不同提取工艺对复方中东莨菪碱含量的影响＊

霍务贞，吴燕红，李苑新，袁旭江，朱盛山

(广东药学院中药开发研究所·国家中医药管理局三级实验室，广东 广州 510006)

喘平复方制剂是广东药学院中药开发研究所自主研发的新 药，主治支气管哮喘、喘息性支气管炎[1]。方中洋金花收载于2010年版《中国药典(一部)》，具有平喘止咳、解痉定痛的功效[2]。本研究的复方中洋金花用量比例虽小，但为了更好地控制复方制剂中东莨菪碱的含量，现从工艺条件开始监控东莨菪碱的转移率，考察不同提取工艺对复方中微量组分东莨菪碱的影响，以评价其最佳提取工艺，为该药的安全有效使用提供参考。

1 仪器与试药

Agilent1100型高效液相色谱仪系列，包括G1312A二元泵、G1329A自动进样器、G1315B－DAD检测器(美国安捷伦);BP211D型电子分析天平(Sartorius，瑞士);EPED－10TJ型实验室纯水器(南京易普易达科技发展有限公司);KQ－500M型超声清洗器(东莞科桥超声波设备有限公司)。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯;氢溴酸东莨菪碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100049－200308)。相关药材均采购自广州采芝林药业有限公司采购部，经广东药学院朱盛山教授鉴定为药典规定药材，其中洋金花药材为茄科植物白曼陀罗的干燥花。

2 方法与结果

2.1 东莨菪碱含量测定

2.1.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:Agilent TC －C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相:以0.07 mol/L磷酸钠(含0.017 5 mol/L十二烷基硫酸钠，用磷酸调 pH至6.0)－乙腈(50∶100)，检测波长:216 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:5 μL。在此色谱条件下，分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪。色谱图中，供试品与氢溴酸东莨菪碱对照品相同的保留时间有一对应色谱峰，以氢溴酸东莨菪碱计算，理论板数在3 000以上。

2.1.2 溶液制备

取氢溴酸东莨菪碱对照品适量，精密称定，加乙腈配制成每1 mL分别含0.1 mg的对照品溶液。取复方浸膏0.1 g，加入2 mol/L盐酸溶液5 mL，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)30 min，放冷，滤过，滤渣和滤器用2 mol/L盐酸溶液10 mL分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨水调pH至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次10 mL，合并三氯甲烷，回收溶剂至干，残渣用流动相溶解，转移至5mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.1.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 0.1，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 μL 进样，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为A=797.395C+0.088 5，r=0.999 87(n=7)。结果表明，氢溴酸东莨菪碱进样量在0.028 5～0.285 μg范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，按拟订的色谱条件重复进样6次。结果峰面积积分值的RSD为1.36%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品，依法制备供试品溶液，依法进样测定。结果含量的RSD为2.71%(n=6)，表明方法重复性较好。

稳定性试验:取刚制备的同一供试品溶液，按拟订的色谱条件，于0，2，4，6，8，10，12 h时进样测定。结果峰面积积分值的RSD为1.24%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定性较好。

加样回收试验:取同一工艺复方浸膏(含量为3.284 mg/g)6份，每份0.05 g，分别置锥形瓶中，加入质量浓度为2.2 g/L的对照品溶液73 μL，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 东莨菪碱加样回收试验结果(n=3)

2.2 提取工艺对含量的影响

2.2.1 提取工艺

工艺Ⅰ:取处方量药材，精密称定，置150 mL圆底烧瓶，加入8倍量蒸馏水，浸泡1 h后，加热回流1.5 h，倒出提取液，再加入6倍量蒸馏水，加热回流1 h，倒出提取液，合并提取液。

工艺Ⅱ:取处方量药材，精密称定，置150 mL圆底烧瓶，加入8倍量0.02%盐酸，浸泡1 h后，加热回流 1.5 h，倒出提取液，再加入6倍量0.02%盐酸，加热回流1 h，倒出提取液，合并提取液。

工艺Ⅲ:取处方量药材，精密称定，置150 mL圆底烧瓶中，加入8倍量 0.05%盐酸，浸泡1 h后，加热回流1.5 h，倒出提取液，再加入6倍量0.05%盐酸，加热回流1 h，倒出提取液，合并提取液。

工艺Ⅳ:取处方量药材，精密称定，加入3倍量氨水浸润2 h，加入8倍量80%乙醇，加热回流1.5 h，倒出提取液，再加入6倍量酸液，加热回流1 h，倒出提取液，合并提取液。

工艺Ⅴ:取处方量药材，精密称定，加入3倍量8%氨水浸润2 h，加入8倍量80%乙醇超声(功率500 W，频率40 kHz)提取40 min，倒出提取液，再加入6倍量80%，超声提取20 min，倒出提取液，合并提取液。

工艺Ⅵ:取处方量药材，精密称定，置渗漉缸，加入3倍量8%氨水，浸润2 h，用14倍80%乙醇渗漉，收集流出液。

2.2.2 样品含量测定

取上述各工艺提取液，减压浓缩，真空干燥，取 0.1 g，按2.1.1项下供试品溶液制备方法制备待测溶液，按拟订的色谱条件进样检测，计算含量。结果见表2。

表2 不同提取工艺考察结果(n=3)

3 讨论

由表2可见，复方药材用酸水直接加热提取(工艺Ⅱ和Ⅲ，东莨菪碱提取效果比其他提取工艺更高，且酸水加热提取的工艺简单、高效，适合工业化生产。

含量测定时比较了浓氨试液调pH对结果的影响，pH为9时三氯甲烷振摇提取可得到更高的含量，pH为10时东莨菪碱不出峰。还对三氯甲烷振摇提取的次数进行了考察，以振摇提取5次的累计结果为100%，考察发现，振摇提取3次只能提取到87.77%，而振摇提取4次能达到98.22%，故本试验采取振摇提取4次，既能节省成本，又可达到较大的提取率。

[1]霍务贞，吴燕红，袁旭江，等.喘平复方制剂麻黄药材质量筛选分析[J].时珍国医国药，2009，20(6):1 377 －1 378.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:250.