紫元益消丸急性毒性实验研究

赵 晶，谢艳华，贺中民，洪 流，王四旺

紫元益消丸急性毒性实验研究

赵 晶，谢艳华，贺中民，洪 流，王四旺

目的 观察紫元益消丸对昆明小鼠和SD大鼠的急性毒性反应，为新药研发以及临床用药提供剂量依据。方法 采用灌胃给药途径，测定小鼠和大鼠分别给予紫元益消丸后的半数致死量和最大耐受量，按公斤体质量计算。结果 紫元益消丸急性毒性实验显示受试药物毒性较低，实验动物全部存活故无法测出半数致死量;小鼠的最大耐受量为24.0 g/kg，大鼠的最大耐受量为16.0 g/kg;各组实验动物的体质量未见异常(P＞0.05)。结论 紫元益消丸按拟定临床剂量用药具有安全性。

紫元益消丸;急性毒性;小鼠;大鼠

紫元益消丸是依据第四军医大学西京医院消化内科洪流博士在前人经验的基础上，结合多年临床心得提出的中药复方制剂，为扶正固本、解毒消肿、化痰散结、活血化瘀的抑瘤药物。本研究旨在探讨紫元益消丸的安全性并对其急性毒性进行评价。

1 材料与方法

1.1 紫元益消丸药粉 第四军医大学药物研究所制剂室提供，批号20110510。

1.2 实验动物 二级昆明种小鼠，月龄6～8周龄，体质量18～22 g，雌雄各半;二级SD大鼠，月龄7～8周龄，体质量180～220 g，雌雄各半。所有动物由第四军医大学实验动物研究中心提供，生产合格证号为scxk(军)字第2007-007号。

1.3 方法

1.3.1 小鼠急性毒性实验 取18～22 g昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分为3个给药组(8.0 g/kg、16.0 g/kg、24.0 g/kg)和对照组(给予生理盐水)［1］。实验动物禁水12 h后灌胃给药(20 mL/kg)。给药后实验动物正常饲养，连续观察14 d，记录相关指标。①体质量:每天定时称量存活动物体质量。②毒性反应:根据《中药、天然药物毒性研究技术指导原则》，观察实验动物的行为活动、精神状态、被毛、摄食、饮水、呼吸、粪便情况及鼻、眼口腔有无异常分泌物，以及死亡等情况。观察时间为给药后0、2、4、8、12、24 h;第2～14天每日观察1次。在难以测出半数致死量(50%lethal dose，LD50)值时，另取动物20只(雌雄各半)，按24.0 g/kg剂量给予小鼠2次/d灌胃，给药间隔4 h，对照组给予生理盐水，进行最大耐受剂量(max tolerance dose，MTD)的测定［2］。

1.3.2 大鼠急性毒性实验 取180～220 g SD大鼠40只，雌雄各半，随机分为3个给药组(4.0 g/kg、8.0 g/kg、16.0 g/kg)和对照组(给予生理盐水)。实验动物禁水12 h后灌胃给药，正常饲养，连续观察14 d，记录相关指标。①体质量:每天定时对存活动物称体质量。②毒性反应:根据《中药、天然药物毒性研究技术指导原则》，观察实验动物的行为活动、精神状态、被毛、摄食、饮水、呼吸、粪便情况及鼻、眼口腔有无异常分泌物，以及死亡等情况。观察时间为给药后0、2、4、8、12、24 h;第 2 ～14 天每日观察1次。在难以测出LD50值时，另取动物20只(雌雄各半)，试药组按16.0 g/kg剂量给予大鼠，第1天给药2次，给药间隔4 h，第2～14天每日观察1次，对照组给予生理盐水，进行MTD值的测定。

1.3.3 脏器组织病理学检查 14 d后处死实验动物，解剖，肉眼观察脏器情况;死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官做病理组织学检查［3］。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件处理，计量资料以均数±标准差(¯x±s)表示，计量资料组间均数比较采用方差分析，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠急性毒性实验 灌胃给予紫元益消丸后，中、高剂量组小鼠均即刻出现短暂的静卧、呼吸频次加快等反应，5～10 min后开始逐渐活动，30 min左右主动觅食和饮水，2 h后恢复正常;第2天观察，小鼠粪便稀薄、不成形，被毛直立无光泽;第4天基本恢复正常。小鼠口鼻无异常分泌物。低剂量组小鼠仅见一过性静卧、呼吸频次加快等反应，一般10 min内恢复正常。各组小鼠连续观察14 d无死亡，实验动物给药第1、7、14天的体质量与正常对照组无统计学差异(P＜0.05，表1)。

表1 紫元益消丸小鼠急性毒性实验动物体质量变化情况(¯x±s，g)

动物观察14 d后处死，进行体内主要脏器组织病理学检查，心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胃、肠、睾丸、卵巢、脑等脏器大小、颜色、位置等均未见异常。进一步测定小鼠MTD，观察指标和时限同上，24.0 g/kg紫元益消丸给小鼠灌胃后的反应同前，无死亡。

2.2 大鼠急性毒性实验 各组大鼠灌胃给予紫元益消丸后，行为表现未见异常反应;第2天发现各剂量组大鼠出现轻度粪便稀薄、黑色，但在第3天恢复。各组动物连续观察14 d未见异常和死亡，各组实验动物给药第1、7、14天的体质量与正常对照组无统计学差异(P＞0.05，表2)。14 d后处死动物，进行体内主要脏器组织病理学检查，心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胃、肠、睾丸、卵巢、脑等脏器大小、颜色、位置等均未见异常。进一步测定MTD，即给大鼠灌胃16.0 g/kg，观察14 d，结果未见动物死亡。

表2 紫元益消丸大鼠急性毒性实验动物体质量变化情况(¯x±s，g)

3 讨论

紫元益消丸由紫河车、红花、蟾酥、山慈菇等8味中药组成，按照扶正固本、消肿散结的中医治疗原则:以紫河车扶正固本为君药，有温肾阴补精元、益气生血等功效;蟾酥、蜈蚣解毒抗癌共为臣药;山慈菇、制半夏化痰散结，红花活血化瘀，玄明粉消肿、化瘀共为佐药;鸡内金消食和胃为使药。全方共奏扶正固本，解毒消肿，化痰散结，活血化瘀之功。

紫元益消丸作为临床经验方，成人(按60 kg体质量计算)日用剂量为0.05 g/kg。本试验给予小鼠日累积剂量为临床成人拟推荐日用剂量的480倍，给予大鼠日累积剂量为临床成人拟推荐日用剂量的320倍，实验结果中未见昆明小鼠和SD大鼠死亡，表明紫气益消丸按拟定临床推荐剂量用药具有安全性。但紫元益消丸灌胃后，中、高剂量组小鼠即刻出现一过性静卧、呼吸频次加快等反应;给药次日可见小鼠、大鼠粪便稀薄。提示紫元益消丸超剂量使用存在诱发不良反应的风险，尤其是中枢神经、呼吸功能及胃肠道刺激等不良反应不容忽视。超剂量所致不良反应的机制，大鼠灌胃给药后一过性静卧、呼吸频次加快等反应不明显的原因，尚需在后续的大鼠长期毒性实验研究中证实。

本方剂的前期临床应用中曾发现个别患者出现轻度胃肠道反应，如恶心、呕吐、纳差等不适，提示在后续长期毒性实验等药理毒理学研究中应给予重点关注，并确定有效剂量与不良反应剂量的阈值，以指导本制剂临床用药的有效性和安全性［4-5］。

［1］SFDA．中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则［M］．2 版．北京:人民卫生出版社，2005:2-4．

［2］陈奇．中药药理研究方法学［M］．北京:人民卫生出版社，1993:112．

［3］李中炼，周明，刘昌英，等．“百消散”毒理学实验观察［J］．江西中医学院学报，2009，21(6):60-63．

［4］安宾，陈常春，李治建．阿里红提取物急性毒性实验研究［J］．中国中医药科技，2011，18(6):502-503．

［5］阿不都热依木·玉苏甫，古孜力努尔·依马木，麦合素木·艾克木，等．异黑成熟颗粒的急性毒性和长期毒性实验研究［J］．新疆医科大学学报，2011，34(12):1320-1325．

The experimental study on acute toxicity of ziyuanyixiao pill

ZHAO Jing1，XIE Yan-hua1，HE Zhong-min1，HONG Liu2，WANG Si-wang1
(1.Department of Natural Medicines School of Medicine，Fourth Military Medical University，Xi’an 710032，China;2.Department of Gastroenterology，Xijing Hospital，Fourth Military Medical University，Xi’an 710032，China)

ObjectiveTo study the acute toxicity in mice and rats to evaluate the clinical safety of medication and provide dose basis for development of new drug．MethodsMice and rats were given intragastric administration by the differente dose of the tested drug，the experimental data were calculated LD50 and MTD with the Bliss method，with the continuous administration and observation for 14 days．ResultsThe mice and rats were all survived and LD50 was not measured．The largest amount of drug for mice was 480 times of clinical dose administration，for rats it was 320 times of clinical dose administration．In addition，no histopathological lesions were observed in the animals．ConclusionAcute toxicity in this experiment condition suggested the tested drug have a good clinical safety．

Ziyuanyixiao wan;Acute toxicity;Mice;Rat

R285.5－332

A

2095-3097(2012)01-0006-02

10.3969/j.issn.2095-3097.2012.01.002

710032陕西西安，第四军医大学药学院天然药物学教研室(赵 晶，谢艳华，贺中民，王四旺)，西京医院消化内科(洪 流)

王四旺，E-mail:wangsiw@fmmu.edu.cn

2012-05-31 本文编辑:冯 博)