黄红糖浆的提取工艺及质量标准研究

★ 卢潇潇 钟强* 邓中银

（1.江西省萍乡市人民医院 萍乡 337000；2.江西中医学院 南昌 330004）

黄红糖浆（HHS）是由黄精、红参等4位中药材制成的中药复方制剂，具有益气养阴，健脾运津、生津止渴之功效，临床常用于阴虚火旺、自汗盗汗、五心烦热等证的治疗，效果显著。其中多糖类是主要活性成分之一，具有降血脂、延缓衰老、增强免疫以及抗病毒等诸多药理作用[1]。多糖提取一般有热水浸提法、碱水提取、超声提取法等方法[2]。本文根据方中药材的理化性质，以总多糖含量为指标，采用正交试法优选黄红糖浆的提取工艺条件，并建立其方中黄精药材的薄层鉴别方法。以期为该制剂的研究开发提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV2550型紫外分光光度计（日本岛津）；BS224S型电子分析天平（北京Sartorius）；6202型摇摆式高速中药粉碎机（北京环亚天元机械技术有限公司）。KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。DFY-500型摇摆式高速中药粉碎机（温岭市林大机械有限公司）。

1.2 材料

D-无水葡萄糖对照品（批号：110833-200904，含量测定用），黄精对照药材（批号：121341-200602），购于中国药品生物制品检定所；黄精药材系百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.的干燥根茎，批号：100319，购于黄庆仁大药房，经检测符合《中国药典》2010年版一部相关项下标准；试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。

2 方法及结果

2.1 总多糖含量测定

2.1.1 苯酚溶液的配制 称取苯酚6g，加入蒸馏水94mL，摇匀，置棕色容量瓶中备用。

2.1.2 葡萄糖对照品溶液的制备 称取吸取D-无水葡萄糖标准品9.99mg置于100mL的容量瓶中，加双蒸水溶解稀释到刻度，得到浓度为99.9μg/mL溶液，摇匀，备用。

2.1.3 标准曲线的制备 分别量取D-葡萄糖标准液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0mL分置于10mL具塞试管中，各加双蒸水到2.0mL，再加质量分数为6%苯酚溶液1.0mL，用涡旋仪器混匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，再涡旋使之均匀，放置5min后，置沸水浴中加热15min，取出迅速放在冰水中冷却至室温；另以双蒸水2.0mL，加苯酚和浓硫酸，同上操作做为空白对照，在最大吸收波长（490nm）处测定吸光度值，结果由吸光度值（A）对溶液浓度（C）线性回归，得回归方 程 Y=0.0525X+0.0989，R=0.9993，葡 萄 糖 在2.5-12.49μg/mL范围内呈线性。

2.1.4 供试品溶液的制备及测定 精密量取提取液1.5mL，加入95%乙醇，使含醇量达80%，于冰箱中静置过夜，沉淀用无水乙醇洗涤至洗出液无色，挥干乙醇，用蒸馏水溶解，于250 mL量瓶中定容。精密吸取0.3 mL上述溶液于10 mL具塞试管中，加水至1 mL，精密加入5%苯酚溶液1 mL，再精密加入硫酸溶液5 mL，摇匀，置100℃水浴中加热15 min，取出室温下冷却30 min。同法制得空白对照液。于490nm处测定吸光度，算得多糖的质量浓度。

2.2 正交试验优化提取工艺

准确称取处方量药材（过药典1号筛）置500 mL圆底烧瓶中，分别按正交试验表条件，加入提取溶剂，回流提取，趁热过滤，合并滤液，待溶液冷却后用相应的溶剂定容，摇匀，即得。因素水平表见表1，正交试验表及结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 正交试验的因素与水平

表2 正交试验设计与结果

表3 正交试验方差分析表

由表3中极差R可知，以总多糖含量为指标，各因素影响因素主次顺序为提取次数（C）＞提取时间（B）＞加水量（A），由方差分析结果可知，提取次数和提取时间对总多糖提取量有显著性影响，加水倍数对其无显著性影响。综合分析，总多糖的最佳提取条件为A3B3C3，即：加水10倍量，提取3次，每次1.5h。

2.3 验证工艺研究

取处方量药材共500g，加8倍量水，提取3次，每次2h，合并滤液，减压浓缩至药液浓度约为0.5g/mL，测定样品液中总多糖含量。总多糖含量平均为95.5 mg/g。

2.4 黄红糖浆中黄精的鉴别试验研究

2.4.1 供试品溶液的制备 取HHS样品40g，加水10mL稀释。用水饱和的正丁醇振摇萃取3次，每次50mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解。作为供试品。

2.4.2 黄精对照药材溶液的制备 取黄精对照药材3g，加水50mL，提取2次，每次2h，合并滤液，滤过。提取液浓缩至50mL，再同2.4.1项下方法，同法制成对照药材溶液。

2.4.3 缺黄精阴性对照溶液的制备 取不含黄精的糖浆样品，按2.4.1项下方法同法制备阴性对照溶液。

2.4.4 薄层鉴别 吸取上述供试品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮（6：3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与黄精对照药材溶液相应位置上显一个相同颜色的斑点，而阴性样品在相同位置上无相应斑点。（见图1）。

图1 黄红糖浆薄层色谱图

4 讨论

4.1 本实验主要对黄红糖浆的提取工艺和其质量标准进行了研究，由于方中黄精、红参等药材中主要含多糖类成分，且多糖具有调节免疫力和抗氧化作用，黄精多糖能保护APP转基因小鼠海马CA1区突触结构[3]，因此，本研究选择总多糖含量为评价指标，对处方工艺进行了优化。

4.2 应用薄层色谱法（TLC）鉴别糖浆中黄精的过程中，比较了不同展开系统及不同的薄层板，结果以氯仿-丙酮（6：3）最为合适。黄精对照药材与样品色谱图在对应位置斑点清晰，且阴性样品在相同位置无干扰。

4.3 总多糖是中药补益和调节免疫作用的有效成分，应作为质量控制和评价指标之一，梁学政等[4]在优化弱视明口服液的提取工艺过程中也采用苯酚-硫酸法测定总多糖的含量，并以总多糖作为工艺评价的指标。但是苯酚-硫酸法测定总多糖的含量干扰因素较多，样品的处理必须注意平行操作，且所有样品应在同一条件下测定，以减少偶然误差。此外，也有文献报道[5]使用比色法测定总多糖的含量。

[1]张庭廷，夏晓凯，陈传平，等.黄精多糖的生物活性研究[J].中国实验方剂学杂志，2006，12（7）：42.

[2]张伟杰，王鹏，林茜，等.3种中药多糖的提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（16）：19-23.

[3]成威，田伟，李友元，等.黄精多糖对APP转基因小鼠海马CA1区突触结构的影响[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（10）：165-167.

[4]梁学政，陈惠红，唐勇琛，等.正交试验优选弱视明口服液的提取工艺[J].中国药房，2011，22（31）：2 914-2 916.

[5]喻雄华，张大舜.不同方法炮制的黄精中多糖含量的比较[J].中国医院药学杂志，2006，26（11）：1 306-1 307.