降压药对小鼠胚胎与发育毒性影响的比较研究

胡 奇，李世芬，王玉翠，戴菲菲，钟义红，张成香，王玉邦（江苏省医药农药兽药安全性评价与研究中心，江苏 南京 210029）

高血压是最常见的心血管疾病之一，严重威胁着人类的健康。按2010年我国人口的数量与结构推算，目前我国约有2亿高血压患者[1]。根据美国国家高血压预防、诊断、评价与治疗联合委员会第7次报告（JNC-7）推荐，常用降血压西药主要有5类，分别是利尿剂、β-受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）、血管紧张素受体拮抗剂（ARB）和钙拮抗剂（CCB）[2]。降压药物的使用是高血压病治疗的主要措施，但是对于降压药的不良反应特别是对生殖系统的不良反应，报道较少。本研究从降血压中选择有代表性的药物，分别是氢氯噻嗪（利尿剂）、比索洛尔（β-受体阻滞剂）、卡托普利（ACEI）、缬沙坦（ARB）和非洛地平（CCB），研究并比较它们的胚胎与发育毒性及其差异性。

1 资料与方法

1.1 一般资料：受试样品氢氯噻嗪片为江苏方强制药厂有限责任公司生产；富马酸比索洛尔片为Salutas Pharma GmbH生产；卡托普利片为上海长城药业有限公司生产；缬沙坦分散片为哈尔滨三联药业有限公司生产；非洛地平片为济南利民制药有限责任公司生产。

1.2 动物来源与饲养：6～8周龄清洁级ICR小鼠，共200只，雌雄各半，由南京医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（苏）2008-0004。动物饲养于本中心SPF级屏障系统内，实验动物使用许可证号：SCXK（苏）2012-0041，环境温度20～25℃，相对湿度40%～70%。实验动物饮用水为无菌水，辐照灭菌饲料由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司提供。

1.3 试验方法

1.3.1 剂量分组与样品配制：各试验样品的给药剂量为治疗高血压患者推荐剂量的的10倍（按体表面积计算），氢氯噻嗪、比索洛尔、卡托普利、缬沙坦和非洛地平的剂量分别为210 mg/（kg·d）、21 mg/（kg·d）、310 mg/（kg·d）、330 mg/（kg·d）和21 mg/（kg·d），另设一个阴性对照组0 mg/（kg·d）。样品用无菌水配制，各剂量组配制浓度分别为21 mg/ml、2.1 mg/ml、31 mg/ml、33 mg/ml和2.1 mg/ml，阴性对照组用无菌水代替受试物，灌胃给予受试物10 ml/（kg·d）。

1.3.2 动物处理：试验前检疫7 d，按体重随机分为氢氯噻嗪组、比索洛尔组、卡托普利组、缬沙坦组、非洛地平组和阴性对照组，每组雌、雄各15只，交配前所有动物给药65 d（约等于小鼠2个生精周期）。雌鼠在交配期、妊娠期及产后4 d持续给药至处死。雄鼠交配期及交配后持续给药至处死。给药65 d后，雌雄动物按照1:1同笼饲养。每天早晨检查阴栓，检查到阴栓的当天记为妊娠第0天。

1.3.3 观察指标：仔鼠出生后第0天、第4天称重。每窝在出生后检查性别和数量，其他检查包括：死胎、活胎、身材和外观。亲代母鼠检查并记录着床点和黄体的数目。

1.4 统计学分析：用SPSS 10.0软件进行数据处理，方差齐时用单因素方差分析（One Way ANOVA），组间两两比较采用LSD法，方差不齐则用秩和检验。计数资料用χ2检验，仔鼠以窝为单位进行统计处理，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 降压药对胚胎死亡及出生后仔鼠死亡的影响：见表1～2。非洛地平胚泡着床后至出生前死亡数高于阴性对照组、比索洛尔组、卡托普利组与缬沙坦组（P＜0.05）。着床前死亡数和出生后死亡仔鼠数各剂量组与阴性对照组及两两组间比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表1 降压药对胚胎死亡的影响

表2 降压药对出生后仔鼠死亡的影响

2.2 降压药对仔鼠存活率的影响：阴性对照组、比索洛尔组、非洛地平组、卡托普利组、氢氯噻嗪组与缬沙坦组出生0～4 d死亡率分别为2.4%、1.2%、0.9%、2.8%、4.1%、1.6%。出生4 d存活率分别为97.6%、98.8%、99.1%、97.2%、95.9%、98.4%。出生0～4 d死亡率、出生4 d存活率各剂量组与阴性对照组及两两组间比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 降压药对仔鼠体重的影响：见图1。卡托普利组出生0 d仔鼠重、出生4 d仔鼠重和每只仔鼠增重均高于阴性对照组（P＜0.05）。其他各组各项指标与阴性对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。比索洛尔组、非洛地平组、氢氯噻嗪组与缬沙坦组出生0 d仔鼠重均低于卡托普利组（P＜0.05）；比索洛尔组、氢氯噻嗪组与缬沙坦组出生4 d仔鼠重均低于卡托普利组（P＜0.05）；比索洛尔与缬沙坦组仔鼠增重均低于卡托普利组（P＜0.05）。

图1 降压药对仔鼠体重的影响

2.4 降压药对外观畸形和生长发育的影响：比索洛尔组（168只）有1只仔鼠出现身材短小，1只仔鼠出现卷尾；非洛地平组（109只）有1只仔鼠出现身材短小；卡托普利组（111只）有1只仔鼠出现身材短小、尾巴短且卷尾，另外2只仔鼠出现身材短小；氢氯噻嗪组（172只）有2只仔鼠出现身材短小；缬沙坦组（129只）未见明显外观畸形和生长迟缓；阴性对照组未见明显畸形。

3 讨论

高血压是目前最常见的心血管疾病，现今虽已有多种降压药可供选择，利尿剂、β-受体阻滞剂、ACEI、ARB和CCB均可作为初始和维持用药，根据患者的危险因素、亚临床靶器官损害以及临床疾患情况，合理选择和使用药物。

本实验将各类降压药的胚胎和发育毒性进行比较研究，试图找出各类降压药在胚胎与发育毒性上表现的不同，实验结果也显示各类降压药对小鼠胚胎与发育毒性有明显的不同。ACEI是应用最广泛的处方降压药之一，但是可能引起先天性畸形和胎儿发育迟缓等不良反应[3-4]。此外，曾有卡托普利致胎动停止和胎儿死亡的报道[5]。本研究发现卡托普利发育毒性主要表现为外观畸形和生长迟缓。2001年澳大利亚有服用ARB出现严重的不良反应的报告，主要为胎儿子宫内死亡和新生儿早期死亡[6]。本研究未发现ARB缬沙坦有明显的发育毒性。

研究还发现，卡托普利能引起胎仔出生体重超重以及体重增重应值得关注。出生体重超重的发生与多种因素有关，目前主要与孕前体重指数、孕期增重、性别、孕龄及妊娠糖尿病有较明确的正相关，且上述危险因素间相互影响、相互促进，最终导致出生体重超重[7]。卡托普利导致出生体重超重的原因还有待进一步研究。

[1] 中国高血压防治指南修订委员会.中国高血压防治指南[J].中华高血压杂志,2011,19(8):701.

[2] Chobanian AV,Bakris GL,Black HR,et al.The seventh report of the joint national committee on prevention,detection,evalua tion,and treatment of high blood pressure:the JNC 7 report[J].JAMA,2003,289(19):2560.

[3] Cooper WO,Hernandez DS,Arbogast PG,et al.Major congenital malformations after first-trimester exposure to ACE inhibitors[J].N Engl J Med,2006,354(23):2443.

[4] Friedman JM.ACE inhibitors and congenital anomalies[J].N Engl J Med,2006,354(23):2498.

[5] 陈庆英,刘国树.常用抗高血压药物的不良反应及处理[J].药物不良反应杂志,2004,6(1):25.

[6] Martinovic J,Benachi A,Laurent N,et al.Fetal toxic effects and angiotensin-Ⅱ-receptor antagonists[J].Lancet,2001,35(2):241.

[7] 麦尔哈巴·迪力木拉提,姚丽艳.高出生体重儿的影响因素研究进展[J].海峡预防医学杂志,2013,4(19):17.