南安市部分规模化养鸡场鸡新城疫血清学调查与分析

黄文生 洪小珠 陈泽金 黄延招 傅霞珠 黄瑞芬 陈美足

（福建省南安市动物疫病预防控制中心 福建南安 362300）

鸡新城疫（ND）又称亚洲鸡瘟，俗称鸡瘟。是鸡的一种烈性病毒性传染病，被国际兽医局列为对动物危害最大的A 类传染病。患鸡常呈急性败血症状。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、黏膜和浆膜出血。死亡率高，对养鸡业为害严重。1926年首先发现于印度尼西亚，不久又在英国新城发现，世界各国均有流行记载。有强毒株和弱毒株两类。病毒分为低毒力型（即缓发型）、中等毒力型（即中发型）、强毒力型（即速发型）3 型。多数高强度毒力株常属嗜内脏型新城疫病毒。鸡科动物都可感染该病，家鸡最易感，雏鸡比成年鸡易感性更高。

2012年10月至2013年5月，自南安市码头、梅山、洪濑、康美、柳城、丰州、霞美、官桥等8个镇的规模养鸡场采集了1 390 份鸡血清样品，应用酶联免疫吸附试验进行血清学检测，目的是掌握南安市养鸡专业户鸡新城疫血清学流行情况，以便更好地防控鸡新城疫，为养鸡专业户提供科学的预防途径。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清 随机选择辖区内已免疫和未免疫鸡新城疫疫苗规模化养鸡场的鸡，局部消毒处理后，用一次性5 mL 采血器翅静脉采血，室温静置1～2 h，3 000 r/min 离心15 min，分离血清，备用。

1.1.2 诊断试剂 广州市健仑生物科技有限公司生产的鸡新城疫抗体检测试剂盒。试剂盒中包括预包被板48T/96T、酶结合物（1 号液）、浓缩洗涤液（2 号液）、底物（3 号液）、显色剂（4 号液）、样本稀释液（5 号液）、终止液（6 号液）、阳性对照品、阴性对照品、不干胶膜等。

1.2 试验方法与步骤

1.2.1 试验方法 酶联免疫吸附测定法。

1.2.2 操作步骤

1）洗涤液配制。用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2 号液）按1：10 稀释，如取50 mL 浓缩液与450 mL 蒸馏水或去离子水充分混匀，即为工作洗涤液。

2）样本稀释。用样本稀释液（5 号液）将待检血清样本按1：100 稀释，如取5 uL 样本与495 uL 样本稀释液，混匀。阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。

3）加样反应。每次试验设阴性对照2 孔、阳性及空白对照各1 孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100 uL）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100 uL。37 ℃避光反应30 min 后，甩去孔内液体，每孔注满工作洗涤液洗涤3 次，每次均需停留1 min后再甩净，拍干。

4）加酶反应。除空白对照孔外，每孔加酶结合物（1 号液）1 滴。37 ℃避光反应30 min 后，甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

5）显色反应。加底物液（3 号液）和显色剂（4 号液）各1 滴，混匀，37 ℃避光显色10 min。加终止液（6 号液）1 滴，终止反应（加终止液后，蓝色会变为黄色）并判读结果。

1.2.3 结果判定 阴性对照呈无色或浅黄色，阳性对照呈明显黄色，表示试验有效。以空白对照调零，用酶标仪于450 nm（630 nm 作参比波长）读取吸光度（A 值）。待检孔A 值大于阴性对照A 值平均值的2.1倍者判为阳性。如阴性对照A 值的平均值低于0.08 时按0.08 计算。

结果判定：样品OD630值大于0.42，判为阳性；样品OD630值在0.38～0.42，判为可疑；样品OD630值小于0.38，判为阴性。

2 结 果

采用酶联免疫吸附试验的方法，对南安市的码头、梅山、洪濑、康美、柳城、丰州、霞美、官桥等8个乡镇49个存栏3 000 羽以上规模养鸡场采集分离到的1 390 份鸡血清样品进行鸡新城疫抗体检测。

2.1 免疫鸡群抗体情况 采集免疫鸡新城疫疫苗鸡群血清样品共810 份，进行抗体检测分析，结果见表1。码头、梅山、洪濑、康美、柳城、丰州、霞美、官桥鸡的新城疫血清抗体阳性率分别为86.67%、91.67%、93.33%、90.67%、93.33%、90.00%、86.67%和93.33%。在检测的27个养鸡场810 份血清样品中，平均阳性率为91.23%。其中，洪濑、柳城、官桥镇所检鸡场血清抗体阳性率最高，均为93.33%。

表1 免疫鸡群抗体检测结果

2.2 未免疫鸡群抗体情况 采集未免疫鸡新城疫疫苗鸡群血清样品总共580 份，进行抗体检测分析，结果见表2。在所检的22个养鸡场580 份血清样品中，其中码头、梅山、洪濑、康美、柳城、丰州、霞美和官桥鸡血清抗体阳性率分别为15.00%、14.67%、8.00%、6.67%、10.00%、15.00%、10.00%和2.5%，而码头、丰州地区出现抗体阳性最高，官桥抗体阳性最低。在检测的22个养鸡场中，鸡新城疫血清抗体阳性率平均为8.45%。

表2 未免疫鸡群抗体检测结果

2.3 免疫不同疫苗后鸡群血清抗体的分布情况

1）在二倍量饮水免疫鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（La Sota 株+H120 株）及注射鸡新城疫灭活疫苗的鸡群中，挑选5个养鸡场，采集血清样品180 份进行抗体检测，结果见表3。在采集的5个养鸡场的30 份、60 份、30 份、30 份、30 份血清中，血清抗体阳性数分别为28、57、30、30和29，血清抗体阳性率分别为93.33%、95.00%、100.00%、100.00%和96.67%，抗体滴度很高，免疫力坚强，能够有效阻止病毒对鸡群的攻击。

表3 免疫二联活疫苗及灭活疫苗后鸡群抗体检测结果

2）从二倍量饮水免疫鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（La Sota 株+H120 株）的规模化养鸡场中随机抽选5个场的120 份血清样品，抗体检测结果见表4。5个养鸡场的120 份血清样品中，阳性95 份，平均阳性率79.17%。5个养鸡场的血清抗体阳性率分别为80.00%、75.00%、85.00%、80.00%和70.00%，说明二倍量饮水免疫鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（La Sota 株+H120 株）也能产生有效免疫。

表4 免疫二联活疫苗后抗体检测结果

3 分析与讨论

1）从血清学调查结果分析得出，该病血清学阳性鸡在南安市部分养鸡场中小范围存在。在检测未免疫鸡群的580 份血清样品中，阳性血清为49 份，平均阳性率为8.45%。这也意味着养鸡场潜在暴发新城疫的风险，在生产过程中随时有可能引起较大的经济损失。在27个免疫过鸡新城疫疫苗的养鸡场的810 份血清样品中，平均抗体阳性率为91.23%，说明免疫接种是防止该病发生的一种经济又简便的有效手段，是预防和控制该病的根本措施。

2）免疫鸡新城疫疫苗后，平均抗体阳性率在91.23%以上，能够对鸡群产生较好的保护。二倍量饮水免疫鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（La Sota 株+H120 株）及注射鸡新城疫灭活疫苗对鸡群可产生坚强的免疫力，平均抗体阳性率为96.67%。二倍量饮水免疫鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（La Sota 株+H120 株）的平均抗体阳性率为79.19%，其原因有待进一步研究。

3）由表2 可以看出，养鸡相对集中的地区，养殖设施简单，肉鸡交易、从业人员流动频繁的地区，暴发流行该病的机会大，如码头、梅山、丰州地区，暴发的机会较大，官桥地区则相对较低。

4）调查发现，大部分养鸡场户主还是很清楚疫苗免疫接种是预防和控制该病的主要措施，并且也会按免疫程序进行疫苗免疫。但有个别养殖户存在侥幸心理，不按免疫程序、免疫剂量的要求去实施。

5）笔者认为今后应加强对养鸡场的技术培训，规范免疫程序，积极推广应用活疫苗+灭活苗的免疫程序和相应配套的血清学鉴别诊断方法，以对鸡新城疫进行控制。养殖户一定要注意，单纯靠疫苗免疫接种是不能控制和消灭任何一种传染病的，应该采取综合防治措施。加强饲养管理，注意控制鸡舍内的温度、湿度、光照，保持空气新鲜。在天气突然变化时，饮水中应添加一些抗应激药物，如维生素C、维生素E、电解多维等。提高饲料营养水平：可在饲料中添加2%大豆磷脂，并加大多维的使用量，提高饲料营养水平。

6）目前南安市的养鸡从业人员文化素质相对较低，在养殖过程中缺乏专业的兽医进行指导，主要靠经验养殖，所以，在疫病防控方面是非常欠缺科学知识。为此，不仅要加强对该病的防控，还要尽早建立一整套培训养鸡业从业人员的课程，有效地预防和控制该病，为南安市鸡新城疫防控提供科学依据和方法。