毛细管区带电泳电化学检测人体尿样中的双氯灭痛、氯丙嗪

梁 鑫 付 双 张 杰▲ 刘 军 沙子键 关 宏

1.齐齐哈尔医学院药学院，黑龙江齐齐哈尔 161006；2.齐齐哈尔医学院微生态研究所，黑龙江齐齐哈尔 161006

毛细管区带电泳电化学检测人体尿样中的双氯灭痛、氯丙嗪

梁 鑫1付 双1张 杰1▲刘 军1沙子键1关 宏2

1.齐齐哈尔医学院药学院，黑龙江齐齐哈尔 161006；2.齐齐哈尔医学院微生态研究所，黑龙江齐齐哈尔 161006

目的 建立毛细管区带电泳法测定人体尿样中双氯灭痛、氯丙嗪含量的方法。 方法 采用弹性石英毛细管（31.5 cm，25 μm i.d.，360 μm o.d.），以 4.90×10-3mol/L Na2HPO4-7.80×10-3mol/L NaH2PO4（pH=7）为缓冲液，10 kV分离电压，5 kV电渗进样10 s，碳纤维电极工作电极（长200 μm，直径8 μm），检测电势0.72 V。 结果 双氯灭痛、氯丙嗪两种药物分别在 9.90×10-6～5.00×10-4mol/L（r=0.998 2）、5.0×10-7～1.0×10-4mol/L（r=0.999 8）范围内表现出良好的线性，其回收率分别为104%，96.0%。 结论 该方法简便、快速、准确，可作为人体尿样中双氯灭痛、氯丙嗪的分离检测方法。

毛细管区带电泳；电化学检测；双氯灭痛；氯丙嗪

毛细管电泳是在散热效率很高的毛细管内进行的电泳，具有“高效、低耗、快速、应用广泛”等特点，在药物的分析方面得到了广泛的应用[1-5]。氯丙嗪是一种抗精神病药，近年来，用HPLC、毛细管气相色谱法[6-9]检测氯丙嗪皆有所报道；双氯灭痛是一种抗风湿药，对该药的检测，HPLC[10-12]曾有过报道。用毛细管电泳在同一缓冲体系中电化学同时检测两种药物还未见报道。本研究建立了毛细管电泳电化学安培检测人体尿样中双氯灭痛、氯丙嗪含量的方法，为双氯灭痛、氯丙嗪体内药代动力学的研究提供了一条可行性途径。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高压电源 （山东省化工研究所与山东大学联合研制）；901-μA型微电流伏安仪（福建宁德分析仪器厂）；碳纤维（上海碳素厂）；弹性石英毛细管（河北永年光学纤维厂）。

1.2 试药

氯丙嗪（江苏常州东庆制药有限公司）；双氯灭痛（兖州制药厂）；其他试剂均为分析纯，实验用水均为亚沸蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 双氯灭痛标准溶液 准确称取0.159 0 g双氯灭痛，用水稀释至50.00 mL，配成1.00×10-2mol/L储备液。

2.1.2 氯丙嗪标准溶液 准确称取0.177 7 g盐酸氯丙嗪，用水稀释至50.00 mL，配成1.00×10-2mol/L储备液。

2.2 毛细管电泳电化学安培检测条件的选择

2.2.1 缓冲液pH的选择 试验了双氯灭痛、盐酸氯丙嗪在pH为 6.6、7.0、7.4、7.7、8.0 条件下的柱效及峰电流值：（1）双氯灭痛，n 分别为 1.63×104、1.77×104、1.80×104、1.81×104、1.64×104，iP（pA）分别为 83、108、104、99、89；（2）盐酸氯丙嗪，n 分别为6 499、6 404、6 404、6 404、6 310，iP（pA）分别为 162、174、185、181、181。因此选择pH=7.0的缓冲液。

2.2.2 缓冲液浓度的选择 缓冲液浓度以Na2HPO4（NaH2PO4∶Na2HPO4为1.6∶1.0）计，试验了双氯灭痛、盐酸氯丙嗪在Na2HPO4浓度 为 2.40×10-3、3.10×10-3、4.90×10-3、5.80×10-3、6.70×10-3mol/L 条件下的柱效及峰电流值：（1）双氯灭痛，n分别为 6.73×103、8.80×103、1.67×104、1.31×104、1.31×104，iP（pA）分别为 99、99、104、105、104；（2）盐酸氯丙嗪，n 分别为 4 740、5 140、6 404、6 404、6 400，iP（pA）分别为 177、181、185、183、185。因此选择Na2HPO4浓度为4.90×10-3mol/L的缓冲液。

2.2.3 检测电势的选择 不同检测电势（Ed）下测定的峰电流（iP）与Ed的关系曲线见图1，可以看出iP与Ed的变化趋势，综合考虑，选择0.72 V为检测电势。

图1 峰电流与检测电势的关系

2.2.4 分离电压的选择 双氯灭痛、盐酸氯丙嗪在5、8、10、15、20、25 kV等不同分离电压下的柱效及峰电流值，（1）双氯灭痛，n 分别为 2.63×104、2.27×104、2.65×104、1.62×104、1.64×104，iP（pA）分别为 112、125、105、58、48；（2）盐酸氯丙嗪，n 分别为5 074、5 926、6 377、5 928、6 508，iP（pA）分别为 520、592、637、460、421。因此选择10 kV分离电压。

2.3 方法学考察

2.3.1 重现性试验 固定上述条件对浓度为9.90×10-5mol/L的双氯灭痛、2.80×10-5mol/L的盐酸氯丙嗪连续测定6次，tm与 iP的相对标准偏差：（1）双氯灭痛为 0.80%、4.7%；（2）盐酸氯丙嗪为0.46%、4.5%。

2.3.2 线性关系 固定上述条件对不同浓度的双氯灭痛、盐酸氯丙嗪进行测定，得到（1）双氯灭痛，线性范围为9.90×10-6～5.00×10-4mol/L，相关系数为 0.998 2；（2）盐酸氯丙嗪，线性范围为 5.00×10-7～1.00×10-4mol/L，相关系数为 0.999 8。

2.3.3 检测限 固定上述条件，（1）对9.90×10-6mol/L的双氯灭痛进行检测，得出高出噪音8倍的响应值，当S/N=2时，双氯灭痛的检测限为 2.48×10-6mol/L（见图 2）；（2）对 5.0×10-7mol/L盐酸氯丙嗪进行分离检测，得出高出噪音10倍的响应值，当S/N=2时，盐酸氯丙嗪的检测限为1.0×10-7mol/L（见图2）。

图2 盐酸氯丙嗪与双氯灭痛的区带电泳图

2.4 尿样中双氯灭痛、盐酸氯丙嗪的分离检测

取人体尿液500 μL，加入双氯灭痛、盐酸氯丙嗪的标准溶液，混匀配成含双氯灭痛4.00×10-3mol/L、盐酸氯丙嗪4.00×10-4mol/L的模拟尿样。取该模拟尿样100 μL加入10 mL中性磷酸盐缓冲液中，混合均匀后进行电泳分离电化学检测，得到模拟尿样中双氯灭痛、盐酸氯丙嗪的区带电泳图（见图3）。图3中，A为尿样的区带电泳图；B为加入双氯灭痛、盐酸氯丙嗪后的模拟尿样区带电泳图，a、b为尿液中未知组分。测量峰高，用标准加入法定量得到模拟尿样中双氯灭痛、盐酸氯丙嗪的含量分别为4.00×10-3、3.98×10-4mol/L与配制的模拟尿样含量一致，回收率实验结果分别为104%、96.0%。

图3 尿样中盐酸氯丙嗪双氯灭痛的区带电泳图

3 讨论

采用pH=7的磷酸缓冲体系作为分离介质，10 kV的分离电压可以使双氯灭痛、盐酸氯丙嗪得到较高的柱效及峰电流，人体尿液中含有未知成分，但在此分离条件下未知成分与目标药物均能得到很好的分离；尿样在电泳前要进行处理，处理方法简单。

综上所述，本方法简单、快速，灵敏度较高，线性、回收率试验均符合规定，可作为人体尿样中双氯灭痛、氯丙嗪的分离检测方法。

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Determination of diclofenac sodium and chlorpromazine in human urine by capillary zone electrophoresis with electrochemical detection

LIANG Xin1FU Shuang1ZHANG Jie1▲LIU Jun1SHA Zijian1GUAN Hong2
1.College of Pharmacy,Qiqihar Medical University,Heilongjiang Province,Qiqihar 161006,China;2.Microecological Institute,Qiqihar Medical University,Heilongjiang Province,Qiqihar 161006,China

Objective To establish the methods of determination of diclofenac sodium and chlorpromazine in human urine by capillary zone electrophoresis.Methods Quartz capillary column (31.5 cm,25μm i.d.,360 μm o.d.)was adopted.The optimum conditions of separation and detection were 4.90×10-3mol/L Na2HPO4-7.80×10-3mol/L NaH2PO4(pH=7)for the buffer solution,10 kV for the separation voltage,5 kV and 10 s for the injection voltage and the injection time,0.72 V for the detection potential,respectively.Carbon fiber microelectrode(length:200 μm,diameter:8 μm).Results Diclofenac sodium and chlorpromazine had better linery relation in the range of 9.90×10-6-5.00×10-4mol/L (r=0.998 2),5.0×10-7-1.0×10-4mol/L (r=0.999 8),and the recovery was 104%,96.0%,respectively.Conclusion The method is simple,rapid,accuracy and is applied to the determination of diclofenac sodium and chlorpromazine in human urine.

Capillary zone electrophoresis;Electrochemical detection;Diclofenac sodium;Chlorpromazine

R446.12+2

A

1674-4721（2012）10（b）-0008-02

▲通讯作者：张杰，副教授，硕士；研究方向：药物分析；研究时间：2010年6～12月。

2011-12-08 本文编辑：郭静娟）