健脾消积颗粒对脾虚大鼠MTL、GAS影响的实验研究

李 红，葛金文，蒋孟良，谢小全

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙410208；2.长沙九芝堂股份有限公司，湖南 长沙410007）

目前，由于生活水平不断提高，营养过剩，加之工作繁忙、缺少锻炼，导致脾胃功能虚弱，消化不良，食欲不振，脘腹饱胀等病症的人越来越多[1]。健脾消积颗粒由补气健脾的四君子汤[2-3]——人参、白术、茯苓、甘草，消食化积的三仙[4-5]——山楂、麦芽、神曲及行气导滞的陈皮等药组成。具有健脾和胃、消食化积的功能，对脾胃虚弱之不思饮食、纳差、消化不良、食欲不振、脘腹饱胀、大便溏泻、肠鸣腹痛、神疲乏力，身体羸瘦等症状具有良好效果。为探讨其健脾消积的作用机制，对其进行了脾虚大鼠胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）影响的实验研究，现将方法与结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材 健脾消积颗粒：湖南中医药大学第一附属医院自制，批号：20100312。取其适量加纯净水配成含生药39.6%、79.2%和158.4%的药液供动物灌胃使用。健脾消食丸：北京同仁堂科技发展股份有限公司同仁堂制药厂，批号：20090906。剂量1次6 g，1日2次。试验时，取健脾消食丸适量，用粉粹机粉粹成细粉，加纯净水配成44%混悬液，供大鼠灌胃使用。

1.1.2 试剂 GAS试剂盒：北京福瑞生物工程公司，批号20100802；MTL放免药盒：北京东雅生物技术研究所，批号20101106；乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na、AR）：中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号2010910；羟甲基纤维素钠：上海化学试剂公司分装厂，批号20110210；抑肽酶：兰州大绿利生物化学制药有限公司，批号20100408。

1.1.3 仪器 GC1500型γ-放射免疫计数器：安徽中科中佳科学仪器有限公司；MP51001型电子称：上海横平科学仪器有限公司；GL-20M高速冷冻离心机：赛特湘仪离心机仪器有限公司；RE-52C型旋转蒸发器：巩义市英峪予华仪器厂；TW-1A型旋片式真空泵：温岭市挺威真空设备有限公司；SK3300A型粉碎机：上海科导超声仪器有限公司。

1.1.4 动物 SPF级SD大鼠，♀♂各半，体质量180～220 g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号：SCXKA(沪)2008-0016。实验动物饲养在湖南中医药大学SPF级实验动物中心，空调恒温，定时换气，饲料、饮水、笼具、垫料符合SPF级实验动物饲养要求。

1.2 方法

1.2.1 生大黄的制备 称取生大黄200 g加6倍量的水浸泡1 h，煎煮30 min，滤过，药渣再加5倍量的水煎煮25 min，滤过，合并2次滤液，置水浴上浓缩至100 mL，得1 mL含2 g生药（1∶2）的药液，供大鼠灌胃造模用。

1.2.2 动物分组 取健康SD大鼠60只，先按♀♂分层，再按体质量从轻到重排序，按随机区组分组法分为6组，分别为（1）组：正常组，（2）组：模型组，（3）～（6）组：健脾消积颗粒高、中、低剂量组（以下分别称健脾消积低、健脾消积中、健脾消积高组）、健脾消食丸组。大鼠均为10只/组。

1.2.3 剂量的确定 按60 kg成人体表面积计算出大鼠等效剂量，再按1∶2递增为中剂量组与大剂量组[6]，分别为3.96、7.92、15.84 g/kg；健脾消食丸组按中剂量给药，为4.4 g/kg。

1.2.4 造模及给药方法 除正常组灌胃纯净水外，其余各组灌胃200%的生大黄药液4 mL/（d·只），连续14 d[7]。造模成功后，按照“1.2.3”中所确定剂量，从第15天起空白与模型组继续灌服（ig）蒸馏水，给药组分别灌39.6%、79.2%、158.4%的健脾消积药液，健脾消食丸组灌44%的健脾消食丸药液，灌胃容积均为1 mL/100 g体质量，连续14 d。于末次灌胃后1 h摘取眼球取血2 mL，置于一干燥试管中，4℃离心15 min（3 500 r/min）；另取2 mL血，于加有10%乙二胺四乙酸二钠和抑肽酶各30μL的试管内，充分混匀，4℃离心10 min（3 500 r/min），将血清和血浆放入-20℃冰箱内保存，备测。

1.3 观察指标

1.3.1 一般指标的观察 在实验中观察各组动物的毛色、活动情况、粪便等指标。

1.3.2 MTL值测定 于洗净的微孔酶标板设标准孔与样品孔，于标准孔加入640、320、160、80、40、20 pg/mL MTL标准品50μL，样品孔加入样本稀释液40μL，再加血浆10μL，随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60 min。弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次，每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15 min，每孔加入终止液50μL，15 min内，以空白空调零，在酶标仪450 nm波长处测定各孔的OD值。以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

1.3.3 GAS值测定 于洗净的微孔酶标板设标准孔与 样品 孔，于标 准 孔加入80、40、20、10、5 ng/mL GAS标准品50μL，样品孔加入样本稀释液40μL，再加血清10μL，用封板膜封板后置37℃温育30 min。将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复5次，拍干。每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外，同上温育，同上洗涤，每孔先加入显色剂A 50μL，再加入显色剂B 50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 min，每孔加终止液50μL，同上测定、计算各样品的实际浓度。注意：加10μL血浆、血清时尽量将样品加于酶标板孔底部，不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 对一般指标的影响

模型组大鼠毛色变黄、枯燥、无光泽，给药组毛色几乎恢复正常，说明脾虚对动物皮毛色泽有影响，健脾消积颗粒对脾虚大鼠的皮毛色泽有恢复作用。另脾虚小鼠排便次数、稀便数、稀便率、粪粒大小显著增加，给药后均有所降低，说明健脾消积颗粒对脾虚小鼠胃肠排泄有调节作用。

2.2 健脾消积颗粒对血浆MTL、GAS的影响

造模后脾虚大鼠MTL水平显著降低，模型组与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；健脾消积高剂量组与模型组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01），健脾消积低、中剂量组、健脾消食丸组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

健脾消积颗粒对大鼠血清GAS的影响，造模后脾虚大鼠血清GAS水平显著降低；模型组与正常组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）。健脾消积高组与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），健脾消积颗粒低、中剂量组、健脾消食丸组与模型组比较（P＜0.05），从数据来看高剂量组基本恢复至正常。结果见表1。

表1 健脾消积颗粒对脾虚大鼠MTL、GAS的影响（±s，n＝10）

表1 健脾消积颗粒对脾虚大鼠MTL、GAS的影响（±s，n＝10）

注：与正常组比较**P＜0.01；与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01。

组 别正常组模型组健脾消积低健脾消积中健脾消积高健脾消食丸剂量（g/kg）纯净水纯净水3.96 7.92 15.84 4.4 MTL（pg/mL）206.42±22.84 167.25±18.13**178.57±23.45 181.52±11.39△194.28±10.09△△181.17±9.24△GAS（pg/mL）52.01±3.07 44.06±3.13**49.46±3.42△49.72±4.66△50.63±2.89△△48.75±2.67△

3 讨论

中医认为：脾主运化，运化水谷精微，胃主受纳、腐朽。脾胃虚弱导致不思饮食、脘腹饱胀、泄泻、肠鸣腹痛、形体消瘦、少气懒言、四肢无力。健脾消积颗粒，是临床治疗脾胃虚弱症的经验方。该方由人参、白术、茯苓、山楂、麦芽、神曲、陈皮、甘草八味中药组成，方中人参补脾益肺、益气生津为君；白术补脾益气与被称为消食化积佳品的“三仙（山楂、麦芽、神曲）”配伍，是为臣药；茯苓利水渗湿，健脾止泻；陈皮理气健脾，降逆止呕，辅佐人参白术补脾之功与三仙受纳、腐熟之能；甘草补中益气、调和诸药为使药。纵观全方补脾药和健胃药相互配伍，补而不滞，攻而不过，双管齐下，相得益彰，共奏健脾和胃、消食化积之功效。

从中医理论来看，影响脾的运化升清功能，饮食消化吸收功能不良，气血生化乏源，气不足则气推动乏力，故见各种胃肠运动减慢[8]。而MTL可明显促进胃运动和胃电活动，且作用持久；GAS也有明显的促进胃排空的作用[9]。本实验表明：健脾消积颗粒可使降低的MTL、GAS基本恢复至正常水平，证明健脾消积颗粒通过调节MTL、GAS水平从而使脾虚动物紊乱的胃肠运动得以恢复，而且，健脾消积颗粒的疗效明显优于阳性对照药——健脾消食丸，且剂量与效应呈现正相关关系。

[1]李勇敏，彭淑珍，王福云，等.健脾消积液对胃肠功能的影响[J].中国中医药信息杂志，2000，7（2）：21-22.

[2]封吉化，尚虎虎，任 平，等.四君子汤对脾虚证大鼠胃肠电活动的影响[J].武警医学院学报，2010，19（1）：8-9.

[3]张挪威，张 荣，赵 宏，等.四君子汤提取工艺优化研究[J].中国兽药研究，2011，54（6）：1-4.

[4]王 颖，李 毅，陈 勇，等.“三仙”的不同炮制品对大鼠胃液、胃酸、胃蛋白酶分泌的影响[J].四川中医，2011，29（12）：41-43.

[5]王 辉，范冬霞，付志荣.对“三仙”炒焦增效问题的商榷[J].时珍国医国药，2006，17(9)：1 732-1 732.

[6]鲁 璨，颜 斌，鲁耀邦.补肾化瘀方对多囊卵巢大鼠血脂水平的影响[J].湖南中医药大学学报，2011，31（11）：12-15.

[7]屈克义，程昌明，韩江南，等.隔山消对脾虚泄泻大鼠血中胃肠激素的影响[J].中华现代中西医杂志，2003，1（11）：963-964.

[8]胡学军，黄穗平，邓时贵，等.健脾理气方对功能性消化不良大鼠胃肠运动功能及胃动素、胃泌素的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（8）：214-217.

[9]Yang M，Fang D C，Li QW，et al.Effects of gastric motilin[J].Word J Gastroenterol，2004，10(3)：419-423.