解除附件扭转对兔卵巢组织MDA、GSH-Px和CAT的影响

于月新，李巨，陈佳，樊宝剑，颜宇博

附件扭转(adnexal torsion，AT)是妇科常见的急腹症之一，主要由缺血和保留卵巢术后的再灌注损伤引起。扭转发生后，卵巢静脉和动脉血流依次受阻，导致卵巢组织发生充血、水肿及缺血性损伤，产生大量氧自由基，导致蛋白质降解、核酸断裂、线粒体变性、崩解，最终造成细胞死亡。本研究观察附件扭转后再灌注对家兔卵巢谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的影响，以期为临床治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及设备 GSH-Px、CAT、MDA生化检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。HERAEUS Pico 17离心机(德国Thermo公司)；UV-1700 Pharmaspec紫外分光光度计(美国Shimadzu公司)。

1.2 实验动物及分组 雌性成年日本大耳白兔40只，8～12月龄，体重2.5～3.0kg，由沈阳军区总医院实验动物中心提供[合格证号：SCXK(军)2007-001]。随机分为实验组(n=32)和对照组(n=8)。实验组附件扭转24h后解除扭转，再按随机排列表法分成4组，每组8只，分别于再灌注24、48、72、96h后取双侧卵巢组织，以右侧卵巢作为内对照。动物采用笼中独立饲养方法，自由饮食，适应性饲养1周后进行实验。

1.3 附件扭转模型制作 实验兔称重后以氯胺酮40mg/kg肌内注射，待四肢松软、睫毛反射消失后将其仰卧固定于手术台。取下腹部正中长约6cm切口，逐层切开入腹腔，暴露双侧子宫和输卵管、卵巢，观察并记录其大小及颜色。将实验组兔左侧附件按顺时针方向旋转3周，并固定于左侧腹壁，卵巢1min后由灰白变成红色表明扭转成功。24h后解除扭转，分别于再灌注24、48、72、96h后取双侧卵巢组织。对照组仅开腹后提拉出左侧附件至切口，再放回原处关腹，96h后取双侧卵巢组织。

1.4 MDA、GSH-Px与CAT测定 将取出的卵巢组织置于–80℃保存，收集标本后按南京建成生物工程研究所提供的检测试剂盒说明书分别测定卵巢组织中MDA、GSH-Px、CAT的活性或含量，其中GSH-Px活性检测采用DTNB法，CAT活性检测采用可见光法，MDA含量检测采用硫代巴比妥酸法。

1.5 统计学处理 计量资料以x±s表示，采用SPSS 11.5软件进行单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 术后一般情况 40只兔均存活，实验组附件扭转24h后可见腹腔内程度不等粘连，子宫及右附件未见明显异常，左侧卵巢及输卵管水肿、充血，呈紫色或紫黑色。对照组及实验组各组肛温、心率、呼吸频率比较无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 再灌注后各组兔卵巢及输卵管肉眼所见 附件扭转24h后解除扭转，再灌注24h后卵巢及输卵管颜色5只呈紫色，2只呈浅红色，而48h后1只呈紫色，3只呈浅红色，72h时4只呈浅红色，2只颜色恢复正常，96h后8只颜色全部恢复正常。

2.3 GSH-Px活性检测 附件扭转解除后24h至72h，实验组左侧卵巢GSH-Px活力与对照组比较明显下降(P＜0.01)，96h后与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05，表1)。

2.4 MDA含量检测 附件扭转解除后24h及48h，与对照组、实验组右侧卵巢比较，实验组左侧卵巢MDA含量明显上升(P＜0.01)，72h后开始下降，96h后与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05，表1)。

表1 兔卵巢GSH-Px、CAT活性及MDA含量比较(n=8)Tab.1 Comparison of GSH-Px, CAT activity and MDA level in ovaries of rabbits n=8)

表1 兔卵巢GSH-Px、CAT活性及MDA含量比较(n=8)Tab.1 Comparison of GSH-Px, CAT activity and MDA level in ovaries of rabbits n=8)

Item Control group Study group Left ovary Right ovary GSH-Px(U/ml)24h 197.73±9.85(1) 0.429±0.214 48h 163.71±11.07(1)0.531±0.381 72h 291.56±18.67(1)(2)0.324±0.257 96h 382.31±16.95 368.79±17.67(4)0.562±0.471 CAT(U/ml)24h 36.63±1.02(1)(5)75.34±1.87 48h 25.63±0.88(1)(3)(5)72.42±1.39 72h 71.69±1.82(2) 69.79±1.83 96h 78.69±1.82 96.55±1.89(1)(4)73.63±1.31(1)P＜0.01 compared with control group; (2)P＜0.05 compared with 48h; (3)P＜0.01 compared with 24h; (4)P＜0.05 compared with 72h; (5)P＜0.01 compared with right ovary

2.5 CAT活性检测 附件扭转解除后24h及48h，与对照组、实验组右侧卵巢比较，实验组左侧卵巢CAT活力明显下降(P＜0.01)，而实验组右侧卵巢与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。72h后，实验组左侧卵巢CAT开始升高，但与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，96h后与对照组比较明显升高(P＜0.05，表1)。

3 讨 论

AT是妇科急诊手术的第五大常见病因，扭转的发生常牵涉卵巢损伤和不育，对扭转的卵巢进行保守性处理非常棘手[1-2]。有研究表明，附件缺血-出血性的蓝黑色外观是静脉、淋巴淤滞的结果，但不是坏疽[3]，附件扭转后卵巢静脉内的血液回流首先受阻，卵巢血供减少或停止可能导致机体氧化应激和抗氧化防御体系的失衡，因此卵巢扭转-扭转复位造成的损伤类似于其他器官的缺血再灌注损伤[4]。

内源性抗氧化酶包括GSH-Px、CAT等，是组织抗氧化应激的敏感指示剂，作为机体重要的抗氧化系统它决定了机体对抗氧化损伤的能力[5-6]。因此在缺血/再灌注过程中，通过检测GSH-Px、CAT的活力可以反映机体缺血再灌注损伤的程度。MDA是脂质过氧化产物的一种，其含量可反映机体脂质过氧化程度，进而判断细胞损伤的程度[7]。测定附件扭转后卵巢组织中GSH-Px、CAT的活性以及MDA的含量可推测体内自由基代谢的情况。

本研究发现，实验组右侧卵巢与对照组卵巢组织相比，GSH-Px、CAT、MDA活性无明显变化，而实验组左侧卵巢再灌注24h后MDA开始升高，48h达高峰，72h开始下降，96h接近正常。附件扭转解除后24h至72h，实验组左侧卵巢GSH-Px活力明显下降，96h后恢复正常。实验组左侧卵巢附件扭转解除后24h及48h，CAT活力明显下降，72h后开始升高，96h后达高峰。表明附件扭转后卵巢组织缺氧，解除扭转后卵巢因再灌注损伤产生大量氧自由基，MDA含量显著增多，从而破坏卵巢细胞。而GSH-Px、CAT含量于48h下降，显示再灌注早期卵巢抗氧化应激能力损伤。

本研究还发现，附件扭转24h后解除扭转，再灌注24h后卵巢及输卵管颜色5只呈紫色，2只呈浅红色，随时间进展，卵巢及输卵管颜色逐渐变浅，96h后8只颜色全部恢复正常，而卵巢组织中的GSH-Px、CAT活性于再灌注24h后明显降低，随时间进展，48h组下降达低谷，72h有所上升，96h后基本恢复正常。可见附件扭转后解除扭转对卵巢造成了明显的再灌注损伤，以48h时最为显著，随时间延长，损伤逐渐减轻，表明再灌注后早期卵巢产生了氧化应激损伤，随时间进展，损伤逐渐减轻，卵巢经历了再灌注损伤的恢复过程，这可能与扭转解除后血供逐渐恢复，由局部产生的GSH-Px、CAT逐渐恢复或升高、MDA逐渐清除有关。因此，附件蒂扭转发生后如能及时手术，卵巢的缺血再灌注损伤是暂时的。

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