益智仁提取物对小鼠生精能力的影响实验研究

范 欣，贾 燕，孙欣慧，何立东，尤思淼，杨晓晨，夏焱慧，王丽娜，刘 微(吉林医药学院:.护理学院，2.药理学教研室，吉林 吉林 3203)

随着社会工业的不断发展，不育夫妇的总发病率明显升高。2004年欧洲生殖协会统计:育龄夫妇一年内不能怀孕者占25%，其中15%寻求治疗，男方因素引起不育占50%［1］。目前有相当一部分男性不育症的病因不明确，治疗上以经验治疗为主，疗效不确定，治疗机制也多不明了。

祖国传统医学在治疗男性不育方面具有较好经验，部分具有生精壮阳功效的中药或组方药在男性不育治疗上具有疗效稳定、毒副作用小的特点，并取得了较好的效果。研制和开发中药有效成分，治疗男性不育有良好的应用价值。

益智为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实，主要产于我国的海南和广东，为四大南药之一。其功效为温脾止泻、摄唾涎、暖肾、固精缩尿，主治脾寒泄泻、腹中冷痛、口多涎唾、肾虚遗尿、小便频数、遗精白浊［2］，而且也是重要的调节生精功能的组方药。本实验研究益智仁提取物对环磷酰胺诱导的生精障碍小鼠的治疗作用，为益智仁提取物防治生殖障碍的应用提供实验基础和理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及药品

SPF级健康Balb/c雄性小鼠50只，体重(20±2)g［吉林大学实验动物中心，合格证号SCXK-(吉)2008-4005］。环境温度(22±2)℃。

益智仁(购自吉林大药房);注射用环磷酰胺(批号11061921，购自江苏恒瑞医药股份有限公司);其他试剂均为国产分析纯。

1.2 益智仁提取液的制备

称取益智仁200 g，研磨成粉，放在烧杯里用蒸馏水浸泡30 min，然后按益智仁∶蒸馏水=1∶8煮沸30 min，用纱布过滤出液体到烧杯中。再按比例益智仁∶蒸馏水=1∶4煮沸30 min，得到第二次过滤出的液体，把两次得到的液体混合，最后把其蒸发浓缩到200 mL，配制成浓度分别为0.8 g/kg、0.4 g/kg、0.2g/kg的混悬液，供灌胃使用。

1.3 生精障碍模型的制备与分组

将实验用Balb/c小鼠适应性喂养后，随即分为5组即对照组、模型组、益智仁提取液高剂量组、益智仁提取液中剂量组、益智仁提取液低剂量组，每组10只。除对照组外，其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺75 mg/(kg·d)，连续5 d，制备生精障碍模型。模型制备后，益智仁提取液高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予益智仁提取液0.8 g/kg、0.4 g/kg、0.2 g/kg灌胃，对照组和模型组给予等体积生理盐水，每天1次，共计30 d。

1.4 精子密度、活率及畸形率测定

将盛有10 mL精子营养液［3］的试管置于恒温水浴箱中预热至37℃，取单侧附睾去除结缔组织和脂肪，眼科剪剪碎组织并放入试管中，37℃静止10 min，待精子充分游离后，取1滴滴于血细胞计数板上，计算精子密度(D)、精子活率(A)、精子畸形率(T)。

1.5 睾丸组织形态学检测

取大鼠睾丸石蜡切片，HE染色，光镜观察睾丸组织内精原细胞与各级生精细胞的分布情况。

1.6 统计学处理

所有数据采用SPSS15.0统计学软件进行统计分析。计量资料以±S表示，组间比较采用one-way ANOVA分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 益智仁提取液对精子密度、活率及畸形率的影响

模型组小鼠精子密度、精子活率显著低于对照组(P＜0.01)，精子畸形率显著高于对照组(P＜0.01)。益智仁提取液各剂量组与模型组相比均显著提高精子密度(P＜0.01)。益智仁提取液低剂量组与模型组相比，精子活率有提高(P＜0.05)。益智仁提取液中、高剂量组与模型组相比，精子活率显著提高(P＜0.01)。益智仁提取液低剂量组与模型组相比精子畸形率降低(P＜0.05)，益智仁提取液中、高剂量组与模型组相比精子畸形率显著降低(P＜0.01)。结果见表1。

表1 益智仁提取液对精子密度、活率及畸形率的影响(±S，n=10)

表1 益智仁提取液对精子密度、活率及畸形率的影响(±S，n=10)

与模型组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

组 别 精子密度(106/mL)精子活率(%)精子畸形率(%)对照组 78+16＊＊ 84+5＊＊ 4.3+1.2＊＊模型组 26+5 32+7 13.4+1.2低剂量组 39+5＊＊ 38+12* 10.6+2.3*中剂量组 48+10＊＊ 54+9＊＊ 7.7+1.5＊＊高剂量组 56+14＊＊ 66+16＊＊ 5.2+2.4＊＊

2.2 益智仁提取液对小鼠睾丸形态结构的影响

HE染色结果发现:造模后，模型组与对照组相比，小鼠睾丸生精上皮细胞萎缩、退化，上皮层数变少，生精管腔中精子数目明显减少。治疗后，益智仁提取液各剂量组生精上皮数目均明显增多，上皮层数也明显增加，其中中剂量组与高剂量组对生精上皮改善更为明显，基本恢复到正常组织结构。结果见图1。

图1 益智仁提取液对生殖损伤小鼠睾丸组织形态学影响(HE×200)

3 讨论

环磷酰胺是一种烷化剂类药物，是常用的抗肿瘤药物和免疫抑制剂，对男性生殖系统的损伤和对后代的潜在致畸危险已经引起医患双方的高度关注。临床研究显示，儿童期因白血病、肿瘤、自身免疫性疾病接受环磷酰胺治疗的男性患儿，成年后80.2%～92.6%为无精症或少精症［4-6］，目前已广泛采用环磷酰胺制备生精障碍模型。

益智仁是治疗弱精症、少精症的传统组方药，研究表明益智仁富含锌、硒、锰等多种微量元素及维生素E、C等，可改善睾丸生精功能及精子运动功能［7］。目前有关其生殖治疗和保护方面缺乏系统的研究。本研究通过水提法，研究益智仁水提物对环磷酰胺所致生精障碍小鼠的治疗作用，结果发现:益智仁提取液各剂量组显著提高精子密度。与模型组相比，益智仁提取液低剂量组精子活率有提高。益智仁提取液中、高剂量组与模型组相比，精子活率显著提高。益智仁提取液低剂量组与模型组相比精子畸形率降低，益智仁提取液中、高剂量组与模型组相比精子畸形率显著降低。形态学结果显示:益智仁提取液能够改善生精上皮，促进其上皮再生，增加上皮层数，尤其益智仁提取液中、高剂量组生精上皮结构基本恢复到原来状态，证实益智仁提取液具有良好的生精障碍治疗作用。本研究为益智仁在生精障碍方面的应用，提供了有益的参考，有关益智仁提取物改善和促进生精功能的机制问题，需要进一步的研究。

［1］ European Association of Urology.Urological Guidelines［R］.Guidelines on Male Infertility，2004.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部［S］.2005年版.北京:化学工业出版社，2005:204.

［3］ 范荣军，任 涛，刘成柏，等.五味子多糖提取工艺的比较研究［J］.中成药，2008，30(6):827-831.

［4］ van den Berg H，Furstner F，van den Bos C，et al.Decreasing the number of MOPP courses reduces gonadal damage in survivors of childhood Hodgkin disease［J］.Pediatr Blood Cancer，2004，42(3):210-215.

［5］ Kenney L B，Laufer M R，Grant F D，et al.High risk of infertility and long term gonadal damage in males treated with high dose cyclophosphamide for sarcoma during childhood［J］.Cancer，2001，91(3):613-621.

［6］ Gatta G，Capocaccia R，Coleman M P，et al.Childhood cancer survival in Europe and the United States［J］.Cancer，2002，95(8):1767-1772.

［7］ 王本祥.现代中药药理学［M］.天津:天津科学技术出版社，1999.