高效液相外标法测定长效乳酸环丙沙星注射液的效果分析

徐秀荣 陈宗静 潘琦雯 黄迪海 张从敬 刘霞 张再辉 张华 秦卓明③* （山东省健牧生物药业有限公司 济南 250100 ②济南市生物药品工程技术中心 ③山东省农业科学院家禽研究所 济南）



高效液相外标法测定长效乳酸环丙沙星注射液的效果分析

徐秀荣①②陈宗静①潘琦雯①黄迪海①②张从敬①②刘霞①②张再辉①②张华①②秦卓明①②③*（①山东省健牧生物药业有限公司 济南 250100 ②济南市生物药品工程技术中心 ③山东省农业科学院家禽研究所 济南）

本研究以Inertsil ODS-3C18为色谱柱，乙腈-0.025mol/L磷酸溶液(13:87)(用三乙胺调节pH值至3.0±0.1)为流动相，277nm为检测波长，利用峰面积，建立外标法定量检测乳酸环丙沙星的含量。结果显示：测得长效乳酸环丙沙星的线性范围为10~60μg/ml(r=0.9995)，平均回收率为99.43%，RSD为0.21%(n=9)。说明高效液相外标法操作简便、快速、重现性好、结果准确。

乳酸环丙沙星 高效液相色谱 外标法

乳酸环丙沙星是第三代喹诺酮类抗菌药物，对革兰氏阳性、革兰氏阴性菌均有良好的抗菌作用，抗菌谱广，抗菌力强，已广泛用于畜禽及小动物的各种感染性疾病的治疗。为进一步提高药用效果，结合药物缓释技术，成功研制出长效乳酸环丙沙星注射液。目的是促使乳酸环丙沙星缓慢地释放入动物体内，确保血药浓度“峰谷”在一定时期保持在有效浓度范围之内，且有效避免药物短时间内浓度过高，超过治疗血药浓度范围，产生毒副作用，进而达到毒副作用小、治疗效果好、减少用药次数，大大提高经济效益。

采用高效液相色谱法内标法测定乳酸环丙沙星注射液含量在农业部《兽药质量标准》2003年版[1]和其他文献[3]中已有明确规定，但此法在检测中需要配置对照品溶液及内标溶液，步骤繁琐，费时费工，且成本较高。本文在参照《中国药典》2005年版二部[3]及其他文献[4]的基础上，建立了一种新的高效液相色谱法外标法，只需配置对照品溶液，具有操作简便、快速、重现性好、结果准确等特点。

1 仪器和试剂

（1）P1000高效液相色谱仪，SPD-UV100紫外检测器，购自美国热电仪器集团TSP公司。BP211D十万分之一电子天平购自北京赛多利斯仪器系统有限公司。（2）环丙沙星对照品购自中国药品生物制品检定所，含量为84.9%，批号为130451-200802，装量为0.1g。缓释长效乳酸环丙沙星注射液中试产品，规格为10ml：0.4g，批号为20111101、20111102和20111103；乳酸环丙沙星注射液，规格为10ml：0.2g，批号为20111101、20111102和20111 103；上述产品均由山东省健牧生物药业有限公司生产。乙腈为色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司生产。其它试剂为分析纯，水为重蒸馏水。

2 测定条件及方法

2.1 色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-3C18柱；5μm，4.6×250mm。购自美国热电仪器集团TSP公司。流动相：0.025mol/L磷酸溶液-乙腈(87:13)(用三乙胺调节pH值至3.0±0.1)，检测波长为277nm，流速为1.0ml/min，进样量：10μl。

2.2 对照品溶液的配制 精密称取环丙沙星对照品20mg，置200ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液4.0ml，置10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算，校正因子。

2.3 供试品溶液的制备和测定 精密量取样品2.0ml(约相当于环丙沙星80mg)，置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液5.0ml，置100ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图见图1，环丙沙星保留时间是11.3min。

图1 缓释长效乳酸环丙沙星注射液的HPLC色谱图

3 结果

3.1 线性范围 精密量取对照品溶液1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml，分别置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取10μl注入液相色谱仪，记录各浓度的色谱峰面积，以环丙沙星的峰面积为纵坐标，环丙沙星浓度为横坐标，根据色谱结果，绘制标准曲线(图2)，并对峰面积进行回归，计算线性回归方程。环丙沙星浓度在10~60μg/ml呈良好的线性关系，其线性回归方程及相关系数为：y=83091.7x+34799.4，r=0.9995 (n=6)。

图2 缓释长效乳酸环丙沙星注射液的标准曲线

3.2 精密度试验 在上述色谱条件下，分别精密量取环丙沙星标准曲线中10、20、30μg/ml三种浓度的对照品溶液，依法测定峰面积，分别重复进样6次，结果证实方法精密度良好，RSD分别为0.6%，0.8%，0.9%，n=6。

3.3 稳定性试验 分别精密量取制备好的同一份供试品溶液分别在0、2、4、8和24h依法进行测定，记录峰面积，结果峰面积基本不变，RSD为0.6%，n=5。

3.4 重复性试验 按供试品溶液制备方法制备同一批号环丙沙星供试品溶液5份，依法测定，记录峰面积，结果证明重复性良好，RSD为0.9%，n=5。

3.5 回收率试验 用已知含量的原料按处方配制成样品含环丙沙星相当于标示量的80%，100%，120%，按2测定条件及方法项下的方法制备对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，以峰面积计算含量，计算得平均回收率为99.43%，RSD为0.21%，n=9。

回收率试验的结果可以看出此方法测定长效乳酸环丙沙星注射液中的环丙沙星是可行的，其所得数据是可靠的，该方法定量准确，回收率高。

3.6 样品测定 精密量取不同批次的长效乳酸环丙沙星注射液及普通乳酸环丙沙星注射液样品，按上述供试品制备方法制得供试品溶液，依法测定，计算；与农业部《兽药质量标准》2003年版中乳酸环丙沙星注射液的内标法对比，经过统计学分析，二者没有差异。详细结果见附表。

附表 样品含量测定结果(n=2) (%)

产品长效乳酸环丙沙星注射液普通乳酸环丙沙星注射液 批号201010012010100220101003201010012010100220101003 外标法99.299.599.798.699.298.3 内标法99.199.3100.198.799.198.5 相对偏差0.10.10.20.10.10.1

4 小结与讨论

（1）本文对不同批次的长效乳酸环丙沙星注射液采用高效液相色谱法外标法对环丙沙星的含量进行检测。通过对线性范围的考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验和回收率试验对测定方法经过了验证。结果表明，本方法重现性好、结果准确，符合测试要求，可用于长效乳酸环丙沙星注射液中环丙沙星的含量测定。又用普通乳酸环丙沙星注射液作了相应的对比，得出高效液相色谱法外标法同样适用于普通剂型。（2）乳酸环丙沙星注射液的含量测定在农业部《兽药质量标准》2003年版[1]及其他文献[3]中均采用高效液相色谱法内标法，此法在检测中需要配置对照品溶液及内标溶液，浪费试剂、操作繁琐。而高效液相色谱法外标法，只需配置对照品溶液，其操作简便、快速、重现性好、结果准确。（3）本文的色谱条件同样适用于长效乳酸环丙沙星注射液的有关物质的测定。

[1] 中华人民共和国农业部．兽药质量标准2003年版[S]. 2003: 75.

[2] 中华人民共和国药典2005年版二部[S]. 北京: 化学工业出版社, 2005: 附录28.

[3] 罗亚虹, 伍军, 卢丹等. 高效液相色谱法测定乳酸环丙沙星注射液的含量[J]. 中国药事, 2002, 16(2): 106-107.

[4] 钟玉莲, 杨颖, 刘丽芳等. 反相高效液相色谱法测定乳酸环丙沙星注射液的含量[J]. 中国药品标准, 2000, 1(1): 42-43.

（2012–05–18）

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1007-1733(2012)09-0014-02