诊及时,医疗资源集中方便有关。

表3 城区与农村患儿手足口病核酸检测情况

2.5 时间分布

2011年1~2月该市报告手足口病重症病例人数较少;3月份开始逐月增多,至5~6月达到重症报告病例高峰,7月份重症报告病例急剧下降, 8月份以后重症报告病例人数逐月减少。结果见图1。

图1 重症报告病例时间分布情况

3 讨论

手足口病是由肠道病毒引起的以发热伴手、足皮肤和口腔黏膜疱疹、斑丘疹为主要症状的急性感染性疾病,是严重危害儿童健康的主要传染病之一。我国于1981年在上海首次报道该病;以后许多省份均有报道。近年来,手足口病发病率显著上升,并呈现出季节性流行和全年散发趋势。

本次218例临床疑似重症手足口病样本病原学检测结果显示:有52.29%(114∕218)的病例检出Ev71病毒阳性,这与李苑等[2]的研究结果一致,表明本市2011年手足口病引起重症病例的病毒株是Ev71型为主。与COXA16相比,感染EV71更容易出现严重并发症, 因此要特别加强对EV71引起的有中枢神经系统并发症的重症病例的监测,提前落实抢救措施, 防止病情恶化导致死亡[3]。

从218例重症患儿样本中得出,重症发病年龄集中在5岁以下。尤其是3岁以下儿童重症病例报告发病数为193例,占总病例报告数的82.61%;且EV71型阳性检出93例,分别占阳性标本总数和Ev71阳性数的67.39%(93∕138)和81.58(93∕114)。据健康人群血清流行病学研究表明, 新生儿由于携带母亲血清抗体, 约44%的新生儿具有EV71 抗体, 但出生1 个月后会迅速下降, 1~ 23 月龄的婴幼儿EV71 抗体阳性率仅为0. 8% ;从2~ 5 岁开始血清EV71 抗体阳性率以每年12%速度增高, 15 岁以上人群抗体阳性率都保持在50%以上[4]。说明手足口病的发生与免疫功能有关,3岁以下年龄段的儿童免疫力低下,5岁后免疫功能逐渐完善,6~7岁接近成人水平[5]。所以手足口病发病集中在5岁以下儿童的情况表明,其发生与儿童免疫功能有关,提示防治手足口病工作重点是幼托儿童。

手足口病传染性强,传播速度快,对5 岁以下儿童危害严重,至今尚无疫苗预防,亦无特异性治疗方法[6],在这种情况下,必须做好重点场所、重点人群、重点季节的手足口病防控工作,加强对手足口病重症病例早期临床表现的发现与识别,提高家长和医务人员的认识水平,使具有重症病例早期指征的患儿及早就诊救治,避免因延误病情演变成危重病症,甚至导致死亡[7]。

[1] 朱渭萍,诸强,王勇,等.上海市浦东新区2005-2007年手足口疫情监测分析[J].上海预防医学,2008,20(8):372-374.

[2] 李苑,詹志强,余光清,等,深圳市宝安区2006-2009年手足口病聚集性病例流行病学分析[J].热带医学杂志,2010,10(10):1234-1236.

[3] 杨洪,何雅青, 张海龙,等.2009 年深圳市手足口病病原学监测[J].中华疾病控制杂志,2011,15(12):1051-1053.

[4] Ooi E E, Phoon M C, Ishak B, et al. Seroepidemiology of humanenterovirus 71, Singapore [J] . Emerg Infect Dis, 2002, 8(9) :995-997.

[5] 胡亚美,江载芳,诸福棠,实用儿科学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2003:566-568.

[6] 王连森,毕振强,房玉英,等. 2008 年山东省手足口病流行病学分析[J]. 山东医药,2009,49(19) : 45-46.

[7] 李艳清,孙立梅,张正敏,等.256例感染其他肠道病毒的手足口病病例临床特点及就诊情况分析[J].华南预防医学,2010,36⑶:36-38.

ETIOLOGY DETECTION OF 218 CASES WITH SUSPECTED SEVERE HAND-FOOT-MOUTH DISEASE OF YICHUN CITY IN 2011

*LU Hong-yun, ZHU Xiao-jing, ZHONG Ling, HUANG Qiu-yan, XIE Hai-zhen, WANG Qian

(Yichun Centre for Disease Control and Prevention, Yichun, Jiangxi 336000, China)

: To provide reference materials about prevention and control of hand-foot-and-mouth disease in the region, suspected severe cases of hand-foot-and-mouth disease from several hospitals of Yichun in 2011 were tested.: The enter virus including EV71, COX16, and the popular type (EV) in throat swabbing, anal swabbing, secretion of herpes and sewage collected from suspected cases were detected by using real-time RT-PCR.: There are 114 cases of EV71 positive, 4 of COX16 positive, and 20 of EV positive in 218 cases. The positive percent respectively are 52.29%, 1.83% and 9.17%. The male cases are much more than female (1.38:1), the majority are aged from 1 to 2, and the month which contains serious cases is from April to June in this year.: Through the laboratory results, it could be concluded that EV71 is the main virus strain that resulted in the hand-foot-and-mouth disease in this area this year, and is the main pathogen of severe and grave cases.

hand-foot-and-mouth disease; EV71; COX16

R512.5

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2012.04.023

1674-8085(2012)04-0093-03

2012-03-10;

2012-04-26

*陆红云(1961-),女,江西宜春人,主管技师,主要从事流感病毒分离及培养(E-mail:luhy2009yc@126.com);

祝晓静(1963-),女,江西宜春人,主管技师,主要从事病毒核酸检测(E-mail:zhuxiaojing1963@163.com);

钟 玲(1964-),女,江西宜春人,主管技师,主要从事病毒核酸检测(E-mail:zhongling64@126.com);

黄秋艳(1965-),女,江西宜春人,主管技师,主要从事病毒核酸检测(E-mail:Hqy1965@gina.com.cn);

谢海珍(1976-),女,江西宜春人,主管技师,主要从事病毒核酸检测(E-mail:xiehzh76@163.com);

王 倩(1989-),女,江西宜春人,主管技师,主要从事流感病毒分离及培养(E-mail:wangqian89@126.com).

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