温补肾阳方对心肌梗死后心力衰竭大鼠血流动力学及血清肌钙蛋白I和脑钠肽含量的影响*

刘 茜，周 华，戎靖枫，苑春元，史文静，黄牧华，王 佩，封 舟，瞿惠燕，王肖龙，郭 蔚，薛金贵

（上海中医药大学附属曙光医院心内科，上海 201203）

心力衰竭（CHF）是由心脏结构性或功能性疾病所导致的一种临床综合征，目前中国内地成年人CHF的患病率已达0.9%，35～74岁人中约有患者400万，并呈逐年上升趋势。CHF伴随的心脏收缩舒张功能障碍常导致血流动力学改变；体液因子的改变促使脑钠肽（BNP）水平升高；心肌损害引起血清心肌肌钙蛋白I（TNI）含量增多。研究[1-3]表明，CHF是一种症状性疾病，表现为血流动力学障碍；CHF时存在TNI水平升高，TNI与心力衰竭存在一定关联，并可作为诊断CHF新的、有效的手段之一；BNP的增高程度与CHF的严重程度呈正相关，可作为评定CHF进程和预后的指标。根据临床经验显示，温补肾阳方可明显改善CHF患者的心脏功能。本实验中，笔者通过观察温补肾阳方高、中、低各剂量组对CHF大鼠血流动力学、TNI及BNP的影响，研究其对CHF大鼠的作用机制，为中医药防治CHF提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠60只，购自上海中医药大学实验动物中心。

1.1.2 药品和仪器 药品：鹿角片、仙灵脾、生黄芪、党参，按 12∶15∶30∶30 组方，将 13.05 kg 生药水煎两次，每次1 h，再加10倍量水混匀，药液过100目不锈钢筛，90℃浓缩为净质量8.1 kg、密度为1.226浸膏。以上中药浸膏均由上海中医药大学附属曙光医院制剂室提供。曲美他嗪（片剂），过100目筛后置于双蒸水，制成1 g/L浓度的曲美他嗪混悬液，由施维雅制药有限公司提供，批准文号：国药准字H20055465。大鼠TNI检测试剂盒（南京建成科技有限公司），产品批号：DGE20812。大鼠BNP检测试剂盒（南京建成科技有限公司），产品批号：DGE20812。电子天平 (METTLER TOLEDO公司)；匀浆机（IKA公司）；PowerLab 8/30生物信号处理和分析系统（ADINSTRUMENTS公司）；Agilent 1200 Series HPLC（Agilent公司）；IKA-werkeTyp VX2E震荡器（IKA公司）；Direct-Q3纯水系统（Millipore公司）。

1.2 方法

1.2.1 心肌梗死后CHF模型的建立 根据参考文献[4-5]略作修改，采取结扎大鼠冠状动脉前降支制备CHF大鼠模型。将雄性清洁级SD大鼠术前禁食禁水12 h，置于浸有乙醚棉球的密闭容器内麻醉，仰卧位固定，暴露胸部皮肤，常规消毒后于心间搏动最强处稍上（第4、5肋间隙）依次剪破皮肤、胸膜，钝性分离胸肌（术中若大鼠因乙醚挥发而清醒，立即予吸入少量乙醚），暴露心脏，剪开心包，双手挤压胸部，使心脏自行跳出胸腔外，迅速于左冠状动脉前降支起始点下方约2 mm处进行结扎，结扎完成后使心脏回复至胸腔，层层缝合。术后心电图（纸速50 mm/秒）以标准导联Ⅱ中ST段弓背抬高作为急性心肌梗死形成的标准。假手术组不结扎冠脉，余操作同前。各组大鼠于造模成功2周后留取静脉血，并行灌胃，10周后再次留取静脉血，同时监测大鼠血流动力学，并开胸留取心肌组织于-80℃冰箱储存备用。

1.2.2 实验分组及给药方法 动物喂养标准合成饲料，实验前适应性饲养7 d。造模成功后采用随机数字表法随机分组如下：1）模型组。2）假手术组。3）曲美他嗪组。4）温补肾阳组：低剂量组、中剂量组、高剂量组。每组大鼠各10只（体质量250～300 g）。模型组、假手术组：蒸馏水1.0 mL/（kg·d）灌胃。曲美他嗪组：曲美他嗪混悬液1.0 mg/（kg·d）灌胃。温补肾阳组：高剂量：17.4 g/（kg·d），中剂量：8.7 g/（kg·d），低剂量：4.4 g/（kg·d）。

1.2.3 血流动力学测定 大鼠8周给药后，禁食禁水24 h，称取大鼠体质量后予肝素钠1200 U/kg抗凝30 min，以25%乌拉坦2.0 g/kg麻醉，固定后分离右侧颈总动脉，并插入链接压力换能器的PE250型聚乙烯心导管，稳定5 min后将导管轻轻送入左心室，经PowerLab8/30型生物信号处理和分析系统记录大鼠左室舒张压（LVEDP），左室收缩压（LVSP），左室内压最大上升下降速率（±LVdp/dtmax）等数据。

1.2.4 血清TNI指标测定 分别选用大鼠造模成功后第2周和第10周的静脉血2.5 mL，于室温血液自然凝固10～20 min后2500 r/min离心20 min，收集血清。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠TNI浓度。

1.2.5 血清BNP水平测定 分别取大鼠造模后2周和10周的静脉血2 mL，4℃2500 r/min离心10 min，留取血清。应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清BNP水平。

1.2.6 统计学处理 采用SPSS19.0分析软件，平均值用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

治疗前模型组、假手术组、曲美他嗪组以及补肾方低、中、高剂量组各10只。假手术组于造模后7 d死亡1只；曲美他嗪组于2周后死亡1只，补肾方中、高剂量各死亡1只，故进入后续实验的大鼠为56只。

2.1 温补肾阳方对CHF血流动力学的影响 与模型组相比，假手术组、曲美他嗪组和温补肾阳中、高剂量组大鼠 LVSP、+LVdp/dtmax升高，LVEDP、-LVdp/dtmax降低（P＜0.01），说明曲美他嗪和温补肾阳中、高剂量能显著改善左心收缩和舒张功能；与假手术组相比，曲美他嗪组及温补肾阳低、中剂量组大鼠 LVSP、+LVdp/dtmax降低（P＜0.05 或 P＜0.01），LVEDP、-LVdp/dtmax升高（P＜0.01）；与曲美他嗪组比较，温补肾阳高剂量组LVSP升高（P<0.01），温补肾阳低剂量组+LVdp/dtmax降低、LVEDP和-LVdp/dtmax升高（P<0.01）；与温补肾阳高剂量组相比，温补肾阳低、中剂量组大鼠LVSP、+LVdp/dtmax降低，LVEDP、-LVdp/dtmax升高（P＜0.05 或 P＜0.01），表明高剂量组改善心肌收缩和舒张功能要优于中、低剂量组。见表1。

2.2 温补肾阳方对CHF大鼠血清TNI的影响 治疗前，假手术组大鼠TNI指标明显低于各组（P＜0.01），说明造模后大鼠心肌明显受损。治疗8周后，模型组大鼠TNI指标较治疗前降低，但仍明显高于各药物治疗组（P＜0.01）。与模型组相比，各治疗组大鼠TNI明显下降（P＜0.01），表明曲美他嗪和温补肾阳方均可明显改善心肌受损。与假手术组比较，曲美他嗪及温补肾阳各剂量组大鼠TNI升高（P＜0.01）。与曲美他嗪组相比，温补肾阳低、中剂量组TNI升高（P＜0.01）。与温补肾阳高剂量组相比，温补肾阳中、低剂量组大鼠TNI均增高（P＜0.01），表明高剂量组降低TNI水平要优于中、低剂量组。见表2。

表1 各组大鼠治疗后血流动力学变化（±s）Tab.1The changes in hemodynamics of rats in each group after treatment（±s）

表1 各组大鼠治疗后血流动力学变化（±s）Tab.1The changes in hemodynamics of rats in each group after treatment（±s）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与假手术组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与曲美他嗪组比较，▲▲P＜0.01；与温补肾阳高剂量组比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01。

组别LVSP（mmHg）LVEDP（mmHg）+LVdp/dtmax（mmHg/s）-LVdp/dtmax（mmHg/s）模型组 161.10±20.51 7.58±0.64△△ 14254.71±1214.55 -9347.36± 844.15假手术组 235.14±35.24** 2.42±0.42** 23373.19±4984.02** -16492.09±2658.70**曲美他嗪组 212.43±26.41**△ 3.04±0.44**△△ 20851.33±4012.32** -14803.20±2116.27**温补肾阳低剂量组 182.85±18.83*△△▲▲☆☆ 4.21±0.41**△△▲▲☆☆ 16014.59±4256.99△△▲▲☆☆ -10687.54±3077.90△△▲▲☆☆温补肾阳中剂量组 204.43±24.98**△△☆☆ 3.90±0.50**△△▲▲☆☆ 18529.71±1849.98**△△☆ -12696.61±2102.07**△△☆温补肾阳高剂量组 252.62±24.11**▲▲ 2.92±0.33*△ 21370.29±3141.85** -15158.72±3768.66**

表2 治疗前后各组大鼠TNI的变化（±s）Tab.2 The changes in TNI of rats in each group before and after treatment（±s） μg/L

表2 治疗前后各组大鼠TNI的变化（±s）Tab.2 The changes in TNI of rats in each group before and after treatment（±s） μg/L

注：与模型组比较，**P＜0.01；与假手术组比较，△△P＜0.01；与曲美他嗪组比较，▲▲P＜0.01；与温补肾阳高剂量组比较，##P＜0.01。

TNI治疗前 治疗后模型组 1253.91±30.33△△ 960.22±13.71假手术组 538.82±29.60 299.14±52.81**曲美他嗪组 1240.96±27.66△△ 326.15± 4.00**△△温补肾阳低剂量组 1244.45±31.29△△ 382.80± 4.72**△△▲▲##温补肾阳中剂量组 1243.37±27.72△△ 364.10± 2.38**△△▲▲##温补肾阳高剂量组 1241.12±30.42△△ 323.46± 4.43**△△组别

2.3 温补肾阳对CHF大鼠BNP的影响 治疗前，冠脉结扎后大鼠BNP水平明显高于假手术组，提示大鼠造模2周后心功能明显下降。治疗后，与模型组比较，各治疗组大鼠BNP显著下降（P＜0.01），表明曲美他嗪和温补肾阳方均可明显改善CHF大鼠的心功能。与假手术组比较，曲美他嗪及温补肾阳低、中剂量组大鼠BNP升高（P＜0.01）。与曲美他嗪组相比，温补肾阳低剂量组BNP升高（P＜0.01）。与温补肾阳高剂量组相比，温补肾阳中、低剂量组大鼠BNP均增高（P<0.05或P<0.01），表明高剂量组降低BNP水平要优于中、低剂量组。见表3。

3 讨论

CHF涉及到中医的心痹、心悸、饮证、喘证、水肿等病证范畴。有临床及实验研究已证实[6-7]在治疗CHF上应强调心肾相交，心本乎肾，以温肾求强心。所谓“治心之所以治肾，而治肾之所以治心”。心之阳气全赖肾阳的资助。肾阳虚可波及于心，引起心阳虚。本病为本虚标示，而本虚以气虚、阳虚为主。病位虽主要在心，但与肾的关系尤为密切[8]。本方（鹿角片、淫羊藿、党参、黄芪）来源于周华教授临床治疗慢性CHF经验方益气温阳方[9-10]，通过温补肾阳，温肾益气使心阳得到温煦。本方中含有鹿角片，《本草纲目》曰：鹿角，热用益肾补虚，强精活血。具有补肾壮阳之功。《吉林中草药》：鹿角有“补脑、强心”等作用。现代药理研究显示，淫羊藿能降低外周阻力，增加冠状动脉流量，增强心肌收缩力，保护缺血心肌的损害[11]。本方中另含两味补气药以补益心气达到改善心功能的目的。有报告认为，黄芪有明显的强心作用；党参能显著增加心输出量，改善心功能。

表3 治疗前后各组大鼠BNP的变化（±s）Tab.3 The changes in BNP of rats in each group before and after treatment（±s） μg/L

表3 治疗前后各组大鼠BNP的变化（±s）Tab.3 The changes in BNP of rats in each group before and after treatment（±s） μg/L

注：与模型组比较，**P＜0.01；与假手术组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与曲美他嗪组比较，▲▲P＜0.01；与温补肾阳高剂量组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

BNP治疗前 治疗后模型组 506.13±3.62△△ 457.17±19.05假手术组 105.23±3.32 77.29± 1.08**曲美他嗪组 506.72±1.79△△ 84.42± 5.61**△温补肾阳低剂量组 506.83±2.93△△ 96.25± 2.48**△△▲▲##温补肾阳中剂量组 507.71±2.23△△ 90.58± 1.62**△△#温补肾阳高剂量组 506.49±0.91△△ 81.78±5.61**组别

血流动力学障碍是CHF的基本表现。LVSP在一定程度上可以反映心肌收缩力，LVEDP可间接反映左心室功能，LVdp/dtmax是评价心肌收缩性能和舒张功能的指标之一[12]，血液流动性与心脏功能关系密切[13]，本实验发现，曲美他嗪组与温补肾阳中、高剂量组能使LVES和+LVdp/dtmax明显升高，并使LVEDP和-LVdp/dtmax降低，其中温补肾阳高剂量组明显好于中剂量组。综合分析可知，温补肾阳方（尤其是高剂量组）和曲美他嗪均可改善心脏收缩和舒张功能，对改善CHF的发生发展有着重要的意义。TNI是肌原纤维ATP酶的抑制性亚单位，可松弛心肌，是心肌特有的抗原。目前认为肌钙蛋白可作为心肌损伤的指标。有研究[14]显示，TNI升高预示着心肌重构和心功能降低，监测CHF患者血清TNI浓度并采取相应的措施降低其水平，对临床治疗和预防CHF进展具有重要意义。本实验中，温补肾阳各剂量组（尤其是高剂量组）与曲美他嗪组均能显著降低TNI水平。由此可见，温补肾阳方可明显改善心肌损伤。BNP主要储存于心室肌内，能扩张血管、增加排钠，对抗肾上腺素和RAS的水钠潴留。CHF时，心室分泌BNP参与体液调节，具有很好的神经调节作用[15]，是评价心功能紊乱最敏感和特异性最高的指标之一，可用于CHF的诊断和治疗[16]。本实验，灌胃治疗8周后，温补肾阳方各剂量组（尤其是高剂量组）及曲美他嗪组均能明显降低CHF大鼠的BNP水平。通过此研究可以得出以下结论：温补肾阳方在改善CHF心肌收缩舒张功能、受损以及心脏功能等方面有一定的疗效，尤其是温补肾阳方高剂量组。因此，温补肾阳方在CHF的进展过程中可能起到一定的防治作用，其前景广阔。

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