呼伦贝尔地区犬布鲁菌病血清抗体调查

高明华

（呼伦贝尔学院 生命科学与化学学院，内蒙古 呼伦贝尔021008）

布鲁菌病（Brucellosis）是由布鲁菌（Brucella）引起的一类重要的人兽共患病。根据致病性和宿主特异性，将布鲁菌分为6个种19个生物型，除绵羊附睾种布鲁菌（B.ovis）和沙林鼠种布鲁菌（B.neotomae）2个种外，其余4个种包括犬种布鲁菌（B.canis）、羊种布鲁菌（B.meltensis）、牛种布鲁菌（B.abortus）和猪种布鲁菌（B.suis）均可以感染犬。石萍等从犬体内分离到羊种布鲁菌变异菌株［1］。

犬布鲁菌病在全球多个国家和地区都有发生，而且发病数量逐年上升。我国多个省份存在犬布鲁菌病，而且感染和发病率有上升的趋势。由于我国养犬数量巨大，犬与人类接触密切，病犬作为人类布鲁菌病的传染源不容忽视，因此应加强对犬布鲁菌病的研究和防控。而目前我国兽医公报尚无犬患布鲁菌病的报告。为此我们对呼伦贝尔部分地区犬布鲁菌病血清抗体进行检测，以了解该病在当地的发生情况，并探讨其与人类健康的关系，为当地兽医、卫生行政管理部门制定相应防控措施提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血液及血清样品 采集地点为呼伦贝尔市部分地区，采集时间为2009年3月～2010年12月，犬龄1.5～6岁。无菌采取静脉血，分离血清，共196份样本，血液用于病原分离，血清－20℃保存，用于抗体检测。其中牧区牧羊犬61份、农区土犬63份和城市宠物犬72份。

1.1.2 布鲁菌病虎红平板凝集试验抗原、试管凝集抗原、阳性血清和阴性血清，购自哈药集团生物疫苗有限公司。

1.2 方法 采用布鲁菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验对血清样本进行检测。按照动物布鲁菌病诊断技术（GB/T18646－2002）的方法进行。

1.2.1 平板凝集试验 用平板凝集试验对全部被检血清进行初筛。在陶瓷凝集板上先后滴加30μL平板凝集抗原和30μL被检血清，充分混匀，观察凝集情况，同时设阳性血清和阴性血清对照。

1.2.2 试管凝集试验 平板凝集试验呈阳性的血清再进行试管凝集试验，并以试管凝集试验检测结果作为最终检测结果。（1）于96孔板第1孔内加入180μL 0.5%石炭酸，以后每孔加入90μL 0.5%石炭酸；（2）于第1孔中加入被检血清20μL，混匀后吸出10μL加入第2孔中，依次倍比稀释，最后10 μL弃去。第1孔弃去100μL。第1孔至第6孔血清稀释度分别为1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320；（3）将90μL 20倍稀释的抗原加入各孔中，振荡混匀，此时血清稀释度分别为1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640；（4）将凝集版置于湿盒内放入37℃温箱，24h后取出观察结果；（5）同时设阳性血清和阴性血清对照。

1.2.3 结果判定 （1）虎红平板凝集试验：在对照成立的前提下，被检血清在4min内出现肉眼可见的凝集现象者判为阳性；无凝集现象、呈均匀粉红色者判为阴性。（2）试管凝集试验：在对照成立的前提下，以出现50%以上凝集现象的最高稀释度为血清效价。血清效价在1∶80以上判为阳性；1∶40判为疑似反应；无凝集现象、液体均匀混浊者判为阴性。

1.2.4 血液样本布鲁菌的分离培养与初步鉴定将血清抗体阳性的全血样本接种于血琼脂培养基，37℃，于有氧和厌氧环境条件进行了布鲁菌的分离培养，3～7d后观察菌落形态并进行科兹洛夫斯基染色、镜检。

2 试验结果

2.1 血清抗体检测结果 犬血清抗体检测结果见表1。

表1 犬血清抗体检测与病原分离

本次血清抗体调查共检测了196份犬血清，其中呈阳性的为75份，占调查总数的38.27%，阴性的为121份，占调查总数的61.73%。

在检测的61份牧羊犬血清中，血清抗体呈阳性的为36份，占59.07%。检测的63份农区土犬血清中，血清抗体呈阳性的为27份，占42.86%。在检测的72份宠物犬血清中，血清抗体呈阳性的为12份，占16.67%。与何丹［2］等的检测结果相比约高出15个百分点，这可能与检测地区、时间和犬种等不同有关。

2.2 病原分离结果 共检测了75份犬血液样本用于病原分离。根据培养特性、鉴别染色和镜检等，共获得11株分离菌，其中牧羊犬、农区土犬和宠物犬血液样本中，分别获得7、3株和1株细菌，病原分离率分别为19.44%、11.11%和8.33%。占检测总数的14.67%。

3 分析与讨论

3.1 从检测结果看，3类犬布鲁菌病血清抗体检测阳性率均较高。牧羊犬的阳性率最高，为59.07%，病原分离率为19.44%。如此高的比例，与当地绵羊布鲁菌病发生较为严重有关［3］。由于牧羊犬与羊群接触密切，可以推断他们的感染与地方羊布鲁菌病持续发生和流行密切相关。农区土犬血清抗体阳性率次之，为42.86%，病原分离率为11.11%。这类犬多为看家用或肉用，以散放为主，在病原散播和疾病传播等方面起到了一定的作用。宠物犬的抗体阳性率为16.67%，与主人的关系密切，在社区内活动自由，有时在环境中随意排泄粪便，直接危害人类健康。这可能是近些年来的城镇居民感染比例在不断上升和感染人员职业多元化的主要原因之一［4］。

在病原分离方面，3类犬血液样本病原分离率均较高，说明血清抗体呈阳性的犬只带菌率较高。本次虽没有对分离菌进行种的鉴定，但无论是由犬种和是由羊种引起的，均可以感染人类。这些犬必定成为人类布鲁菌病的重要传染源。

3.2 犬布鲁菌病与人类的健康密切相关。近10多年来，布鲁菌病发病率在世界范围内呈上升趋势［5］。根据中国疾病预防控制中心（CDC）报告，我国人布鲁菌病发病严重，2007年～2011年全国布鲁菌病新发病人数分别为19 013、21 901、35 816、33 772、38 151例，呈逐年上升趋势，特别是2012年1～6月份为24 139例，已明显超过历史同期。呼伦贝尔市是布鲁菌病严重流行区［6］，农牧民占总发病数的81.11%，其他职业的占18.89%［7］。

人布鲁菌病几乎都来源于动物，除牛、羊外，由犬感染人的病例报道也日益增多［8－11］，犬也是重要传染源之一［5］。而动物布鲁菌病的报告病例远远少于人布鲁菌病报告病例，甚至出现了某些地方有布鲁菌病人而没有布鲁菌病畜的情况［12］。这表明我们对动物布鲁菌病的监测力度很不够。近些年我国政府虽致力于牛、羊、猪的布鲁菌病检疫和扑灭工作，但尚未给犬布鲁菌病以足够重视［12］。

我国是养犬大国，随着人们生活水平的提高，犬的数量还会不断增加，因此我们应控制养犬数量；实施强制免疫和病原监测相结合等措施；将肉用犬的临床检疫和兽医卫生监督列入常规检疫规范。加强对动物布鲁菌病的认识，实施以检疫、免疫、淘汰为中心的综合防控措施是有效控制人布鲁菌病的根本措施［13］。

［1］ 石萍，郝继浩，贺庆生，等.首次从犬体内分离出羊种布鲁菌变异菌株的鉴定［J］.中国地方病学杂志，1992，11（4）：205－206.

［2］ 何丹，韦海涛，施振声，等.北京地区犬布鲁杆菌病血清学调查［J］.中国兽医杂志，2009，45（2）：64－65.

［3］ 高明华，张志琰，樊庆德，等.呼伦贝尔地区绵羊布鲁菌病血清抗体调查［J］.动物医学进展，2011，32（2）：115－117.

［4］ 崔步云.中国布鲁菌病疫情监测与控制［J］.疾病监测，2007，22（10）：649－651.

［5］ 夏咸柱.宠物与人类健康［J］.中国比较医学杂志，2010，20（11－12）：5－7.

［6］ 陈文婧，崔步云，张庆华，等.内蒙古自治区布氏菌病流行50年特征分析［J］.中国地方病防治杂志，2008，23（1）：56－58.

［7］ 韩永，吉祥，雷彩云.呼伦贝尔市1956－2008年布鲁菌病疫情流行特征［J］.宁夏医学杂志，2009，31（11）：1071－1072.

［8］ Wallach J C，Giambartolomei G H，Baldi P C，etal.Human infection with M－strain of Brucella canis［J］.Emerg Infect Dis，2004，10：146－148.

［9］ Lucero N E，Jacob N O，Ayala S M，etal.Unusual clinical presentation of brucellosis caused by Brucella canis［J］.J Med Microbiol，2005，54：505－508.

［10］Imaoka K.Brucellosis（1999.4－2007.3）Infectious agents surveillance report in Japanese［J］.Tokyo：Ministry of Health，Labour and Welfare；and National Institute of Infectious Diseases，2007，28：227－228.

［11］Nomura A，Imaoka K，Imanishi H，etal.Human Brucella canis infections diagnosed by blood culture［J］.Emerg Infect Dis，2010，16（7）：1183－1184.

［12］周桂兰，李秀敏，郑瑞峰.犬布鲁菌病防检工作不容忽视［J］.中国兽医杂志，2001，37（11）：60.

［13］米景川，张庆华，范蒙光，等.内蒙古人间布鲁菌病的流行形势及其防治策略［J］.医学动物防制，2009，25（2）：128－129.