HPLC-MS/MS法测定酸枣汁中VC含量

张妍，张明春，孙连元，解军波，张彦青，*

（1.天津商业大学生物技术与食品科学学院制药工程系，天津市食品生物技术重点实验室，天津 300134；2.天津凯方食品有限公司，天津 301913）

HPLC-MS/MS法测定酸枣汁中VC含量

张妍1，张明春1，孙连元2，解军波1，张彦青1，*

（1.天津商业大学生物技术与食品科学学院制药工程系，天津市食品生物技术重点实验室，天津 300134；2.天津凯方食品有限公司，天津 301913）

建立HPLC-MS/MS法检测酸枣汁中维生素C的含量。该方法应用超声提取和AgilentG6410BTripleQuadLC/MS检测。Waters YMCTMODS-AQ S-5120A（2.0×100 mm）分析柱，流动相为甲醇－水（0.1%甲酸）＝ 50:50；流速 0.3 mL/min；柱温30℃，进样量为20 μL。以液相色谱分离、电喷雾离子化串联质谱进行检测。VC在50 ng/mL～800 ng/mL范围内线性关系良好，酸枣汁中VC平均加标回收率为98.61%。该方法快速简便、精密度好、灵敏度高，可用于酸枣汁中VC的含量测定。

HPLC-MS/MS；酸枣汁；VC

维生素C（又称抗坏血酸）广泛分布于绿色植物及水果中，能维持人体正常的新陈代谢、骨骼、肌肉和血管的正常生理功能，提高人体免疫力，是人体正常生理活动不可缺少的营养素[1-3]。缺乏维生素C时易患坏血病、牙龈出血、抵抗力下降等疾病[4]。目前食品药品中VC含量测定方法除了药典规定的碘量法，还有比色法、紫外分光光度法、荧光法等[5-6]，近年来也有文献报道用高效液相色谱仪测定VC含量的方法[7]，但HPLCMS/MS对VC的质量控制研究鲜见文献报道。本研究建立了HPLC-MS/MS方法测定酸枣汁中VC的含量。研究结果显示建立的方法快速简便、精密度好、灵敏度高，可用于该饮料中VC的含量测定。

1 仪器与试剂

Agilent 1100 Series高效液相色谱仪：Agilent,USA；G1322A 在线脱气机：Agilent,USA；G1312B 二元泵：Agilent,USA；G1316B 柱温箱：Agilent USA；G1315C DAD紫外检测器：Agilent USA；G1367D自动进样器：Agilent USA；G6410B Triple Quad LC/MS；Masshunter色谱工作站：Agilent，USA；BP211D型十万分之一电子天平：Satorius,Germany；ZH-2型涡流混合器：天津大学无线电厂；AS10200A型超声波清洗器：昆山超声仪器有限公司。

酸枣汁样品：购自天津市蓟县隆兴食品有限公司；VC（抗坏血酸）对照品：购自天津市凯通化学试剂有限公司；色谱纯甲醇与超纯水：购自J.T.Baker公司。

2 方法与结果

2.1 分析条件

2.1.1 色谱条件

色谱柱为：Waters YMCTMODS-AQ S-5120A（2.0×100 mm）；柱温为30℃；流动相为（0.1%甲酸溶液）-甲醇（50:50）；流速 0.3 mL/min；进样量为 20 μL。

2.1.2 质谱条件

离子源：电喷雾ESI源；检测方式：多反应检测（MRM）；电喷雾电压：4000 V；雾化气体：N2；雾化气压力：35 psi；干燥气体：N2；干燥气流速：8 L/min；离子源温度：350℃；碰撞气体：高纯氮气；碰撞气压力：0.15 MPa。VC质谱分析的条件参数如表1。

表1 VC质谱分析的条件参数Table 1 Parameter of mass spectra of VC

按前述色谱和质谱条件对酸枣汁样品中VC进行测定，记录色谱图。图1和图2分别为VC标准品和酸枣汁样品总离子流图及目标化合物的提取离子流图。由图1、2可知酸枣汁中VC峰型良好，方法具有较好的分离度和灵敏度，可以进行定量分析。

图1 VC对照品的HPLC-MS/MS色谱图Fig.1 HPLC-MS/MS Chromatograms of Standard solution

图2 酸枣汁样品的HPLC-MS/MS色谱图Fig.2 HPLC-MS/MS chromatograms of sample solution

2.2 对照品溶液的配制

精密称量VC标准品0.001 g，置于10 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀后即得浓度为100 μg/mL的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取酸枣汁样品1 mL，置100 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀后即得供试品溶液。

2.4 标准曲线的制备

精密量取对照品溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，配成VC对照品10 μg/mL的标准液。精密量取上述标准液 0.5、1、2、4、8 mL 置于 10 mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按前述色谱和质谱条件测定。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得标准曲线方程。VC在50 ng/mL～800 ng/mL的浓度范围内线性关系良好，标准曲线方程为Y=4.6911X+110.96，r2=0.9997。

2.5 精密度试验

按照2.3项制备方法，制备酸枣汁样品供试液，精密吸取该供试品溶液20 μL进样，连续进样5次，测定峰面积，计算得VC离子流色谱峰峰面积的RSD为2.55%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验

按照2.3项制备方法，制备酸枣汁样品供试液，精密吸取该供试品溶液 20 μL 进样，分别于 0、2、4、6、8 h进行分析，测定色谱峰面积，计算得VC提取离子流色谱峰峰面积的RSD为2.86%，表明稳定性良好。

2.7 重现性试验

按照2.3项制备方法，制备酸枣汁样品5份供试液，依法测定，结果酸枣汁含量的RSD为2.31%表明重现性良好。

2.8 加样回收率试验

精密量取酸枣汁样品1 mL，按检出量精密加入浓度为10 μg/mL的VC标准溶液1 mL，按照2.3项制备方法供试液共5份，依法测定，结果VC的平均加标回收率为98.61%。

2.9 样品测定

取3瓶酸枣汁，按照2.3项制备方法制备供试液，精密吸取该供试品溶液20 μL进样，测定峰面积。每瓶重复测定3次，按标准曲线计算并换算VC含量，结果见表2。

表2 酸枣汁中维生素C的含量（n=3）Table 2 Contents of Vitamin C in Wild Jujube Juice（n=3）

3 讨论

酸枣汁是由天然酸枣加工制成的饮料，本实验应用HPLC-MS/MS方法建立了检测酸枣汁中VC的含量测定方法。研究结果发现以甲醇-水（0.1%甲酸）50:50作为流动相，流速0.3 mL/min，得到较好的分离度，且保留时间适当。方法学考察发现本方法可以很好地测定酸枣汁中VC的含量，其含量值为23.80mg/mL，为酸枣汁的质量控制提供了一定参考。

[1]彭家泽,刁洁.抗坏血酸的生理功能及其在食品中的应用[J].食品与机械,1994(4):29-30

[2]尤宏争,赵子仪,崔培,等.维生素C对水产动物促生长和免疫增强功能的研究进展[J].河北渔业,2010(6):50-54

[3]王立家,李宽阁,刘淑兰,等.维生素C的营养功能及应用[J].畜牧兽医科技信息,2009(2):106

[4]余琼,齐卫华,于研,等.维生素C保健功能的研究[J].黑龙江医药,2008(6):24-26

[5]赵连俊,王新.水果中维生素C含量测定的研究[J].甘肃石油和化工,2008(4):47-48

[6]陈少东,陈福北,杨永铭,等.7种南方水果中维生素C的含量检测[J].化工技术与开发,2010(4):29-30

[7]徐琅,宋晓峰,钱志余.HPLC法测定野生蔬菜中维生素C的含量[J].安徽农业科学,2010,38(34):19277-19278

Determination of Vitaming C in Wild Jujube Juice by HPLC-MS/MS

ZHANG Yan1,ZHANG Ming-chun1,SUN Lian-yuan2,XIE Jun-bo1,ZHANG Yan-qing1,*
(1.Tianjin University of Commerce,School of Biotechnology and Food Science,Department of Pharmaceutical Engineering,Tianjin Key Laboratory of Food Biotechnology,Tianjin 300134,China;2.Kai Fang Tianjin Food Co.,Ltd.,Tianjin 301913,China)

This thesis developed a rapid resolution liquid chromatography tandem mass spectrometry(HPLCMS/MS)method for the determination of Vitamin C in Wild Jujube Juice.A HPLC-MS/MS method was set up using Waters YMCTM ODS-AQ S-5120A column(2.0×100 mm),methanol-0.1%formic acid(50:50)as the mobile phase with a flow rate of 0.3 mL/min.The calibration curve was linear and the average recovery was 98.61%for Vitamin C.The method was simple,rapid and accurate and could be used for the determination of Vitamin C in Wild Jujube Juice.

HPLC-MS/MS;Wild Junjube Juice;Vitamin C

张妍（1987—），女（汉），硕士研究生，从事生物活性物质分离筛选的研究工作。

*通信作者：张彦青（1974—），女（汉），副教授，博士，从事药物新剂型与药物动力学的研究工作。

2012-03-02