藏药前列宁胶囊中总黄酮成分提取工艺研究

马宏伟 李怀平

山东阿如拉药物研究开发有限公司，山东 济南 250101

前列宁胶囊为金诃藏药股份有限公司独家产品，由菥蓂子、葡桃、大托叶云实、豆蔻等13味药材组成。主要功能清热解毒，化瘀通淋，用于热毒瘀阻所引起的尿频、尿急、尿痛属中医淋证者［1］，疗效显著。但前列宁胶囊现有工艺为全药粉入药，患者服药量大，为此，对前列宁胶囊进行了提取工艺研究。本文采用正交试验法，以总黄酮含量为评价指标，考察了前列宁胶囊的乙醇提取工艺［2］，为产品的工艺优化奠定了基础。

1 仪器与试药

前列宁处方药材均由金诃藏药股份有限公司提供，经青海省藏医院尼玛鉴定，均为正品;芦丁对照品 (中国药品生物制品鉴定所，100080－200707，供UV法测定，含量为92．5%);UV－2450型紫外可见分光光度计 (SHIMADZU);RE－52型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂);KQ5200B型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 前列宁胶囊醇提液中总黄酮的含量测定［3］

2.1.1 测定波长的选择 精密量取对照品溶液1ml，置25ml量瓶中，加水至6.0ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置5分钟，加10%硝酸铅溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，采用相应的试剂为空白，采用岛津UV－2450型紫外可见分光光度计在200～700nm范围内扫描，结果显示在500nm有最大吸收。

2.1.2 标准曲线的建立 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置5分钟，加10%硝酸铅溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外－可见分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录ⅤA)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果见表1。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0104X+0.0002，r=0.9998，线性范围为 7.50656～37.53280μg/mL，标准曲线见图1。

表1 总黄酮标准曲线测定结果

2.1.3 样品溶液的测定 精密量取供试品溶液3ml，置25ml量瓶中，自“各加水至6.0ml……”起，按2.1.1方法依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量 (μg)，计算，即得。

2.2 正交试验 影响乙醇提取的影响因素有提取时间、提取次数、加液量、乙醇浓度，对这4个因素各选三个水平，进行正交试验，以提取液中的总黄酮量为考察指标，正交试验设计及结果见表2，方差分析结果见表3。

表2 正交试验设计及结果

由正交试验结果和方差分析结果可知，以总黄酮的量为考察指标，提取次数有显著性影响，各影响因素的主次顺序为B＞A＞C＞D，最佳提取工艺为A1B3C2D3。但总黄酮的量提取2次时为提取3次的93.68%;加液为8倍量时为加液10倍量时的96.51%。综合各种因素考虑，优选提取工艺为A1B2C2D2，即加50%乙醇提取2次，每次加液8倍量，提取2小时。

表3 总黄酮测定方差分析表

3 讨论

3.1 本试验仅对前列宁胶囊处方中的醇溶性有效成分进行了初步考察，因各种药材没有明确的有效成分做考察指标，故选择总黄酮作为提取工艺的考察指标。

3.2 乙醇浓度对提取效率有所影响，当乙醇浓度较低时，会有较多的水溶性杂质提出，过高时，不仅影响提取效果，而且还存在大生产时的安全隐患，浓度为50%的乙醇提取比较合适。

本试验优选的提取工艺稳定、可行，适合工业化生产。

［1］国家食品药品监督管理局．国家药品标准颁布件．批件号:(2011)国药标字ZD－0153号．

［2］赵英日，王淑美，崔红花，等．盘龙参中总黄酮提取工艺研究［J］．中国民族民间医药，2011，(14):46－48．

［3］国家药典委员会．中华人民共和国药典2010年版 (一部)［S］．北京:中国医药科技出版社，2010:333．