HPLC法测定生姜配方颗粒中6-姜辣素的含量

周记磊, 韦红言, 梁冰丽, 陆东, 郑宇, 黄萍萍, 吴家彬, 温庆伟

生姜来源于姜科植物姜Zingiberofficinale Rosc.的根茎[1]，系姜的新鲜根茎。味辛、性微温，归肺、脾、胃经，具有解表散寒、温中止呕、化痰止咳的功 效[2]。主要用于治疗风寒感冒、胃寒呕吐、寒痰咳 嗽[3]。但因新鲜生姜储存较困难，故很多药房均无法向患者提供药用生姜。中药配方颗粒是指在中医药理论指导下，采用现代生产工艺，以水作为提取溶媒，对药材饮片进行煎煮，过滤，浓缩，干燥，制粒等工序制备得到的提取物制剂[4]。生姜配方颗粒具有储存方便，调剂精确，口感较好的特点，解决了医院药房无法长期储备生姜的问题。生姜配方颗粒目前尚无其含量测定方法。为了控制药品质量，本文建立了生姜配方颗粒中6-姜辣素的高效液相色谱测定方法，该方法操作简便，可用于生姜配方颗粒的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1260高效液相色谱仪（美国）：G1311C四元泵（内置真空脱气机）、G1315D DAD检测器、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱；OpenLAB CDS ChemStation数据处理工作站；Sartorius BP210S电子分析天平（德国）、GR-202电子分析天平；KQ-500DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

6-姜辣素对照品（批号：MUST-11030401，成都曼斯特生物科技有限公司提供）；生姜配方颗粒（批号：A101210、A100566、A110458、A100105），由培力（南宁）药业有限公司提供。

甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余均为分析纯。

2 方法与结果

2 .1 色谱条件

色谱柱：Merck Lichrospher RP-18e（4.6×250 mm，5 µm）；流动相：乙腈-甲醇-水（40:5:55）；检测波长：280 nm；柱温：25 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取6-姜辣素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含6-姜辣素0.1 mg的溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取生姜配方颗粒适量，研细，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇35 mL，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取生姜配方颗粒中所用辅料即药用糊精适量，按“2.2.2”项下的供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

图1 生姜配方颗粒高效液相色谱图

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 分别精密吸取上述6-姜辣素对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL，进样分析。结果见图1。

2.3.2 线性关系的考察 分别精密吸取“2.2.1”项下6-姜辣素对照品储备液各2 µL，4 µL，6 µL，8 µL，10µL，12 µL，14 µL，16 µL按上述色谱条件注入液相色谱仪，以进样量（µg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得6-姜辣素回归方程：Y=525.50X-1.51（r=1.0000，n=8）。结果表明：6-姜辣素进样量在0.24 µg～1.90 µg范围内时，峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验 精密吸取6-姜辣素对照品溶液8µL，重复进样6次，测定峰面积，其RSD（%）为0.41%。结果表明，仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别于0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h进样20 µL，测定峰面积，其RSD（%）为1.71%，结果表明供试品溶液在24小时内稳定。

2.3.5 重复性试验 取同一批样品，研细，取6份，每份约2 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液各20 µL进样，测定峰面积，结果6-姜辣素含量的RSD（%）为1.6%，小于2.0%，说明本方法重复性较好。

2.3.6 加样回收率试验 取已知含量（0.916 mg﹒g-1）的本品5份，每份约1 g，精密称定，分别精密加入适量的对照品，照“2.2.2”项下方法，制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液20 µL进样，采用上述色谱条件进行测定。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

6-姜辣素平均回收率为96.03%，RSD（%）小于2.0%，说明本方法准确度较好，适用于定量分析。

2.3.7 样品含量测定 取四批生姜配方颗粒（批号：A101210，A100566，A110458，A100105）各约2 g，精密称定，照“2.2.2” 制得供试品溶液，按以上色谱条件，进样测定。结果见表2。

表2 4批样品含量测定结果

3 讨论

3.1 提取方式及提取溶剂的选择

6-姜辣素分子结构中含有10个碳的烷基侧链，脂溶性较大，甲醇对其具有较好的溶解性能。样品的制备方法考察时以甲醇、80%甲醇、乙醇、80%乙醇作为提取溶剂进行考察，结果也表明甲醇作为提取溶剂测得样品的含量较高。另外，采用甲醇超声方式，可避免高温对6-姜辣素的影响。

3.2 检测波长的选择

6-姜辣素在230 nm和280 nm波长处有最大紫外吸收，尽管230 nm处的紫外吸收较大，但其处于吸收曲线的肩峰位置，容易受到溶剂峰的干扰，且仪器的细微偏差对测定结果的影响较大。所以，选择280 nm为检测波长可以满足测定的需要，保证结果的准确性。

3.3 流动相的选择

通过对流动相：乙腈-甲醇-水（40:5:55）[1]和乙腈-水（40:60）[5]进行实验比较，结果乙腈-甲醇-水（40:5:55）溶剂系统分离效果好，故选择本系统为流动相。

3.4 含量限度

以上四批生姜配方颗粒中6-姜辣素的含量为0.35~1.58mg﹒g-1，平均为0.995mg﹒g-1；不同批次之间的含量差异较大，主要是因为不同批次的生姜原药材中6-姜辣素含量不稳定的缘故。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版一部）[S]. 北京: 中国医药科技出版社,2010.

[2] 王建,张冰.临床中药学[M].北京:人民卫生出版社,2012.

[3] 高学敏.中药学[M]. 北京: 中国中医药出版社,2012.

[4] 郭玫,余晓辉,邵晶.中药配方颗粒研究概况[J].河南中医学院学报, 2003, 18(107): 86.

[5] 阎东海. HPLC测定生姜精油中6-姜酚含量[J]. 药物分析杂志, 2007, 27(5): 733.