金水宝胶囊对慢性支气管炎大鼠内皮素-1和一氧化氮含量的影响※

魏 东 支 政 高 侃 耿 惠 丁 旭 张 冬 方朝义

(河北省辛集市第二医院急诊科，河北 辛集 052360)

慢性支气管炎为气管、支气管黏膜及其周围组织的慢性非特异性炎症，临床以咳嗽、咯痰或伴有喘息及反复发作的慢性过程为特征，是一种严重危害患者身心健康的常见病、多发病，属中医学咳嗽、喘证、痰饮、肺胀等范畴。金水宝胶囊具有补肾保肺、秘精益气之功效，是临床治疗慢性支气管炎的常选药物。为研究金水宝胶囊对慢性支气管炎的作用特点和机制，我们应用金水宝胶囊干预慢性支气管炎大鼠，并检测了大鼠内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)的含量变化，结果如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康SD大鼠50只，雌雄各半，体质量(200±20)g，由河北省实验动物中心提供，动物合格证号：冀医动字04057号。饲养于12 h光照/12 h黑暗的环境中，自由摄食和饮水。室温控制在18～22 ℃，日照充足，相对湿度维持在60%～70%。

1.1.2 实验药物 金水宝胶囊(江西济民可信金水宝制药有限公司，国药准字Z10890003)，实验时用蒸馏水配制成所需浓度的混悬液；桂龙咳喘宁胶囊(山西桂龙医药有限公司，国药准字Z20053135)，实验时用蒸馏水配制成浓度为0.09 g/mL的混悬液。

1.1.3 主要试剂 ET放免药盒由中国人民解放军总医院科技开发中心放免所提供；NO试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组 将50只SD大鼠随机分为5组，即空白对照组、模型对照组、金水宝胶囊低剂量组、金水宝胶囊高剂量组和阳性药对照组，每组各10只。

1.2.2 模型制备 除空白对照组外，其余4组大鼠用1%戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定于操作台，暴露声门，以静脉套管针代替气管导管，拔除针芯，快速插入气管，将脂多糖(LPS)(美国Sigma公司提供) 200 μg注入气管内。空白对照组大鼠气管内滴入0.9%氯化钠注射液0.5 mL/只。

1.2.3 给药方法 金水宝胶囊低、高剂量组分别予0.03、0.06 g/mL的金水宝胶囊混悬液，每日1次灌胃，每日用药剂量为0.3、0.6 g/kg，分别相当于临床成人用药量的7、14倍。阳性药对照组予0.09 g/mL的桂龙咳喘宁胶囊混悬液，每日1次灌胃，每日用药剂量0.9 g/kg，相当于临床成人用药量的14倍。空白对照组、模型对照组予0.9%氯化钠注射液10 mL/kg，每日1次灌胃。5组均于造模结束后第2 d起连续灌胃给药21 d。大鼠给药剂量换算参照文献[1]。

1.3 样本制备及指标检测 灌胃给药结束后第2 d，断头取血，立即以4 ℃ 3 500 r/min离心5 min，分离血浆，并取血清，-20 ℃冻存待检。肺组织匀浆的制备：将肺组织用冰0.9%氯化钠注射液冲洗，滤纸吸湿后，称取湿质量0.3 g左右，加入预冷的0.9%氯化钠注射液，用电动匀浆器研磨，镜检未见完整细胞，制成10%的肺组织匀浆。4 ℃ 6 000 r/min离心5 min，提取上清液，用双缩脲法测定蛋白含量，-20 ℃冻存待检。ET-1采用放射免疫法，NO采用硝酸还原酶法。

2 结 果

2.1 各组大鼠血浆、肺组织中ET-1含量变化 见表1。

表1 各组大鼠血浆、肺组织中ET-1含量变化 ±s

与空白对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，△P<0.01；与金水宝胶囊低剂量组比较，#P<0.05，##P<0.01；与阳性药对照组比较，◇P<0.05

由表1可见，模型对照组大鼠血浆、肺组织中ET-1含量均高于空白对照组(P<0.01)，说明造模成功。金水宝胶囊高剂量组、阳性药对照组大鼠血浆中ET-1含量均高于模型对照组(P<0.01)，金水宝胶囊低剂量组、金水宝胶囊高剂量组、阳性药对照组大鼠肺组织中ET-1含量均高于模型对照组(P<0.01)。金水宝胶囊高剂量组、阳性药对照组大鼠血浆、肺组织中ET-1含量均低于金水宝胶囊低剂量组(P<0.05，P<0.01)。金水宝胶囊高剂量组大鼠血浆中ET-1含量低于阳性药对照组(P<0.05)。

2.2 各组大鼠血清、肺组织中NO含量变化 见表2。

表2 各组大鼠血清、肺组织中NO含量变化 ±s

与空白对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，△P<0.01；与金水宝胶囊高剂量组比较，#P<0.05，##P<0.01

由表2可见，模型对照组大鼠血清、肺组织中NO含量均低于空白对照组(P<0.01)，说明造模成功。金水宝胶囊低剂量组、金水宝胶囊高剂量组、阳性药对照组血清中NO含量均高于模型对照组(P<0.01)，金水宝胶囊高剂量组、阳性药对照组肺组织中NO含量均高于模型对照组(P<0.01)。金水宝胶囊高剂量组血清、肺组织中NO含量均高于金水宝胶囊低剂量组、阳性药对照组(P<0.05，P<0.01)。

3 讨 论

根据中医学对慢性支气管炎的传统认识和现代研究成果，我们以具有补肾保肺、秘精益气功效的金水宝胶囊对慢性支气管炎大鼠模型进行干预，观察其对慢性支气管炎过程中气道舒缩状态的作用机制。我们采用气管内滴注LPS方法复制大鼠慢性支气管炎模型，其组织病理学改变与文献报道相近[2]，符合慢性支气管炎病理学特征。

ET-1在肺血管收缩、气道平滑肌痉挛及气道和肺血管平滑肌增生等病理发展过程中起重要作用[3]。生理状态下，ET-1能被迅速降解，以防止肺支气管的过度收缩。但在病理状态下，ET-1合成释放过多，既能引起支气管平滑肌痉挛，又可通过释放多种炎性介质，促进白细胞黏附和平滑肌的增生引起气道炎症。NO是人体血管内皮细胞合成的重要物质之一，具有强大的舒张血管、抑制血管平滑肌细胞增殖及抗血小板凝集、黏附和释放活性物质的作用，可防止血管痉挛和血栓形成[4]。

本研究结果显示，采用气管内滴注LPS复制的慢性支气管炎大鼠模型，其血浆和肺组织中ET-1含量均较空白对照组明显升高(P<0.01)，血清和肺组织中NO含量则明显低于空白对照组(P<0.01)，表明在慢性支气管炎发生、发展过程中，气道炎症促使血管内皮细胞和气道上皮细胞释放ET-1，ET-1过多合成，又进一步加重了气道的炎症反应和组织损伤。慢性支气管炎状态下，由于组织缺血缺氧，ET引起肺及周围血管强烈收缩，增加心脏负荷，此为血管活性药物的临床应用提供了理论依据。

在慢性支气管炎时，细支气管及肺组织周围有大量以淋巴细胞为主的慢性炎性细胞浸润，并引起血管内皮细胞破坏，从而使NO生成减少，消耗增加，致使ET-1和NO比例严重失调。

经用药干预，金水宝胶囊高剂量组、阳性药对照组大鼠血浆、肺组织中ET-1含量均低于模型对照组(P<0.01)，金水宝胶囊高剂量组血浆中ET-1含量明显低于阳性药对照组(P<0.05)，说明金水宝胶囊高剂量组尤其是对血浆中ET-1的释放有抑制作用。金水宝胶囊高、低剂量之间具有良好的量效关系。金水宝胶囊高剂量组、阳性药对照组大鼠血清、肺组织中NO含量均高于模型对照组(P<0.01)，提示金水宝胶囊、桂龙咳喘宁胶囊均能提高大鼠血清、肺组织中NO的活性，金水宝胶囊高剂量组的作用更加明显(P<0.05，P<0.01)。

金水宝胶囊可以有效抑制ET-1的产生，显著提高NO活性，从而恢复肺血管、支气管平滑肌正常舒缩状态，控制肺脏慢性炎症。

[1] 药理实验基础知识系列之一：给药剂量换算[EB/OL].http：//wenku.baidu.com/view/c1444b6b1eb91a37f1115c08.html.

[2] 李文杰.肺心平对肺心病肺动脉高压大鼠ET和NO的影响[J].辽宁中医杂志，2003，30(5)：348-349.

[3] 陈玲，罗文侗.慢性阻塞性肺病血浆内皮素-1含量的动态变化[J].中华内科杂志，1996，35(1)：51-52.

[4] 赵黎明，李兵，修清玉，等.持续气道正压通气对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征小型猪血浆NO、ET浓度及心肌结构的影响[J].第二军医大学学报，2009，30(6)：680-683.

[5] Barnes PJ，Belvisi MG.Nitric oxide and lung disease[J].Thorax，1993，48(10)：1034-1043.