柴芍疏肝颗粒质量标准研究

★ 李素梅 陈雪婷 李养学 程青云 (.广东省中医研究所 广州50095;.广州中医药大学广州50405)

柴芍疏肝颗粒由柴胡、白芍、当归等中药组成，具有疏肝解郁、养血健脾、行气止痛散结等功效。适用于肝郁气滞型等良性乳腺疾病，甲状腺良性疾病等。为了更好地控制其质量，保证其临床疗效，本实验采用TLC法对其中所含柴胡、白芍、当归进行定性鉴别，采用HPLC法对方中所含芍药苷进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

CAMAG TLC SAMPLER 4型自动点样仪(瑞士);CAMAG Reprostar3薄层成像系统(瑞士);Agilent 1200高效液相色谱仪(美国);Mettler XS205DU电子分析天平(瑞士);KQ5200 DE型数控超声波清洗器(昆山);电热恒温水浴槽(上海);DHG－9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海);PBQ－Ⅱ型薄层自动铺板器(重庆)。

1.2 试药

柴胡对照药材(批号:120992－200504)、白芍对照药材(批号:120905－200508)、当归对照药材(批号:120927－200512)、芍药苷对照品(批号110736－201035)，均购于中国药品生物制品检定所;柴芍疏肝颗粒(批号:110303、110304、110305，由广东省第二中医院制剂室提供);乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 薄层色谱定性鉴别

2.1 柴胡定性鉴别［1－2］

取本品研细粉末5 g，加甲醇30 mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，加氨试液40 mL洗涤，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材1 g，加水50 mL，煮沸30分钟，放冷，滤过，滤液加水饱和正丁醇振摇提取2次，同法制成柴胡对照药材溶液。再取缺柴胡的阴性样品5 g，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述供试品溶液15 μL、柴胡对照药材溶液5 μL，阴性照溶液15 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正丁醇－乙酸乙酯－稀氨水(1→10)(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开槽中，展开，取出，晾干，喷以1%对二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液(1→10)，105℃加热至斑点显色清晰，紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰(见图1)。

图1 柴胡TLC图谱(1 ～3、供试品，4、柴胡对照药材，5、柴胡阴性对照)

2.2 白芍定性鉴别

取本品研细粉末5 g，加甲醇30 mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材1 g，加甲醇30 mL，同法制成白芍对照药材溶液。再取缺白芍的阴性样品5 g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液、白芍对照药材溶液、阴性对照溶液各5 μL，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯－甲酸 －冰乙酸(7∶2∶0.2∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点，阴性对照无干扰，见图2。

2.3 当归定性鉴别［3］

图2 白芍TLC图谱(1 ～3、供试品，4、白芍对照药材，5、白芍阴性对照)

取本品研细粉末3 g，加甲醇30 mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解(必要时滤过)，滤液加乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5 g，加乙醚20 mL，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取缺当归的阴性样品3 g，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液各2 μL、对照药材溶液4 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图3。

图3 当归TLC图谱(1 ～3、供试品，4、当归对照药材，5、当归阴性对照)

3 芍药苷含量测定［4］

3.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Extend C18柱(4.6mm×250mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.1%磷酸水溶液(14∶86);波长:230 nm;流速1 mL/分;柱温:25℃。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。

3.2 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含96.5 μg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备

取本品研细粉末约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.4 方法学考察

3.4.1 阴性干扰试验 取缺白芍的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，进样，测定，结果表明，处方中其他药味无干扰，色谱图见图4。

图4 芍药苷HPLC色谱图1芍药苷;A对照品HPLC色谱图;B供试品HPLC色谱图;C阴性对照HPLC色谱图

3.4.2 线性关系考察 精密称取芍药苷对照品12.88 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.1288mg芍药苷的对照品溶液，从中分别精密吸取2、4、6、8、10mL，置10mL 量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度，摇匀，制成浓度分别为 25.76、51.52、77.28、103.04、128.8 μg/mL的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以对照品峰面积积分值(Y)为纵坐标，进样量(X，μg)为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=563.808 33X－0.739 124(r=0.999 9)，结果表明芍药苷进样量在0.2576－1.288 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

3.4.3 精密度考察 精密吸取对照品溶液(128.8 μg/mL)10 μL，连续进样6次，按照上述色谱条件测定，结果芍药苷平均峰面积为 724.4377，RSD=0.21%(n=6)，表明仪器精密度良好。

3.4.4 重现性试验 取同一批样品(批号110303)6份，按上述供试品溶液方法和色谱条件测定，结果芍药苷平均含量为 2.42 mg/g，RSD=1.09%，(n=6)，表明方法重现性好。

3.4.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12 小时进样 10 μL，按上述色谱条件测定峰面积，结果芍药苷峰面积 RSD为 RSD=0.34%，表明供试品溶液在12小时内稳定性良好。3.4.6 加样回收试验 取已知含量的样品(批号110303)约1.0 g，6份，精密称定，加入一定量的芍药苷对照品，按照供试品溶液制备方法处理样品，进样10 μL，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果(n=6)

3.4.7 样品含量测定 取三批样品(批号110303、110304、110305)约2 g，精密称定，按上述供试品溶液处理方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以外标法计算含量，三批样品测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果

4 讨论

薄层定性鉴别中，柴胡的鉴别曾参考《中国药典》2010年版一部263页柴胡鉴别项下方法，但背景较深，不利于鉴别。经试验摸索，建立了文中所述柴胡TLC鉴别方法，斑点清晰，且阴性对照无干扰。

芍药苷含量测定方法，参照2010版《中国药典》一部白芍含量测定项下方法，结果芍药苷分离较好，保留时间适宜，通过方法学考察，本方法准确、可靠，可作为柴芍疏肝颗粒的含量测定方法。

本文所建立的方法操作简便、准确可靠，重现性好、可作为柴芍疏肝颗粒的质量控制方法。

［1］王晓玲，郭奇慧.柴胡乳安胶囊质量控制方法研究［J］.北方药学，2011，8(5):13 －14.

［2］陈雪婷，李素梅，李养学.祛风健骨片的质量标准研究［J］.今日药学，2012，22(11):690 －692.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部，北京:中国医药科技出版社，2010:124..

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部，北京:中国医药科技出版社，2010:96.