长白山野生藜芦提取液对水稻稻瘟病抑菌效应的研究*

杨丽娟，顾地周，王晓伟，郭志欣，栾志慧，冯 颖

(通化师范学院 生命科学学院，吉林 通化 134002)

藜芦(VeratrumnigrumL)为百合科(Lihaceae)藜芦属(evartmuLin)植物，又名黑藜芦，山葱.藜芦是一种有毒植物，也是一种药用植物，有祛痰催吐，杀虫的功效，合理利用藜芦的毒性，又有很多益处[1].水稻稻瘟病是水稻生产上的重要病害之一，是一种世界性稻作病害， 全球每年因稻瘟病造成的水稻产量损失达11%～30%，我国稻瘟病的年发生面积均在380万 hm2以上，所造成的稻谷损失达数亿公斤，给粮食安全带来隐患.因此，以高效、低毒、低残留的环境友好型生物农药逐渐替代传统的高毒化学农药是农药发展的必然趋势,而且从植物中寻找杀菌、抑菌、杀虫活性物质是当今开发研制无公害新型药剂的热点之一[2-3].

本文以分布于长白山的藜芦为材料，用不同溶剂进行了梯度提取，并用提取物做了对水稻稻瘟病菌的生物活性测定，为今后在农业生产的实际应用提供了理论基础.

1 材料与方法

1.1 材料

藜芦采于哈泥河自然保护区并经鉴定，培养基为PDA培养基，水稻稻瘟病菌由吉林农业大学友情提供.

1.2 方法

(1)藜芦提取液的制备[4].将采集的藜芦自然晾干或烘干后用粉碎机制成粉末，各取50g.分别用70%乙醇、60%丙酮、沸水，用索氏提取器提取8h，再浓缩到50ml，即为藜芦提取液的母液.提取液经0.22μm滤膜除菌,4℃冰箱贮存备用.

(2)无菌操作[5-6].无菌条件下,将灭菌培养皿分成9组，每组18个，将灭菌的培养基倒入培养皿中约1/3量，冷却，制成固体培养基．将灭菌试管分成9组，每组6支，每组试管分别加入相应提取液.各组试管提取液浓度依次为无菌水，6.25%，12.5%，25%，50%，100%不同方法提取的藜芦根、茎、叶提取液.每皿加入1ml提取液，每个浓度重复3次，涂布，用打孔器取菌块0.5cm，放入培养皿中间，然后在25oC培养箱中进行培养.

(3)供试植物提取液离体抗菌活性的测定．以菌丝生长速度法[7]测定提取液对病菌菌落生长的抑制作用，于培养48h ,72h, 96h测定菌落直径，根据公式抑菌率=(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径×100%计算抑菌效果.

2 结果

2.1 不同溶剂提取物的抑菌效果

表1～3说明用3种不同提取方法制备的藜芦提取液，对水稻稻瘟病菌均有明显的抑菌作用，抑菌作用与提取液浓度呈正相关．但抑菌效果有一定的差异．3种不同的提取溶剂的提取物中，70%乙醇提取物具有最强的抑菌作用．其次是60%丙酮提取物，沸水提取物抑菌效果较差．

2.2 植物不同部位提取物的抑菌效果

为了确定藜芦的不同药用部位的抑菌效果，以70%的乙醇提取藜芦的根、茎、叶的活性成分进行抑菌实验(表4)．结果说明,对供试菌的抑制作用最强的为叶，茎次之，根最弱．由于70%乙醇叶提取液的抑菌效果最好，故用此来确定最低抑菌浓度，最低抑菌浓度(MIC)为0.50g/mL[8].

表1 藜芦叶提取液的抑菌效果

表2 藜芦茎提取液的抑菌效果

表3 藜芦根提取液的抑菌效果

表4 70%乙醇提取液的抑菌效果

3 讨论

实验结果表明藜芦各部位的沸水提取液、乙醇提取液、丙酮提取液对水稻稻瘟病菌均存在不同程度的抑菌效果，说明藜芦是一种具有一定抑菌作用的植物.根据不同提取溶剂和不同提取部位抑菌效果比较，藜芦的药用成分提取最好使用藜芦叶70%乙醇提取液.比较藜芦对水稻稻瘟病菌的抑菌效果,发现藜芦叶提取物对水稻稻瘟病菌的抑菌效果好于茎、根提取物.目前对中草药提取物抑菌效果的检测一般采用试管法或滤纸片法,但中草药提取的药液一般为颜色较深的制剂,用试管法常常会因为制剂颜色深而导致观察不准确,用滤纸片法则会因为中草药扩散慢、抑菌弱,较难得到准确的抑菌浓度[9-10].本实验将药液涂于平板后，将菌块置于培养皿中央培养，通过测量菌块直径的生长研究藜芦的抑菌效果,避免了试管法或滤纸片法的不足,具有稳定可靠且定量性好的优点,比较适合用于有色中草药制剂抑菌浓度的测定.由于本实验采用此法判断抑菌效果且以无菌落生长为最低抑菌浓度，故所测定的数据实际上是最低杀菌浓度.其结果为水稻稻瘟病菌的抑制提供了科学依据.

参考文献：

[1]刘新波,孔令武.藜芦的开发与利用[J].中国林副特产,1997,2(41):57.

[2]周其书,但守军.山区水稻稻瘟病的发生与防治[J].现代农业科技,2010(16):179-181.

[3]曲庆华,马学礼,刘春晖,等.水稻稻瘟病发病因素与防治对策现代化农业[J].现代化农业,2010(5):29-30.

[4]金忠民,沙 伟,胡修茵,等.蓝萼香茶菜提取液抑菌作用研究[J].广西科学,2007,14(2):160-162.

[5]林清洪,章宁,刘福平,等.银杏外种皮提取液对几种蔬菜和花卉病原菌的抑制效应研究[J].福建农业学报, 2005(20):87-89.

[6]陈笑笑,于海宁,应优敏,等.仙鹤草内生真菌的分离鉴定与抗菌活性[J].浙江工业大学学报,2011(2):39-43.

[7]黄彰欣.植物化学实验保护指导[M].北京:农业出版社,2000.

[8]王兴华.多种药用植物抑菌效果研究[J].山西大学学报(自然科学版),2005,28(3):322-324.

[9]伍贤进,毛倩,刘胜贵,等.翻白草提取物的抑菌作用研究[J].辽宁中医杂志,2007,34(9):1295-1296.

[10]王锦文,边才苗.五味子提取物的抑菌和杀菌活性研究[J].安徽农业科学,2008,36(16):6799-6800.