气相色谱法测定广藿香油中百秋李醇含量

陈桂琴，罗香，李桂生，黄优生，陈瑛

（江西省分析测试研究所，南昌 330029）

广霍香油是从广霍香嫩叶中通过分子蒸馏法而得［1］，是一种应用广泛的天然香料。在工业生产中，广霍香油定香性能优越，是一种常用的定香剂；在医药方面，广藿香油有明显的止咳、化痰、抗炎、镇痛作用［2–3］；在食品加工行业广霍香油为允许使用的食用香料［4］，主要用于可乐型饮料等。百秋李醇作为广藿香挥发油的主要成分，是历版《中华人民共和国药典》规定的用于评价广藿香油质量的指标成分［5］。目前对广藿香油中百秋李醇的测定主要采用气相色谱法，定量方法有内标法［6］与外标法［7］，但哪种定量方法更准确、更精密未见报道。笔者对两种定量方法在广霍香油中百秋李醇含量的测定中的差异进行比较。而以往的检测中，检测时间较长，笔者通过对色谱柱的选择以及柱温程序升温过程的优化，有效缩短检测时间，为广藿香油中百秋李醇的测定提供了一种简单、快速、准确的测定方法。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：GC–2010型，日本岛津公司；

电子分析天平：Mettler Toledo Al204型，瑞士梅特勒–托利多公司；

广霍香油：江西吉水县金海天然香料科技有限公司；

百秋李醇对照品：30 mg/支，中国药品生物制品检定所；

正十八烷内标物：色谱纯；

内标溶液的配制：准确称取正十八烷2.500 0 g，用正己烷溶解并定容至100 mL，得25.0 mg/mL正十八烷内标溶液；

对照品溶液的配制：准确称取百秋李醇对照品250 mg置于10 mL容量瓶中，用正己烷定容，摇匀，配制成25.0 mg/mL百秋李醇标准工作液。取此使用液1 mL置于25 mL容量瓶中，再加入1 mL正十八烷内标溶液，用正己烷定容，摇匀，配制成百秋李醇标准溶液。该标准溶液中百秋李醇含量为 1.0 mg/mL，内标为 1.0 mg/mL，取 1 μL 进样；

供试品溶液的配制：精密称取广霍香油0.1 g，正己烷溶解，再加入1 mL正十八烷内标溶液，定容至25 mL，摇匀，待测；

实验所用其它试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件

色 谱 柱：DB–5MS（30 m×0.32 mm，0.25 μm，美国安捷伦公司）；进样口温度：250℃；程序升温：柱温起始温度150℃，并保持8 min，然后以5℃/min的速率升温至180℃，保持2 min；氢火焰离子化检测器（FID）温度：250℃；分流比：30∶1；空气流量：400 mL/min；载气压力：100 kPa；线速度：44.6 cm/s；氢气流量：40 mL/min；进样量：1 μL。

2 结果与讨论

2.1 色谱柱的选择

取同一供试品溶液，分别使用DB–5MS（30 m×0.32 mm，0.25μm）、DB–1（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、DB–1701（30 m×0.32 mm，0.25 μm）、DB–WAX（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色谱柱进行测定，结果显示，采用DB–5MS测得的峰形对称度以及样品分离度优于其它色谱柱，故本方法选择DB–5MS色谱柱。

2.2 色谱条件的优化

为了保证样品气化完全，分析时间短，分离度高，且与内标正十八烷的分离度大于2.0，经过多次实验，最终确定进样口温度为250℃；程序升温，起始温度150℃，保持8 min，然后以5℃/min的速率升温至180℃后，保持2 min；氢火焰离子化检测器（FID）温度250℃；分流比30∶1。在选定的该实验最优条件下，样品色谱图如图1所示。

图1 样品的色谱图

2.3 内标法与外标法定量结果比较

取不同批次的广藿香油共3个批次，在1.2色谱条件下，分别用内标法与外标法检测，结果见表1。

表1 内标法与外标法测定结果的比较 %

由表1可见，内标法和外标法测得的3个含量的相对标准偏差均小于5%，虽然两种定量方法均可满足检测工作的需要，但从测定精度来考虑，内标法测定结果的相对标准偏差明显小于外标法的相对标准偏差，表明内标法在精密度方面优于外标法，故本实验选择内标法。

2.4 工作曲线与检出限

精密移取25.0 mg/mL百秋李醇标准工作液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0 mL 置 于 25 mL 容 量瓶中，分别加入1.0 mL正十八烷内标液，用正己烷稀释定容，摇匀，在1.2色谱条件下进样分析。以百秋李醇与内标物的峰面积比（x）对百秋李醇浓度（y）回归，得到回归方程y=0.014 576+0.865 76x，线性相关系数r=0.999 7，线性范围为0.2～2.0 mg/mL。以3倍基线噪音计算检出限，计算得方法的检出限为 1 μg/mL。

2.5 稳定性试验

取同一份供试品溶液，每隔1 h进样1次，在10 h内记录峰面积，峰面积测定结果的相对标准偏差为2.01%（n=6），表明在10 h内被测溶液是基本稳定的。

2.6 精密度试验

取同一批号的广藿香油6份，按供试品溶液的配制方法制得6份溶液，按1.2色谱条件测定，结果见表2。由表2可知，相对标准偏差为1.22%（n=6），表明该方法精密度良好。

表2 精密度试验结果 %

2.7 加标回收试验

精密称取同一批号广藿香油0.1 g共6份，用正己烷溶解，分别加百秋李醇 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5 mg，再加入1 mL正十八烷内标溶液，摇匀，并定容至25 mL，按1.2色谱条件进样测定，结果见表3。由表3可知，该方法测定结果准确可靠，可用于测定广藿香油中百秋李醇含量。

表3 加标回收率试验结果

3 结论

采用毛细管色谱柱气相色谱法测定广藿香油中百秋李醇，实验结果表明，内标法定量比外标法具有更好的精密度和准确度。该法简便快速，测定结果准确，重现性高，为广藿香油质检工作提供了更为准确、快速的方法。

［1］陈慧，张金巍，朱合伟，等.分子蒸馏法纯化广藿香挥发油中广藿香醇［J］.中草药 .2009，40(1): 60–63.

［2］赵书策，贾强，廖富林，等.广藿香提取物的止咳、化痰、平喘药理研究［J］.中成药，2008，30(3): 449–450.

［3］赵书策，贾强，廖富林.广藿香提取物的抗炎、镇痛药理研究［J］.中成药，2007，29(2): 285–487.

［4］GB 2760–2011 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准［S］.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京: 化学工业出版社，2005: 272.

［6］刘青，江波，于宗渊.气相色谱法测定广藿香挥发油中广藿香醇的含量［J］.山东医药，2007，47 (2): 3.

［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典: 一部［M］.北京: 化学工业出版社，2010: 373.